Thực nghiệm về vỏ cây sữa

Thực nghiệm về vỏ cây sữa

CHUONG 4 THUC NGHIEM

4.1 Hóa chất và thiết bị,

4.1.1 Hóa chất

Eter đầu hỏa 60-90°C của Trung Quốc

Benzen nhiệt độ sôi §0°C của Trung Quốc

Cloroform nhiệt độ sôi 61°C của Trung Quắc

Ethyl acetat nhiệt độ sôi 77°C của Trung Quốc

Aceton nhiệt độ sôi 56°C của Trung Quốc

Acid acetic khan của Trung Quốc

Metanol nhiệt độ sôi 65°C của Trung Quốc

Ammonium cerittm(V) suifat của Merek

Acid phosphoric 85% của Merck

Thuốc thử Dragendorff

Nước cất

Silica gel 60 (230-400 mesh) đùng cho sắc ký cột của Merek

Silca gel LiChroprep RP18 (25-40um) dùng cho sắc ký cột của Merck

Sephadex LH20

Đán mỏng tráng sẵn silica gel Fạ;¿ dày 0,25mm của Merok

4.1.2 Thiết bị

Dụng cụ dùng để ly trich Soxhlet

Máy cô quay dùng để đuổi dụng môi

Máy hông ngoai IR, higu BRURER-IFS48-Carlo Erba~-GC6130 cla Viện Hóa học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam

Máy khối phố MS, hiệu HP-5989B và máy LCMS Agilent của Viện Hóa học, Viện hoa học và Công nghệ Việt Nam

May NMR, BRUKER, tan s6 500MHz cho phé proton, 125MHz cho phé carbon

của Viện Hóa học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam

Luận văn Thạc sĩ Hóa học Nguyễn Quang Thé

4.2 Nguyên liệu

Vỏ cây Sữa Alstonia scholaris R Br, ho Trúc Đào (Apocynaceae) thu hải ở

thành phố Nha Trang, tính Khánh Hòa vào tháng 3 năm 2005, được nhận đanh bởi tiên si Hoàng Việt, Bộ môn Thực vật, Khoa Sinh, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Tp.HCM Vỏ cây đem phơi khô, lột bỏ lớp vỏ đen bên ngoài, sấy ở 60°C đến khối lượng không đổi Xay vô nhỏ thành bột (2,3kg)

4.3 Phương pháp tách chiết và cô lập các hợp chất từ cao eter đầu hóa

4.3.1 Qui trình ly trích

Bội vỏ cây khô 2,3kg được tận trích với eter dau héa (60-90°C) trong Soxhlet khoảng 100 giờ Thu hồi dung môi ở 40°C đưới áp suất kém cho cao eter dầu hóa 100g

4.3.2 Phương pháp cô lập các hợp chất,

Từ cao cter dầu hóa chúng tôi cô lập được bai hợp chat T, (acetat lupeol) va T2

(B-amyrin) bằng phương pháp sắc ký trên cột silica gel 60 voi hé dung mdi eter dầu

hỏa, eter dầu hỏa : benzen, benzen, benzen : cloroform, cloroform

4.4 Phương pháp tách chiết và cô lập các hợp chất từ cao benzen,

4.4.1 Qui trình ly trích

Bột cây sau khi trích với eter dầu hóa, được tiếp tục trích với benzen trong Soxhlet khoảng 80 giờ Dịch trích, cô quay thu hồi dung môi đưới áp suất kém cho cao benzen (188)

4.4.2 Phương pháp cô lập

Từ cao benzen, chúng tôi sắc ký trên cột silica gel với hệ đụng môi (benzen,

eloroform và metanol) cho phân đoạn B& Lig (voi dung mdi gidi ly cloroform-

raetanol 93:3) và phân đoạn B10 0,5g (với dụng môi giải ly là cloroform-metanol

Phân đoạn Bồ tiếp tục sắc ký trên cội silica gel thêm hai lần với các hệ dung môi lần lượt là cloroform, etil acetat, metanol và hệ dung môi cloroform, metanol

Luận văn Thạc sĩ Hóa học Nguyễn Quang Thế

52

Sau đó tinh chế trên cột pha dao RP18 25-40 um vei hệ dung mdi nude-metanol (7:3) thu được hợp chất B38.47 (11mg)

Phân đoạn B10 tiếp tục sắc ký trên cột silica gel với hệ dung môi cloroform, metanol thu được hợp chất B52 dang bét mau tring (300mg)

4.5 Phương pháp tách chiết và cô lập các hợp chất từ cao cloroform

4.5.1 Qui trình ly trích

Bột cây sau khi trích với benzen, được tiếp tục tận trích với chioform trong

Soxhlet khoang 80 gid, dich trích đem thu hồi dung môi dưới áp suất kém cho cao cloroform (11g)

4.5.2 Phương pháp cô lập

Từ cao eloroform, chúng tôi tiến hành sắc ký nhiều lần trên cột silica gel và trên

cột Sephadex LH20, cuối cùng cô lập được hai alkaloid AL1 và AL2