P3 thực nghiệm thành phần hóa học thân cây dó bầu

P3 thực nghiệm thành phần hóa học thân cây dó bầu

3 THỰC NGHIỆM

3.1 Các điều kiện thực nghiệm:

Sắc ky ban méng trén ban silica gel tráng sẵn (Merck, Kielselgel 60 Fos54, 250 am) hay sắc ký bản mỏng pha đảo (Mecrk, RP-18 Fy54)

Sắc ký cột được thực hiện trên silica gel (40-60 um, Merck), RP,, (40 Hm, Merck)

Các cấu tử trên bản mỏng được phát hiện bằng đèn tử ngoại hoặc dùng thuốc hiện hình là acid sulfuric dam đặc, nóng

Đùng môi thực nghiệm là dung môi chưng cất: aceton (55-56"C) diclorometan (41-42°C), cloroform (61-62°C), acetat etil (76-77?C) và metanol (64-65°C)

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân ghi trén may Bruker AV500 [500 MHz CH) va

125 MHz (C)] với TMS là chất nội chuẩn chloroform-d,, aceton-dy, DMSO-d,

là dụng môi

3.2 Thu hái, xử lý và điều chế cao

Thân cây dó bầu được thu hái ở Tiên Phước, Quảng Nam, vào tháng 6

năm 2006 Sau đó phơi và sấy ở 60°C đến khối lượng không đổi, đem nghiền

nhỏ và được dùng cho thực nghiệm

Thân cây dó bầu (7 kg) được trích nóng với metanol bằng phương pháp

đun hoàn lưu (ba lần) Thời gian trích mỗi lẫn là ba giờ Toàn bộ địch trích được đem cô quay áp suất kém ta thu được cao metanol thô Lấy cao thô này hoà tan

trong nước và chiết với dung mdi acetat etil thu dude cao acetat etil va dich nước

còn lại sau khi chiết

48

So dé 1 Quá trình trích ly cao từ thân cây đó bầu

7 kg thân cây

- Trích nóng với metanol ở 60°C

- Lục

7 Tho hồi dung môi

300.40 g

- Hoà tan với nước

- Trích với acetat etil đã bảo hoà nước

¥

¥ ¥

- Sắc ký cột trên silica gel với hệ

dung môi CHCH : MeOH với độ phân

cực tăng dần thu được 6 phân đoạn

3.2.1 Khảo sát phân đoạn B1

Lấy phân đoạn B1 ( 5.30 g) thu được ở dang nhựa dầu có mùi thơm nhẹ

cho vào một becher, hoà tan với etanol, Đun cách thuỷ, cho từng giọt etanol cho

đến khi dung dich mau vàng chuyển từ đục sang trong ĐỂ nguội, lọc lần một bằng phễu thuý tính xốp thu được dung dịch màu vàng Làm lạnh với hỗn hợp muối sinh hàn, lọc bằng phu thuỷ tính xốp thu được sáp và dung dich mau vàng Có quay thu hổi dụng môi ctanol thu được tình dầu ,Thành phần hoá học

Chúng tôi tiến hành ly trích tỉnh đầu bằng dung môi etanol theo sơ đồ sau:

Sơ đỗ 2 Quá trình trích ly tỉnh đầu trong phân đoạn B1

Nhựa dẫu + etanol

- Đun cách thuỷ

- Cho từ từ ctanol vào, khuấy đều cho đến khi trong suốt

- Để nguội, lọc ở nhiệt độ

-Làm lạnh bằng hỗn hợp muối sinh hàn

-Lọc Dung dich 2

-Thu héi dung mdi

Tinh dau

3.2.2 Khảo sát phân đoạn B2

Thực hiện sắc ký cột siHica gel phân đoạn B2 (1.43 g) với hệ dung ly eter dau hod :diclorometan (ti 16 6:4) ta thu được bốn phân đoạn,Tiến hành sắc ký cột

silica gel phân đoạn B21 (0.40 g) với hệ dung ly eter dau hod:cloroform (ti lệ

6:4) thu được hợp chất B212 (90 mg)

Tiến hành sắc cột silica gel phân đoạn B24 (0.63 g) với hệ dung ly eter

đầu hoả:diclorormetan (t lệ 1:1) thu được hợp chất B241 (400 mg)

50

Sơ đề 3 Khảo sát phân đoạn B2

B2 (1,43 g)

SKC,siica gel, Ep:CHCHh

(6:4)

B21 (0.40 g) B22 (0.28 g) B23 (0.02 g) B24 (0.63 g)

¥

3.2.3 Khao sat phan doan B3

Sắc ký cột silica gel phân đoạn B3 (1.37 g) vdi hé dung ly eter dầu hoả-

acetat etil 0 ~ 20% thu được 8 phân đoạn Từ phân đoạn B3§ (12§mg) tiến hành sắc ký cột silica gel với hệ dung ly chioroform : acetone với ( lệ 99;1) thu được hợp chất B38 (358mg)

3.2.4 Khảo sát phân đoạn Bá

Sắc ký cột silica gel phân đoạn B4 (2.52 g) với hệ dung ly eter dau hoa- acetat ctil 0 - 20% thu được bầy phân đoạn Kết quả được trình bày ở bảng:

Từ phan doan B44 (140 mg) sdc ky coat silica gel vdi hé dung ly eter dau hoả- acetone (tỉ lệ 95:5) thu được hợp chất B443 (20 mg)

Phân đoạn B46 (130 mg) sắc ký cột silica gel với hệ dung ly cloroform- acetat etil (tỉ lệ 95:5) thu được hợp chất B461 (25 mg), hệ dung ly eter dầu hoả-

aceton (tỉ lệ 8:2) thu được hợp chất B462 (18 mg)

Phân đoạn B47 (520 mg) thực hiện sắc ký cột siica gel với hệ dung ly eter đầu hoả-aceton (tứ lệ 9:1) thu được hợp chất B472 (169 mg)

3.2.5 Khảo sát phân đoạn B5

Phân đoạn B5 (7.02g) tiến hành sac ky cét silica gel vdi hé dung ly eter d4u hod-acetat etil (116 1:1) thu dude 7 phan đoạn

32

Phân đoạn B51 (1.25g) thực hiện sac ky cét silica gel vdi hé dung ly eter

dầu hoá-aceton (tỉ lệ §:2) thu được hợp chất B51 (416 mg)

Phân đoạn B52 (1.73g) thực hiện sắc ký cột trên sHica gel với hệ dung ly

eter dau hoả-acetat eHl (t lệ 6:4) thu được 6 phân đoạn Sắc ký cội silica gel phân đoạn B525 với hệ dung ly cloroform-rnetanol (d lệ 99:1) thu được hợp chất B525 (21 mg)

3.2.5.1 Khao sát phân đoạn 57

Tiến hành sắc ký cột silica gel phân đoạn B57 (560 mg) với hệ dung ly eter dầu hod-aceton (ti 1é 1:1), cloroform-aceton (ti 1€ 85:15), cloroform-metanol (tỉ lệ 95:5) và tiếp tục sắc ký cột ngược pha (ODS-RP-18) với hệ dung ly

metanol-nước (t lệ 3:1) thu được hợp chất B573 (54 mg)

Sơ để 4: Khảo sát phân đoạn B4

B4 (2,52 g)

SKC, silica gel

Ep : cetat etil (0-20%)

=©® 7 phân đoạn (B41-7)

B46(0.13 g)

B44(0.14 g)

SKC, silica gel

Ep: acetat etil

(95:5)

B461

(25mg)

B47(0.,52 g)

SKC, silica gel SKC, silica gel

Ep : aceton (95:5) Ep : aceton (9:1)

B462 (18 mg)

54

Sơ đồ 5: Khảo sát phân đoạn B5

BS (7,02 g)

SKC, silica gel

Ep : aceton (1 71)

™ 7 phan doan (B41-7)

B52(1.73 g)

SKC, silica gel

Ep: acetat etil

(85:15)

B524

(40mg)

SKC, silica gel

CHCl; : aceton (8:2)

B525 (21 mg)

B51(1.25 g)

B57(0.56 g)

SKC, silica gel

Ep : aceton (8:2)

SKC, silica gel

pha đảo

MeOH:H20(3:1)

B51

(416 mg)

B573

(169 mg)