Qui trinh dinh luong tong coliform

Là trực khuẩn gram âm không sinh bào tử. Hiếu khí hoặc kị khí tùy ý Có khả năng lên men lactose sinh acid và sinh hơi ở 37o C trong 2448 giờ Nhiệt độ phát triển: ()2 50o C pH:4,49,0 Nhiễm trong nước hoặc thực phẩm Coliforms được xem là nhóm vsv chỉ thị: số lượng hiện diện của chúng trong thực phẩm, nước hay các mẫu môi trường được dùng để chỉ thị khả năng hiện diện của các loại vsv khác.

QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM

Khoa công nghệ thưc phẩm

ĐẶC ĐIỂM COLIFOMRS

• Là trực khuẩn gram âm không sinh bào tử.

• Hiếu khí hoặc kị khí tùy ý

• Có khả năng lên men lactose sinh acid và sinh hơi ở 37o C trong 24-48 giờ

• Nhiệt độ phát triển: (-)2- 50o C

• pH:4,4-9,0

• Nhiễm trong nước hoặc thực phẩm

Coliforms được xem là nhóm vsv chỉ thị: số lượng hiện diện của chúng trong thực phẩm, nước hay các mẫu

môi trường được dùng để chỉ thị khả năng hiện diện của các loại vsv khác

ĐỊNH NGHĨA COLIFORMS

Coliform tổng số

Coliform

chịu nhiệt

Coliform phân

E.Coli

Coliforms phân + IMViC

VRB ( Violet Red Bile Agar)

Hòa tan các thành phần trong nước đ/c pH 7,4 ± 0,2 Đun sôi trong 2p, Không hấp khử trùng, làm MT đổ đĩa.

Môi trường và thiết bị

ĐỊNH LƯỢNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIẾM KHUẨN LẠC

NGUYÊN TẮC

 Dựa vào sự lên lên men đường lactose ở môi trường thích hợp (thạch Violet red bile)  ở

370C trong 24 giờ Sau đó được khẳng định lại trong môi trường canh Brilliant Green Bile Salt Coliforms sẽ sinh khí trong môi trường này ở 370C trong 24 giờ

Đếm các đĩa có khuẩn lạc sau 24 giờ nuôi cấy Khuẩn lạc màu đỏ đến

đỏ đậm, đường kính > 0,5 mm, có vòng tủa muối mật

KHẲNG ĐỊNH

Sử dụng môi trường BGBL

- (+) vi khuẩn tăng trưởng làm đục MT & sinh hơi

 Cấy riêng ít nhất 5 khuẩn lạc nghi ngờ của mỗi loại vào các ống nghiệm chứa môi trường

canh BGBL có ống Durham, ủ ở 370C trong 24 giờ Phản ứng được coi là dương tính khi có

sự tạo khí dù chỉ một trong 5 ống nghiệm trên

C: tổng số khuẩn lạc điếm được

n 1 : Số đĩa được giữ lại ở độ pha loãng thứ nhất

n 2: Số đĩa được giữ lại ở độ pha loãng thứ hai

V: thể tích mẫu

d: hệ số pha loãng ứng với độ pha loãng thứ nhất

R: tỉ lệ khẳng định ( số KL sinh hơi trong BGBL/ số khuẩn lạc đã cấy).

ĐỊNH LƯỢNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN

 Phương pháp MPN dựa trên nguyên tắc xác suất thống kê sự phân bố vsv trong các độ pha loãng

khác nhau của mẫu

 Mỗi độ pha loãng được nuôi cấy lặp lại nhiều lần ( 3- 10 lần)

 Các độ pha loãng được chọn lựa sao cho trong các lần lặp lại có một số lần dương tính và có một số

lần âm tính

 Số lần dương tính được ghi nhận và so sánh với bảng thống kê => giá trị ước đoán số lượng vsv

trong mẫu

 Hệ thống MPN:

Hệ thống 9 ống

Hệ thống 15 ống

 Đặc điểm:

Vi sinh vật mục tiêu phải có những biểu hiện đặc trưng trên môi trường nuôi cấy như :

Sự tạo hơi : Coliforms

Sự đổi màu : S aurius

Cho phép định lượng được mật độ vsv thấp trong thể tích mẫu lớn

Hệ thống MPN /g (ml)

MÔI TRƯỜNG

QUY TRÌNH THỰC HIỆN

- Bước 1 : Chuẩn bị mẫu

Cân 10g mẫu cho vào túi dập mẫu ( nếu là mẫu rắn) hoặc 10ml mẫu ( mẫu lỏng ) cho vào bình tam giác chứa 90ml dd SPW đã

vô trùng , và đồng nhất mẫu trong 1 phút

Bước 2 : Chuyển 1ml dung dịch mẫu pha loãng ở mỗi nồng độ 10-

1 , 10-2, 10-3 vào ống nghiệm có chứa 10ml canh LSB, mỗi nồng độ

có 3 ống lặp lại, mỗi ống nghiệm cho 1 ống Durham

Bước 3 :

+ Sau 48 giờ - các ống nghiệm được ủ ở 37o C - Ghi nhận các ống LSB sinh hơi và canh trường đục

+ Kết luận các ống LSB dương tính (+)

Bước 5 :

+ Ghi nhận số ống sinh hơi và canh trường đục ở mỗi độ pha loãng

+ Kết luận các ống BGLB ( + )

Bước 6 : Tính kết quả

- Từ kết quả thí nghiệm ta có:

• Nồng độ 10-1: có 3 ống BGLB(+)

• Nồng độ 10-2: có 1 ống BGLB(+)

• Nồng độ 10-3 : không có ống nào BGLB(+)

- Tra bảng Mac Crady :

Tra bảng MPN/100ml ta có kết quả : 430 coliform tổng / 100 ml mẫu