ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ VI SINH VẬT HIẾU KHÍ

Cấy lên môi trường cấy qui định, sử dụng hai đĩa, dùng một lượng mẫu thử quy định nếu sản phẩm ở dạng lỏng hoặc với một lượng huyền phù ban đầu quy định nếu sản phẩm ở dạng khác. Trong cùng một điều kiện, cấy các dung dịch pha loãng thập phân của mẫu thử hoặc của huyền phù ban đầu vào hai đĩa cho mỗi dung dịch pha loãng. Các đĩa này được ủ trong điều kiện hiếu khí ở nhiệt độ 300C trong 72 ± 6giờ.

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM

TPHCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM MÔN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM

ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ VI SINH VẬT

HIẾU KHÍ

NHÓM 1GVHD: PHAN THỊ KIM LIÊN

4 Nguyễn Đăng Tam 2005130266

5 Nguyễn Văn Tuấn 2005130363

TỔNG QUAN

MÔI TRƯỜNG VÀ HÓA CHẤT

QUY TRÌNH PHÂN TÍCH TÍNH KẾT QUẢ

NỘI DUNG

1 Định nghĩa

• Vi sinh vật hiếu khí là những vi khuẩn tăng trưởng và hình

thành khuẩn lạc trong điều kiện có sự hiện diện của ôxi phân tử.

• Tổng số vi sinh vật hiếu khí là tổng số những vi sinh vật

thuộc nhóm vi sinh vật hiếu khí tồn tại trong môi trường.

TỔNG QUAN VỀ VSV HIẾU KHÍ

2 Nguyên

tắc

 Cấy lên môi trường cấy qui định, sử dụng hai đĩa,

dùng một lượng mẫu thử quy định nếu sản phẩm

ở dạng lỏng hoặc với một lượng huyền phù ban

đầu quy định nếu sản phẩm ở dạng khác

 Trong cùng một điều kiện, cấy các dung dịch

pha loãng thập phân của mẫu thử hoặc của

huyền phù ban đầu vào hai đĩa cho mỗi dung

dịch pha loãng

 Các đĩa này được ủ trong điều kiện hiếu khí ở

nhiệt độ 300C trong 72 ± 6giờ

Vi sinh vật

Nguy cơ hư

hỏng Thời hạn bảo

quản Mức độ vệ sinh

ĐỊNH NGHĨA VÀ NGUYÊN TẮC

MÔI TRƯỜNG VÀ HÓA CHẤT

Môi trường - hóa chất Mục đích

Seline Pepton Water (SPW) Pha loãng mẫu

Plate count agar (PCA) Nuôi cấy vi sinh vât hiếu khí

nghiệm bằng máy rung ống nghiệm

votex, thu được nồng độ 10 -2

 Làm tương tự với các nồng độ kế

Bước 2: Pha loãng mẫu

 Lưu ý khi pha loãng mẫu

 Nồng độ pha loãng phụ thuộc vào tình

trạng vệ sinh của thực phẩm,thời gian bảo quản, điều kiện bảo quản,kinh nghiệm

người kiểm nghiệm….

 Tiến hành thao tác bên ngọn lửa đèn

cồn.Các ống nghiệm,pipet phải vô

Bước 3: Cấy và ủ mẫu

Kỹ thuật cấy và ủ mẫu

• Chọn độ pha loãng thích hợp (15-300 tế bào/1ml mẫu).

• Đối với mẫu lạ không đước ước đoán lượng vi sinh vật nhiều hay ít phải cấy nhiều nồng độ pha loãng từ thấp đến cao.

• Chuẩn bị môi trường đã tiệt trùng,để nguội

450C,đổ môi trường vào các đĩa đã chứa 1ml dịch mẫu.

4

• Xoay nhẹ đĩa theo vòng tròn nhằm trộn đều dịch mẫu với môi trường để thu được những khuẩn lạc tách rời.

5

• Khi môi trường đông lại,lật ngược đĩa,ủ trong trong tủ ổn

nhiệt ở nhiệt độ 30±1⁰C trong 72±3 giờ

• Không xếp thành chồng cao quá 6 đĩa

• Các chồng đĩa cần được tách khỏi nhau và cách xa thành và nóc tủ.

Khuẩn lạc mọc lan rộng được xem

là một khuẩn lạc đơn lẻ.

Nếu ít hơn ¼ đĩa mọc dày lan

rộng, đếm khuẩn lạc trên đĩa

phần còn lại, tính số tương ứng cho cả đĩa.

Nếu quá ¼ đĩa mọc dày lan rộng, loại bỏ đĩa đó

Trong đó:

: tổng số khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa được giữ lại từ hai độ pha loãng liên tiếp V: thể tích dịch đã cấy trên mỗi đĩa (ml)

:số đĩa được giữ lại ở độ pha loãng thứ nhất

:số đĩa được giữ lại ở độ pha loãng thứ hai

d: độ pha loãng thứ nhất đã được cấy hoặc

giữ lại

 Số khuẩn lạc ít hơn 15

Sử dụng công thức:

(CFU/g hay CFU/ml)

Trong đó N: số khuẩn lạc trên 1ml (1g) mẫu

: tổng số khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa được giữ lại từ hai độ pha loãng liên tiếp

V: thể tích dịch đã cấy trên mỗi đĩa (ml)

n :số đĩa được giữ lại

d: độ pha loãng thứ nhất đã được cấy hoặc giữ lại

Làm tròn kết quả thu được đến 2 chữ số có

nghĩa

Kết quả có dạng

trong đó 1,0≤a≤9,9 b là lũy thừa tương ứng của 10

Làm tròn kết quả thu được đến 2 chữ số có

nghĩa

Kết quả có dạng

trong đó 1,0≤a≤9,9 b là lũy thừa tương ứng của 10

Số khuẩn lạc

Độ pha loãng

Số khuẩn lạc