quy trình định tính shigella (1)

Shigellosis là một bệnh truyền nhiễm do một nhóm vi khuẩn gây ra được gọi là Shigella. Hầu hết những người bị nhiễm vi khuẩn Shigella bị tiêu chảy, sốt và đau bụng bắt đầu từ một hoặc hai ngày sau khi được tiếp xúc với vi khuẩn. Shigellosis thường tự khỏi trong 57 ngày.Tuy nhiên, nhiễm shigella với liều lượng lớn có thể dẫn đến tử vong. Shigella là một trong những nguyên nhân hàng đầu của vi khuẩn tiêu chảy trên toàn thế giới.  Hình thái khuẩn lạc: Trên MT lỏng, vi khuẩn mọc nhanh và làm đục đều MT. Trên MT đặc, khuẩn lạc tròn, lồi, bờ đều, trong, đg kính 2mm sua 24h.

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM

KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

Học Phần: Phân Tích Vi Sinh Thực Phẩm

GVHD: Phan Thị Kim Liên SVTH: Nhóm 10

???????

Shigellosis là một bệnh truyền nhiễm do một nhóm vi khuẩn

gây ra được gọi là Shigella. Hầu hết những người bị nhiễm vi

khuẩn Shigella bị tiêu chảy, sốt và đau bụng bắt đầu từ một

hoặc hai ngày sau khi được tiếp xúc với vi khuẩn. Shigellosis

thường tự khỏi trong 5-7 ngày.Tuy nhiên, nhiễm shigella với

liều lượng lớn có thể dẫn đến tử vong

TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM

Shigella là một trong những nguyên nhân hàng

đầu của vi khuẩn tiêu chảy trên toàn thế giới. Đến

năm 2006 , WHO đã báo cáo rằng Shigella gây ra

khoảng 165 triệu trường hợp bệnh lỵ nặng, với một triệu dẫn đến tử vong mỗi năm, chủ yếu ở trẻ

em tại các nước đang phát triển

• Là trực khuẩn gram âm không di động,kị khí tùy

nghi,không tạo bào tử

• Chỉ tạo acid từ đường

• topt=10÷400C, pHopt=6÷8

• Có mặt trong các loại cá, rau quả,thịt, các loại salad,

từ nước,từ phân người

ĐẶC ĐIỂM

Lên m

en glu

cos

e

khôn

g sinh hơ

i, l

ên

men manitol

(t

rừ

Shigella

dysenteri

ae

không

lên m

en man

itol

)

Hầu hết S

higella

e, c

hỉ c

ó

Shigella sonnei l

ên

men lacto

se như

ng

chậm

Khôn

g sinh H2S

,

Urease(-),ph

ản ứng

Indo

l th

ay đổi,

phả

n ứ

ng

đỏ metyl

(+), ph

ản ứng V

P

(-), phả

n ứn

g citr

at

(-), catalase(+),

oxidase(-)

Tăng sinh kỵ khí trong môi trường lỏng chọn lọc một lượng mẫu xác định.

Cấy phân lập huyền phù tăng sinh sang môi trường rắn chọn lọc

Những khuẩn lạc nghi ngờ sẽ được thử nghiệm sinh hóa và kháng huyết thanh

Dụng cụ Thiết bị

Đầu tip Pipetman (1000, 5000 µ l ) Pipetman (1000, 5000 µ l )

Môi trường và hóa chất Mục đích

MacConkey

Phân lập XLD

Hektoen Enteric Agar

Tryptone Soya Broth (TSB)

Thạch Mac ConKey (MAC)

Lysine Decarboxylase Broth

Trypticase Soy Agar TSA

• Tryptone 15g

• Peptone đậu nành 5g

• Nước cất 1 lít

QUY TRÌNH PHÂN TÍCH

Cân 25g hoặc 25ml +225ml canh thang shigella chứa novobioxin 0,5g/ml

Trộn và điều chỉnh pH đến 7,0 nếu cần/ủ kỵ khí 41,50C/16-20 giờ

Macconkey Agar XLD agar Hektoen Enteric Agar

ủ ở 370C, 20-24 giờ

Chọn 5 khuẩn lạc điển hình cấy lên thạch dinh dưỡng/ ủ 370C 20-24 giờ

Khẳng định sinh hóa

Bước 1: Tăng sinh

Cân 25g mẫu đã nghiền hoặc hút 25ml mẫu cho vào bình đã chứa sẵn 225ml môi trường TSB, lắc đều, ủ 370C trong 16-24 giờ

Bước 2: Tăng sinh chọn lọc

Cấy một lượng 25g mẫu rắn hoặc đong một thể tích 25ml mẫu lỏng với sai số cho phép 5% của phần mẫu thử đai diện cho vào bao PE, bổ sung 225ml môi trường tăng sinh chọn lọc Shigella và đồng nhất mẫu bằng máy dập mẫu trong 60 giây ủ ở 370C trong 18 giờ

Trên môi trường XLD, shigella tạo các khuẩn lạc hồng,đỏ.

Trên môi trường MAC, shigella có màu đỏ nhạt (môi trường có màu đỏ cam, hơi đục)

Bước 4: Phục hồi

Đánh dấu 5 khuẩn lạc hoặc nghi ngờ từ mỗi đĩa trên môi trường phân lập MAC, XLD sau đó cấy ria lên môi trường TSA, ủ ở 370C trong 24 giờ

Bước 5: Khẳng định sinh hóa

Thử nghiệm sàng lọc trên KIA:

• Môi trường KIA được sử dụng để thử nghiệm khả năng sử dụng các nguồn carbon khác nhau (glucose, lactose) và khả năng sinh H2S

• Cấy đâm sâu phần cột thạch và cấy ria lên phần thạch nghiêng vi khuẩn từ những khuẩn lạc điển hình/nghi ngờ lên ống thạch

nghiêng chứa môi trường KIA, ủ 370C trong 24 giờ

Mô tả thử nghiệm KIA:

Cột thạch:

• Màu vàng: glucose dương tính (lên men glucose)

• Màu đỏ hoặc không đổi màu glucose âm tính (không lên men glucose)

• Màu đen: có tạo thành sunfua hydro

• Có bọt khí hoặc vết nứt: sinh khí từ glucose

Bề mặt thạch nghiêng:

• Màu vàng: lactose/saccharose dương tính (có sử dụng lactose/saccharose)

• Màu đỏ hoặc không đổi màu: lactose/saccharose âm tính

Thử nghiệm LDC:

Lấy một que cấy đầy khuẩn lạc trên môi trường TSA cấy ngay dưới bề mặt của môi trường lỏng LDC, ủ ở 370C trong 24 giờ

Trên môi trường LDC:

• Môi trường sang tím hay đỏ tía: LDC (+)

• Môi trường có màu vàng: LDC (-)

3-• Shigella không phân giải urea nên không làm thay đổi pH môi trường, nếu phản ứng dương tính, việc phân giải ure sẽ giải phóng NH3 làm đổi màu phenol red sang màu hoa hồng và sau đó chuyển sang màu đỏ tím.

Kết quả:

Qua quy trình kiểm nghiệm này cho phép kết luận có hay không có shigella được phát hiện trong 25g mẫu