Nghiên cứu về thành phần dịch trích bã bột cây thông

Nghiên cứu về thành phần dịch trích bã bột cây thông

Phân Nghiên Cứu - Chuong : —45—

Chương H1 THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH LỢI SỮA TRÊN

CAC PHAN DOAN SIKU LOC

ULi Muc dich của thử nghiệm,

Theo các tác giả ĐỒ TẤT LỢI J2| và PETELOT A, 1952 [76], hot bong có hoạt tính lợi sữa, Năm 1987, SAWADOGO J78] và năm 1989, GUYOMARCH

1251, xác định hoại tính lợi sữa của hột bông ở rong phần dịch trích ly của bã hột với nước nóng Chúng tôi tiếp tục nghiên cứu để xem phần nào của dịch trích bã

hột với nước có hoạt tính khi sữa,

Chúng tôi sử dụng phương pháp siêu lọc để phân chia chất đông cô chân

không D (thu được từ sơ đồ 3) thành các phân đoạn siêu lọc có trọng lượng phân tử khác nhau và thu được các phân đoạn như sau (sơ đỗ 4),

Chai ding cô chan khang D (chất trích thô)

Chất đông cô chân không E (phân đoạn > 5 KD)

Chất đông cô chân không F (phân đoạn > 100 KD)

Chất đông cô chân không G (phân đoạn 50-00 KD)

Chất đông cô chân không H (phân đoạn 5-50 KD)

Chất đông cô chân không Ï (phân đoạn < 5 KD)

Chúng tôi tiến hành thử nghiệm hoạt tính lợi sữa trên các phân đoạn siêu lọc

phần tổng quan 11.2

HH.2.Thứ nghiệm hoạt tính lợi sữa bằng cách xác định hàm lượng prolactin trong huyết tương trừu theo phương pháp đo miễn dịch phóng xạ (ứmmnunoradio assay) Thực hiện tại Trung tâm Quốc gia Nghiên cứu Nông nghiệp (LN.R.A), nước Cộng Hòa Pháp, trên giống trừu Préalpes du Sud một năm tuổi, cân nặng trung hình 60 Kg

Trong 8 lô trờu thử nghiệm, 2 lô làm vật đối chứng, trừu được tiềm với dung

dịch muối NaCl 0,9% hoặc được tiêm với chất bromocripuin là chất ức chế việc sản xuất prolacln Các con trữu còn lại làm vật thử nghiệm nhưng cũng là mẫu chứng

trên chính con vật đó, hằng cách trước khi tiêm chất trích ly của cây vào con vật,

người ta rút máu để đo hàm lượng prolacun đã có sẵn trong con vật

Việc thứ nghiệm trên tru được tiến hành thco dui trình ghỉ trong bằng 10, Sáu lần lấy máu đầu tiên có mục đích làm cho trờu có thối quen và không bị căng thẳng thần kính (khi lấy máu) làm sai lệch hàm lượng prolacun trong máu, Số do prolacun của 6 lần này được xem như số đo mẫu chứng của con vật thử nghiệm

Phần Nghiên Cửu - Chương l1 —46—

Sau khi chích mẫu vào máu, vẫn tIẾp tục lấy máu theo gui trình ghi trong

bang 10 Số mẫu máu được đánh số, bảo quần trong tủ lạnh để lấy huyết tương Đo

ham lượng prolaclin trong huyết tương (ng/100 HÌ huyết tương) bằng phương pháp

đo miễn địch phóng xạ của MHSSINGER H.G [50]

chat D XMS5 không E(> 5 KD)

- Niều loc YMIOG

Chất đông cô chân < 100 KD

không F.( > 100 KD)

- Siêu học XM 50

(50 KD - 100 KD)

- Siêu loc XM 5

chân không Ï (<5 KIĐ không H (Š KD - 50 KD)

BANG 10: Qui trình thử nghiệm đo prolacln trên ite

theo phút

vào trite

Rút lấy mau |

—Á47—

Phần Nghiên Cứu - Chuong 1Ï

48 —— Phần Nghiên Cúu - Chương H

— 49 —

Phan Nehién Cutu - Chuang 1

yuep

Phan Nghién Cutu - Chuang Il —50—

Dinh phan prolactin

-Sử dụng kháng thể đầu tiên : kháng thể thổ kháng- prolacun của trung lâm

ALFRED PESSARD, nude Cong Hoa Pháp

-Kháng thể của lần tạo phức thứ nhì :huyết thanh miễn dịch ngựa kháng- thé

để tạo kết túa kháng thể thỏ Tặng phẩm của hãng ORDEN BIOSERVICE CORE

ROCKVILLE MD USA

-Ðo phóng xạ bằng máy LKB 1260 MUUTIGAMMA (WALLAC) GAMMA

COUNTER

Kế quả :

Đo các số đơ prolaciin thu được không theo đúng một chuẩn phân bố thống

kê nào , nên các số liệu thu được sau khi sử lý thống kê |3] không đạt,vì vậy, chúng tôi xcm những kết quả thu được là những số đúng ; kết quả chung là trị trung bình của những kết quả đo đạc và sai số là sai số trung bình bình phương (root moan squarc) Kết quả ghi trong Háng lÍ và Bang 12

Hiện luận kết quả

Từ bảng lÍ, so sánh hầm lượng trung bình của 15 mẫu đo thử nghiệm với hàm lượng trung bình của 6 mẫu đo đầu tiên được dùng làm chuấn, trên cùng một thí nghiệm, để xét hoạt tính lợi sữa của mẫu trích ly cây , chúng tôi nhận thấy:

- Nếu tiêm với dụng dịch nước muối đẳng trưởng NaCl 0,9 % , không có sự thay đối hầm lượng prolacUn trong suốt quá trình thử nghiệm trên con vật,

-Nếu tiêm với dụng dịch bromocriptin, chất ức chế sản xudt prolactin, khéng

có sự thay đối hầm lượng prolacun trong quá trình thử nghiệm trên con vật,

-Nếu tiêm với dung dịch của phân đoạn siéu loc > 100 KD và < 5 KD, không có sự thay đối hàm lượng prolacHn trong suốt quá trình thử nghiệm trên con

vật,

rên con vật, có sự tăng hàm lượng prolacun, tăng gấp 3,47 lần với chất D và tăng rip 3,28 lần với chất E

-Nếu tiêm với dụng dịch của phân đoạn siêu loc G (50-100 KD) va phan

loạn siêu lọc H (5-50 KD) trên con vẬI, có sự tầng hàm lượng prolacun, tăng gấp

!97 lần với chất G và tầng gấp 1,41 lần với chất E

- Hiệu quả lợi sữa của các phân đoạn G và H chưa cao, so với hiệu quả của phân đoạn chất trích thô Ð và E, có thể do liều lượng sử dụng chưa đủ (0,1 g chất

nghiệm ” lidu ludng va hiéu qua” (Dose-réponse).

Phần Nghiên Citu - Chuong I] cae Sf eee

H.3.Thử nghiệm tinh igi sila bing cdch xdc djnh ham lvgng prolactin trong huyết tưởng của chuột,

Thực hiện tại Trung tầm ALFRED FESSARD, C.N.R.S., nước Cộng Hòa

Pháp, trên giống chuột WISTAR ,khoảng 3 tháng tuổi, cân năng 280-300 g

Thực hiện trên 3 lô chuột, mỗi lô 10 con như sau :

- Lô thứ nhất: mỗi con uống 20 mÏÌ nước cất trong mội đêm

(>5 KD) trong một đêm

-L6 thứ ba ; mỗi con uống 20 mÌ nước chứa 19,5 mg chất phân đoạn siêu

loc G (50-100 KD) trong một đêm

Sáng hôm sau, chặt đầu con vật, lấy khoảng 5 mÍ máu Lấy phần huyết tương để đo hàm lượng prolacin của từng con chuột,

Kết quả : Ghi trong bằng 13

BANG 13 : Ham lượng prolactin (ng/100 ul huyét tong) trong mầu của chuột uống dung dịch chất trích ly bã hột bông bởi nước

Biện luận kết quả :

- Với lô chuột uống chất trích thô E ( > 5 KD), kết quả lợi sữa âm tính

-Với lô chuột uống chất G (phân đoạn siêu lọc 50-100 KD), hoại nh chưa

tố rệt,

Phần Nghiên Citu - Chuong H —352—

Theo tac gia SAWADOGO {7RỊ, chuột có thai hoặc đủ tuổi để mang thai rất

ít nhạy cảm với các thí nghiệm về hoại tính của lactogen và hầu như ở các loài vật còn tân đều rất kém nhạy cảm với prolacin nếu không được xử lý trước bằng oestrogen

iL4, Banh giá chung về thử nghiệm hoạt tính lợi sữa

Tóm lất và đánh giá những thử nghiệm lợi sữa của các phân đoạn của dich trích bã hột hông bởi nước được phí trong bang 14

Chúng tôi có những nhận Xót như sau :

- Qua việc áp dụng các phương pháp khác nhau để đo hoạt tính lợi sữa của các phân đoạn của dịch trích bã hội bông bởi nước, chỉ có phương pháp định lượng miễn dịch phóng xa (Immunoradio assay) cho kết quả tốt, chính xác trong việc đo

‘ham lượng prolacun trong máu trữu, Chuột không nhạy cảm với phương pháp nay

- Việc thử nghiệm trên các sinh vật sống không phải lúc nào của đạt được kết quả khả quan, vì mỗi động vật (ở đây là trừu) có độ nhạy cảm với hormon khác nhau và có nhiều yếu tố khác ảnh hưởng đến sự tiết prolacun Prolacuna của trờu thay đổi theo chủ kỳ động dục, sự căng thẳng thần kính khi bị lấy máu và nhiệt độ

của môi Hường,

- De liều lượng chất trích ly sử dụng cho mỗi thí nghiệm được lựa chọn một cách chủ quan, độc đoán nên một số kết quả chưa có tính thuyết phục cao Nếu có điêu kiện nên có thêm nhiều thử nghiệm hơn và nhất là loại thử nghiệm “liều lượng - hiệu quả”,

Các thí nghiệm đã khẳng định một cách khoa học tính lợi sữa của dịch trích bã hột bông bởi nước và xác định tính lợi sữa nằm trong phân đoạn siêu lọc 5 ~ 186 KD hay chính xác hơn là phân đoạn Sử - 106 KD.