nghiên cứu về thành phần hóa học cao Cloroform của lá cây vọng cách

nghiên cứu về thành phần hóa học cao Cloroform của lá cây vọng cách

Khdo sdt thanh phan hod hoc cao cloroform cia ld cay vọng cách

2 NGHIÊN CỨU

2.1 Giới thiệu chung

Chúng tôi tiến hành khảo sát thành phần hóa học của lá cây vọng cách (P serralfolia L.) thụ hái ở quận 12, thành phố Hồ Chí Minh Lá cây tươi sau khi thu hái được rửa sạch, sấy ở nhiệt độ 60°C được 2kg mẫu khô Mẫu lá khô được

trích nóng trong dụng môi mefanol, lọc lấy dịch trích Cô quay dịch trích ở ấp

suất kém thu hồi dụng môi thu được cao metanol Hòa cao metanol vào nước, lần

lược chiết với các dung môi eter dầu, cloroform, butanol thu được các loại cao tương ứng

Trong để tài này, chúng tôi tiến hành khảo sát thành phần hóa học trên cao cloroforra Thực hiện sắc ký cột cao cloroform trên silica gel với hệ dung môi giải ly eter dầu và etyl acetat với độ phân cực tăng dần thu được 10 phân đoạn từ VCI đến VC10 Chúng tôi tiến hành khảo sát các phân đoạn: VC3, VC5, VŒ6, VC7, VC8

2.2 Kết quả và biện luận

Thực hiện sắc ký cột 5 phân đoạn VC3, VC5, VC6, VC7, VC§ trên siica gel, RP¡s với nhiều hệ dung ly khác nhau, chúng tôi cô lập được sáu hợp chất có

mã số là VCHI, VCH2, VCH3, VCH4, VCH5, VCH6 Dựa vào kết quả phân tích

phổ NMR chúng tôi để nghị cấu trúc các hợp chất này lẫn lượt là metyÌ rrans-4-

hydroxycinnamat (49); 5,4’-dihydroxy-3,7,3’-trimetoxyflavon (50); (R)-9- hydroxysesamin (31); 5,7-dihydroxy-4’-metoxyflavon (52), metyl trans-3,4-

dihydroxycinnamat (33), 5,7,3’ -trihydroxy-4’-metoxyflavon (34) Sau day 1a

phần biện luận để xác định cấu trúc

HIVTH: Lương Thị Thu Hiển

Khảo sát thành phần hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

Khảo sát thành phân hoá học cao claroform của lá cây vọng cách

2.2.1 metyl trans-4-hydroxycinnamat (VCHI)

Chất VCHI thu được dưới dạng tinh thé hình kim, mầu trắng, tan hoàn

toàn trong aceton

Phổ ÌH NME của VCHI cho các mũi cộng hưởng ứng với sự hiện điện của 10 proton bao gồm: một OH phenol 8, 8.85 (1H, s), bốn proton ở vòng

benzen đối xứng ghép cặp orto [6a 7.55 (2H, d, J=8.5 Hz, H-2, H-6), 8, 6.89

(2H, d, J=8.5 Hz, H-3, H-5)], hai proton olefin ghép cap trans [8, 7.60 (1H, d,

J=15.5 Hz, H-7) va dy 6.35 (1H, d, J=16 Hz, H-8), ba proton thudc nhém metoxy

$y 3.72 (3H, s)

Phé °C NMR kết hợp với kỹ thuật DEPT của VCHI cho các mũi cộng hưởng ứng với sự hiện diện của sáu CH, ba C tứ cấp, mội CH¡ trong đó có một carbon carbonyl thuộc nhóm ester tiếp cách õc 167.9 (C-9), sáu carbon hương phương [ốc 169.6 (s, C-4), äc 130.9 (d, C-2, C-4), 8c 116.7 (d, C-3, C-5), ốc 127.0 (s, C-1), hai carbon olefin {ốc 145.4 (d, C-7) và 5¢ 115.4 (d, C-8)]

Như vậy, phổ !H NMR kết hợp với phổ !C NMR và kỹ thuật DEPT cho

biết VCH1 có sự hiện điện của một vòng benzen có hai nhóm thế ở vị trí para, nhóm OH phenol, một nhóm trans oleiin, mội nhóm ester tiếp cách, một nhóm

Khảo sát thành phần hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

Bảng 1: Số liệu phổ "H (500MHz) va °C NMR (125MHz) cia VCHI (trong

dung môi aceton, trị số trong ngoặc là hằng số ghép cặp J tính bằng Hz)

Khảo sát thành phần hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

Chất VCH2 cô lập dưới dạng tinh thể hình kim, màu vàng nhạt, tan hoàn toàn trong dung môi aceton Sắc ký bản mồng pha thường với dung môi giải ly eter dầu: etyl acetat (5:5), hiện hình bằng H;SO¿ cho vết tron mau vàng đậm

Phổ 'H NMR cho các tín hiệu cộng hưởng ứng với sự hiện diện của 16

proton Trong đó có một proton OH kiém néi 84 12.75 (s, 5-OH), ba mũi đơn

ứng với proton của ba nhóm metoxy [ồn 3.94 ( 3H, s), 54 3.92 (3H, s) va Sy 3.90 (3H, s)} Cac tin hiéu céng hưởng xuất hiện ở vùng trường thấp cho thấy có hai vòng benzen Vòng A có hai proton ghép cặp meta [ỗu 6.67 (1H, d, J=2.5Hz, H-

8) va dy 6.32 (1H, d, J=2.5 Hz, H-6)], nhu vay đây là vòng bốn lần thế Vòng B

có proton 6, 7.71 (1H, dd, J=8 va 2 Hz, H-6’) ghép cap meta vdi proton ôn 7.79

(1H, d, J=2 Hz, H-2’) và ghép cặp orto với proton 5, 7.01 (1H, d, J=8.5 Hz, H-

5’) Vong A va vong B dang:

Phổ !*C NMR và DEPT cho các tín hiệu cộng hưởng ứng với sự hiện diện

của 18 carbon bao gồm năm CH, mười C tứ cấp, ba CH¡ Trong đó có: một carbon carbonyl öc 179.6 (s, C-4), ba carbon thuộc nhóm OCH; [8c 60.3 (t), d¢ 56.5 (t), dc 56.5 (t)]

HVTH: Luong Thi Thu Hién

Khảo sát thành phân hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

Các dữ kiện trên cho thấy VCH2 là một flavonoid với vòng A có hai

proton meta, một nhóm OH kiểm nối; vòng B ba lần thế trong đó có hai nhóm

thế là OH hodc OCH

Phổ HMBC cho thấy mối tương quan của proton cla nhém metoxy 8,

3.94 (3H, s) va hai proton cla véng A [546.67 (1H, d, H-§), õn 6.32 (1H, d, H-6) với cùng một carbon trên vòng Á Šc 166.6 @œ, C-7) Như vậy nhóm metoxy này

phải gắn trên C-7 Trên phổ HMBC còn cho các tương quan trên vòng B như

tương quan giữa proton ôn 7.71 (1H, dd, J=8 va 2 Hz, H-6’) với carbon trên vòng

C Se 156.9 s, C-2) và carbon hương phương mang oxygen trên vòng B õc 150.6

(s, C-4'); tương quan giữa 8, 7.79 (1H, d, J=2 Hz, H-2’) vdi hai carbon hương phương mang oxygen [8c 148.3 (s, C-3’), 8c 150.6 (s, C-4))] và một carbon tứ cấp của vòng C [ỗc 156.9 (s, C-2)]; tương quan proton [8y 7.01 (1H, d, J=8.5, H-

5'3J với carbon tứ cấp hương phương ốc 122.8 (s, C-1') và hai carbon hương phương mang oxygen [dc 148.3 (s, C-3’), & 150.6 (s, C-4’)] Nhu vay vong B có hai nhóm thế mang oxygen ở C-3' và C-4' Mặt khác có tương quan giữa proton

của nhóm metoxyl ôn 3.92 GH, s, 3’-OCH,) vdi carbon 8 148.3 (s, C-3’) va

proton của nhóm metoxyl õu 3.90 (3H, s, 3-OCH,) vdi carbon 8 139.5 (s, C-3),

như vậy ở C-3' và C-3 nối với nhóm OCH, con lai C-4’ nốt với nhóm OH,

Từ các đữ kiện trên chúng tôi để nghị cấu trúc của VCH2 là: 5,4'-

Khảo sát thành phân hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

Bảng 2: Số liệu phổ "H (500MHz) và °C NMR (125MH;) và tương quan

HMBC của VCH2 (trong dung môi aceton, trị số trong ngoặc là hằng số

Khảo sát thành phần hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

Chất VCH3 cô lập được ở dạng tỉnh thể hình kim, màu trắng, tan hoàn

toàn trong dung môi clorofom, aceton Sắc ký bản mỏng pha thường với dung môi giải ly eter dâu: acetat (5:5), hiện hình bằng H;SO¿ cho vết tròn màu nâu đen

Phổ !H NMR cho các tín hiệu cộng hưởng của 17 proton như sau: sáu

proton hương phương vùng trường thấp [5y 7.04 (d, 1.5 Hz), 5y 6.87 (m), 5y

6.86 (m), 5 6.81 (m), dy 6.79 (m), õu 6.77 (m)] tương ứng với sự xuất hiện của hai vòng benzen Bốn proton chi phương của carbon nối với hai oxygen [ồn 5.96 (2H, s) va 5y 5.95 (2H, s)] Hai proton chỉ phương trên cùng carbon ghép cặp với nhau [ôu 4.23 (1H, dd, J=9 va 6 Hz, H-9’a) va ồn 4.01 (1H, dd, J=9.5 và 2.5 Hz,

HVTH: Lương Thị Thu Hiển

Khảo sát thành phần hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

H-9’b)] Nam proton chi phuong con lai [84 4.96 (1H, d, J=7Hz), 5y 4.83 (1H, d, J=7.5Hz), ồn 5.58 (1H, d, J=3.5Hz, H-9), 8 3.20 (1H, m), 5y 2.95 (1H, m)]

Phé “°C NMR va DEPT cho cdc mii cong hu@ng tong ting vdi 20 carbon

với 1ICH, 3 CHạ, 6 C tứ cấp, (phù hợp với 17 proton trên phố 'H NMR), Trong

đó có bốn carbon hương phương mang oxygen [8c 147.3 (s, C-3), õc 148.1 (s, C- 4), 5¢ 147.3 (s, C-3’), 5¢ 148.1 (s, C-4’)], tam carbon tam cấp hương phương [ỗc

135.4 (d, C-1), õc 108.1 (d, C-5), õc 119.2 (d, C-6), õc 136.1 (d, C-1'), õc 107.1 (đ, C-2”), ðc 108.3 (d, C-5”), õc 120.0 (d, C-6'), õc 106.3 (d, C-2)] Như vậy VCH3

có hai vòng benzen tam hoán Còn lại sáu carbon chi phương [õc 83.3 (d, C-7), õc

62.2 (d, C-8), õc 101.7 (d, C-9), õc 88.2 (d, C-7'), õc 53.1 (d, C-8°), õc 72.3 (t, C-

9°) Như vậy VCH3 có cấu trúc phù hợp với khung sườn lignan Nhận thấy VCH3 có cấu trúc giống hợp chất (R)-9-hydroxysesamin, chúng tôi tiến hành so

sánh phổ 'C MNR của VCH3 với phổ 'ÌC NMR của (R)-9-hydroxysesamin ở tài

liệu [17] thì thấy có sự trùng khớp Vì vậy chúng tôi để nghị cấu trúc của VCH3

la (R)-9-hydroxysesamin

HVTH: Luong Thi Thu Hién

Khảo sát thành phần hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

Bảng 3: Số liệu phổ ‘H (500MHz) va °C NMR (125MHz) cua VCH3 va sé

ligu phd “°C NMR cua (R)-9-hydroxysesamin [17] (trong dung môi

cloroform, tri sé trong ngodc 1a hing sé ghép cap J tinh bang Hz)

Khảo sát thành phần hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

Chất VCH4 cô lập dưới dạng tinh thé hình kim, màu vàng nhạt, tan hoàn

toàn trong dung môi aceton Sắc ký bản mỏng pha thường với dung môi giải ly

eter đầu: acetat (6:4), hiện hình bằng H;ạSO¿ cho vết tròn màu vàng đậm

Phổ 'H NMR cho các tín hiệu cộng hưởng ứng với sự hiện diện của II

proton Trong đó có một proton OH kiểm nối 54 12.99 (s, 5-OH), một mũi đơn

ứng với proton cia một nhóm metoxy ồu 3.92 (3H, s), một mũi đơn cua proton

olefin 54 6.68 (1H, s, H-3) Các tín hiệu cộng hưởng xuất hiện ở vùng trường thấp cho thấy sự xuất hiện của hai vòng benzen Vòng A có hai proton ghép cặp meta [5 6.55 (1H, d, J=2Hz, H-8) va 5y 6.26 (1H, d, J=2.5 Hz, H-6)], như vậy đây là vòng bốn lần thế Vòng B đối xứng có bốn proton trong đó hai proton

HVTH: Lương Thị Thu Hiển

tương đương ghép cặp orto với hai proton tương đương còn lại lỗy 8.02 (2H, d,

Các dữ kiện trên cho thấy VCH4 là một flavonoid với vòng AÁ có hai

proton meta, một nhóm OH kiểm nối; vòng B hai lần thế ở vị trí para, trong đó

có một nhóm thế là OH hoặc OCH;; vòng C có một proton olefin phù hợp với khung sườn flavon

Phé HMBC cho thấy mối tương quan cia proton cia nhóm metoxy dy

3.92 (3H, s) va proton cia vong B [$y 8.02 (2H, d, J=9 Hz, H-2’ va H-6"), Sy 7.13 (2H, d, i=9 Hz, H-3`, H-5'] tương quan với cùng một carbon trên vòng B âc

163.9 (s, C-4') Như vậy nhóm metoxy này phải gắn trên C-4',

HVTH: Lương Thị Thu Hiển

Khảo sát thành phân hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

Từ các dữ kiện trên chúng tôi để nghị VCH4 là 5,7-dihydroxy-4’-

Bảng 4 : số liệu phổ !H (500MN?) và 'C NMR (125MH?) và tương quan

HMBC của VCH4 (trong dung môi aceton, trị số trong ngoặc là hằng số

ghép cap J tinh bang Hz)

Khảo sát thành phần hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

6.88 (1H, d, J=8.5, H-5) va ghép cdp meta véi proton Sy 7.09 (1H, d, J=2Hz, H- 2) Hai proton olefin ghép cap trans [5y 7.59 (1H, d, J=16Hz, H-7) va 5y 6.27 (1H, d, J=16Hz, H-8) Ba proton thuéc nhém metoxy 6, 3.80 (3H, s)

Phé °C NMR két hop véi ky thuat DEPT của VCH5 cho các mũi cộng

hướng ứng với sự hiện diện của năm CH, bốn C tứ cấp, một CH; trong đó có một

carbon carbonyl thuộc nhóm ester tiếp cách õc 168.0 (C-9) Sáu carbon hương

phương, trong đó có hai carbon tứ cấp mang oxygen [Šc 146.2 (s, C-4), õc 143.8 (s, C-3)] và các carbon còn lại [õc 127.7 (s, C-1), ồc 122.5 (d, C-6), õc 115.5 (đ, C-2), öc 114.3 (d, C-5 )] Hai carbon olefin [5¢ 144.9 (d, C-7) va ðc 115.5 (d, C- 8)

Nhu vay, phé 'H NMR két hdp véi phd °C NMR va ky thudt DEPT cho

biết cấu trúc hợp chất VCH5 gồm: một vòng benzen có ba nhóm thế (trong đó

có hai nhóm OH), một nhóm trans olefin, một nhóm ester tiếp cách, một nhóm CH; mang oxygen

HVTH: Luong Thi Thu Hién

Khảo sát thành phần hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

Từ các dữ kiện trên chúng tôi để nghị VCH5 là metyl /rans-3,4-

Bảng 5: Số liệu pho ‘H (500MHz) va °C NMR (125MHz) cia VCHS5

(trong dung môi cloroform, trị số trong ngoặc là hằng số ghép cặp J tinh

Khảo sát thành phần hoá học cao cloroform của lá cây vọng cách

2.2.6 5,/,3’-trihydroxy-4’-metoxyflaven(VCH6)

OH Oo Chất VCH6 cô lập được ở dạng tình thể vô định hình, mầu vàng nhạt, tan

hoàn toàn trong dung môi aceton Sắc ký bản mỏng pha thường với dung mdi giải ly eter dầu: etyl acetat (6:4), hiện hình bằng H;SO¿ cho vết tròn mầu vàng

dam

Phổ 'H NMR cho các tín hiệu công hướng ứng với sự hiện diện của 10

proton, Trong đó có một proton OH kiểm nối Šg 12.99 (s, 5-OH), một proton tudng Ung vdi mét nhém metoxy dy 3.96 (3H, s), mét proton olefin 5, 6.64 (1H,

s, H-3) Các tín hiệu cộng hưởng xuất hiện ở vùng trường thấp cho thấy có hai vòng benzen Vòng A bốn lần thế với bai proton ghép cặp meta [õn 6.56 (1H,

d, J=2Hz, H-§) và ôu 6.26 (1H, d, J=2 Hz, H-6)] Vong B ba lần thế với một

proton ôn 7.57 (1H, dd, J=8.5 va 2.5 Hz, H-6’) ghép cap meta vdi proton 5, 7.50 (1H, d, J=2.5 Hz, H-2’} va ghép cap orto vi proton 6y 7.14 (1H, d, J=8.5 Hz, H-

5’) Vong A va vong B dang:

HVTH: Lương Thị Thu Hiển

Khảo sát thành phân hoá học cao clorofarm của lá cây vọng cách

Phổ !'C NMR và DEPT cho các tín hiệu cộng hưởng ứng với sự hiện diện

của 16 carbon bao gồm sáu CH, chín C tứ cấp, một CH¡ Trong đó có một carbon

carbonyl 5c 183.1 (s, C-5), mdt carbon thudc nhém OCH, dc 56.4 (Q

Các đữ kiện trên cho thấy VCH6 là một flavonoid với vòng A có hai

proton ở vị trí meta với nhau, một nhóm OH kiểm nối ; vòng B ba lần thế trong

đó có hai nhóm thế là OH hoặc OCH:, một proton olefin trén vong C phi hợp

với khung sườn flavon

Phổ HMBC cho thấy mối tương quan giữa H-3 (ôn 6.64) với C-10 (ốc

105.4), C-2 (ốc 164.9), C-4 (ốc 183.1) Proton H-2` (ồn 7.50) và H-6' (ồn 7.57) cùng tương quan với C-2 (õc 164.9) và C-4' (ốc 151.8) Tương quan giữa proton nhém OCH, 5, 3.96 vdi C-4" (6c 151.8)