SEMINAR xác định hàm lượng vitamin b2 trong thực phẩm bằng phương pháp HPLC (dược PHÂN TÍCH SLIDE)

Chuyên đề: Xác định hàm lượng vitamin B2 trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao năng HPLC... Ảnh hưởng của vitamin B2 đối với sức khỏe con người 3.. Phân tích để đáp ứng

Chuyên đề: Xác định hàm lượng vitamin B2 trong thực phẩm bằng phương pháp

sắc ký lỏng hiệu cao năng( HPLC)

NỘI DUNG

I Đặt vấn đề

II Đối tượng nghiên cứu và phương pháp nghiên cứu

1 Tính chất hóa lý của vitamin B2

2 Ảnh hưởng của vitamin B2 đối với sức khỏe con người

3 Chuẩn bị dụng cụ, thiết bị và hóa chất

3.1 Chuẩn bị dụng cụ thiết bị

3.2 Chuẩn bị hóa chất

4 Điều kiện quy trình và quá trình thực hiện

4.1 Điều kiện quy trình

4.2 Quá trình thực hiện

5 Tiến hành phân tích bằng máy

III Tính toán kết quả

IV Kết luận

I ĐẶT VẤN ĐỀ

- Có vai trò quan trọng đối với sức khỏe con người

=> Nếu chế độ ăn không cân đối có thể dẫn đến thiếu, thừa

=> nhiều người chọn cách sữ dụng dược phẩm để bổ sungĐể ngăn ngừa tình trạng thiếu thừa vit B2 tốt nhất là chọn thực phẩm phù hợp

- Vitamin B2 có nhiều trong: ngũ

cốc, rau xanh, đậu các loại, thịt,

trứng, sữa, tim, thận, gan, lách

- Giá trị vit B2( mg) trung bình trong khẩu phần tại Việt Nam : 0,45 ( 1985), 0,36 ± 0,07( 1990), 0,53 ± 0,30( 2000), 0,72 ±

0,38( 2010)

Phân tích để đáp ứng nhu cầu và bảo vệ sức khỏe con người

II ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

1 Tính chất hóa lý

Vitamin B2( Riboflavin), CT: C17H20N4O6

- Trong cơ thể người dể bị photphoryl hóa

- M=374,4 tinh thể nhỏ, hình kim, màu vàng da cam, t◦nc = 292◦C

- Vị đắng, tan tốt trong rượu và nước không tan trong dung môi hữu cơ: benzen, ete…

- Bền với nhiệt, dung dịch acid và chất chống oxy hóa

- Kém bền môi trường kềm và ánh sáng=> khi phân tích cần làm trong điều kiện bóng tối or ánh sáng đỏ

2 Ảnh hưởng đến sức khỏe con người

Khi Thiếu:

- Toàn thân mệt mỏi, trẻ con chậm lớn, tiêu hóa có vấn đề, nứt môi, viêm niêm mạc miệng lưỡi, sưng và đau cổ họng

- Mắt xuất hiện ngứa, rát bỏng, sợ ánh sáng, chảy nước mắt Khi thừa:

- Dùng quá liều gây chuột rút, ảnh hưởng đến thai nhi

- Thải qua đường nước tiểu, (1 ít thải qua phân)=> sai lệch xét nghiệm nước tiểu

3 Dụng cụ, thiết bị, hóa chất

3.1 Chuẩn bị dụng cụ, thiết bị:

- Hệ thống sắc ký lỏng cao áp với detector huỳnh quang FL hoặc detector PDA

- Cân phân tích độ chính xác 0,0001g

- Cân kỹ thuật độ chính xác 0,01g

- Bếp đun cách thuỷ

- Máy đo pH

- Bình nón 250 ml

- Phễu lọc

- Bình định mức 100, 200 ml

- Lọ thuỷ tinh nâu nút nhám loại 50ml, 100

- Pipet các cỡ 5 10,20 ml

- Bình định mức các cỡ

- Dung dịch chuẩn làm việc vitamin B2 nồng độ 50, 25, 10,

5 ppm pha khi dùng

3.2 Chuẩn bị hóa chất:

 Hoá chất thuốc thử sử dụng là loại tinh khiết PA

- Dung dịch HCl 1N

- Dung dịch CH3COONa 0,05M

-Dung môi Methanol (Merck)

- Men amilase (Prolabo)

- Acid acetic (Merck)

- Dung dịch vitamin B2 chuẩn gốc 100ppm:

 Cân 0,0250g chuẩn vitaminB2 dạng riboflavin cho vào bình định mức 250ml, hoà tan và pha loãng tới vạch mức bằng nước

4 Điều kiện quy trình và quá trình thực hiện

4.1 Điều kiện quy trình

Đựng mẫu trong bình thủy tinh màu nâu

- Cột RP 18

Điều kiện chạy sắc ký:

- Chạy sắc ký với detector FL bước sóng kích thích 422 và bước

sóng phát xạ 522nm

- Dung môi pha động Pha động: CH3COONa 0,05M : MeOH =

70:30 (V/V)

- Cột sắc ký pha ngược C18

- Tốc độ dòng 1ml/phút

- Nhiệt độ phòng

- Điều kiện chạy sắc ký với detector PDA ở bước sóng 254nm

- Dung môi Pha động H2O: MeOH: aceic acid tỷ lệ 45: 65: 0,1(V/V/V)

- Tốc độ dòng 0,8 ml/ phút

- Dịch lọc ẫu và chuẩn được bơm vào HPLCm

4.2 Quá trình thực hiện:

* Chiết vitamin B2 từ thực phẩm

* Xử lý mẫu

* Tiến hành

- Cân chính xác khoảng 0,1- 10g mẫu cho vào bình nón 250 ml

- Thêm vào mỗi bình 10 ml HCl 1N và 90 ml nước

- Thuỷ phân trong nồi cách thuỷ ở 1000C trong 1 giờ

- Chỉnh pH của dịch thuỷ phân đến pH=4,5 bằng dung dịch natri acetat 2,5M

- Thêm vào mỗi bình 0,1g me Amilasen

- Đặt bình vào tủ ấm ủ 370C trong 18 giờ

- Định mức dung dịch đến 200ml hoặc 250 ml bằng nước cất và lọc

5 Tiến hành phân tích bằng máy

Giới hạn phát hiện: 0.02 ng

Nhận biết bằng cách so sánh thời gian lưu của pic trong sắc phổ thu được của dung dịch mẫu thử và của dung dịch chuẩn

III TÍNH TOÁN KẾT QUẢ

1 Xây dựng đường chuẩn

Cần phải xây dựng qua 5 điểm

=> nhưng chỉ cần tính 1 điểm chuẩn nằm trong khoảng tuyến tính Nồng độ dung dịch chuẩn: 0,5, 1, 5, 10, 20…mcg/ml

Hàm lượng vitaminB2:

X(mcg/g)= 200 x Cm / m

Trong đó :

200 là thể tích bình định mức của dịch sau thuỷ phân (ml)

Cm: là nồng độ mẫu phân tích tính theo đường chuẩn (mcg/ml)

hay nồng độ một dung dịch chuẩn.

m: Khối lượng mẫu lấy phân tích (g).

=> Máy sẽ lập đường chuẩn

X: min Y: độ hấp thụ 1: 6,380 vitamin B2

Sắc kí đồ

Hoặc có thể sử dụng:

s

E A

s ST

E

s

m

E

m 100

1000 V

m A

V V

A

















2 Độ chính xác ( độ lặp lại)

Chênh lệch tuyệt đối giữa các kết quả không quá 5 % các trường

hợp lớn hơn giới hạn lặp lại r.

Sữa = 14,54 mg/100g r = 1,3048 mg/100g

Gan lợn = 105,46 mg/100g r = 5,1104 mg/100g

3 Độ đúng (độ tái lập)

Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả không quá 5 % các trường

hợp lớn hơn giới hạn tái lập R.

Sữa bột = 14,54 mg/100g R = 3,0078 mg/100g

Gan lợn = 105,46 mg/100g R = 23,5342 mg/100g

Sai lệch giữa hai lần thử song song trong cùng điều kiện so với giá trị trung bình không chênh lệch nhau quá 15%

4 Đảm bảo chất lượng

IV KẾT QUẢ

Phân tích HPLC được thành lập như là phương pháp lựa chọn

để xác định riboflavin trong thực phẩm

Phạm vi của phân tích xác định quy trình được sử dụng

Tài liệu tham khảo

TCVN 8975-2011 - Thực Phẩm - Xác Định Vitamin B2 Bằng Sắc Ký Lỏng Hiệu Năng Cao (HPLC)

HPLC Determination of Riboflavin in fortified food -

Roland Bitsch, Irmgard Bitsch

https://www.researchgate.net/publication/230547667

http://news.foodnk.com/load/

thu_vien_tai_lieu_chuyen_nganh/

xac_dinh_ham_luong_vitamin_b2_trong_thuc_pham_bang _sac_ky_long/1-1-0-23

THE END