Quy trình phân tích các chỉ tiêu vi sinh vật

Phân lậpMôi trường sử dụng: EMB agar Cấy chuyển từ BGBL -> EMB, ủ ở nhiệt độ Chọn những khuẩn lạc đặc trưng và cấy chuyển sang môi trường TSA... Nguyên tăc- Đây là phương pháp định tính

CHƯƠNG VI

ỌUY TRÌNH PHÂN TÍCH CÁC CHỈ TIÊU

VI SINH VẬT

TÔNG SÔ

VI SINH VẬT HIẾU KHÍ

{Aerobic Plate Count)

Tổng số vỉ sỉnh vật hỉếu khí

1 Định nghĩa

Là những v s v tăng trưởng và hình thành khuẩn lạc trong điều kiện hiếu khí

Chỉ thị mức độ vệ sinh an toàn thực phẩm • • • • 1

2 Nguyên tắc

Theo phương pháp đổ đĩa

- ủ ở nhiệt độ 37°c/48h hoặc 30°c/72h

Tổng số vỉ sình vật hỉếu khí

3 Môi trường nuôi cấy

- Saline Pepton Water (SPW)

- Plate Count Agar (PC A)

4 Thiết bị

- Tủ ấm 30°c

0 1 / 1 0

» 1 / 1 0 0 0 )

0 0 1 / 1 0

ị 1 / 1 0 0 0 0 )

Plate Count Agar

Nuôi ủ

ủ ở nhiệt độ 30°c trong 72 giờ

ĐỊNH LƯỢNG

OLIFORMS TỔNG SỐ

Định nghĩa Coliforms

Môi trường sử dụng

VRB

TSA

BGBL

Quy trình phân tích

Phân tích

Sử dụng phương pháp đỗ đĩa Thể tích mẫu sử dụng: 1 ml

Đổ môi trường TSA, chờ 1—2

Đổ môi trường VRB

ủ 37°c, 24h

Đọc kềt quả

Khuẩn lạc đặc trưng cho Coliform: khuẩn lạc

màu đỏ đến đỏ đậm, đường kính >0,5 mm, có vòng tủa muối mật

Khẳng định

Sử dụng môi trường BGBL

- Dương tính ?

- Ảm tính ?

Tính toán kết quả

Coliform tổng số

(cfu/ml)

Nnjvfj + ,+njVfj

X R

ĐỊNH LƯỢNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP MPN

Nguyên tăc

Mầu được pha thành một dãy thập phân liên tiếp và mẫu được đưa vào môi trường thíchhợp

ủ và đọc số ống dương tính

Tra bảng Mac - crady -> tính toán số lượng

MẪU PHA LOÃNG

10-1

10-2

Định lượng Coliform chịu nhiệt

PHA LOÃNG

Định lượng Feacal Coliform

1 Định nghĩa Sử dụng lactose và

sinh hơiSinh indol

Phân lập

Môi trường sử dụng: EMB agar

Cấy chuyển từ BGBL -> EMB, ủ ở nhiệt độ

Chọn những khuẩn lạc đặc trưng và cấy chuyển sang môi trường TSA

Khẳng định

Thử nghiệm IMViC: + +

-Kết luân

- Phát hiện hay không phát hiện E Coli trong

25g mẫu

PHÁT HIỆN

SALMONELLA

Trực khuẩn gram (-), hiếu khí hoặc kỵ khí tùy nghi.

2 Nguyên tăc

- Đây là phương pháp định tính để xác định có

hay không có Salmonella trong mẫu

- Mầu -ỳ tiền tăng sinh -> tăng sinh chọn lọc -ỳ

phân lập -> khẳng định

m • A A w • 1

Tien tang sinh

- Môi trường sử dụng: BPW

Tăng sỉnh chọn lọc

- Môi trường sử dụng: RV broth

- Cấy chuyển từ môi trường BPW sang môi trường RV

- ủ ở 42°c trong 24h

Phân lập

Môi trường sử dụng: XLD, BPLS, HE, BSA

Cấy chuyển từ RV sang môi trường XLD, BPLS,

HE, BSA

ủ ở 37°c trong 24 h

Kêt quả phân lập

Môi trường XLD

Môi trường BPLS

Môi trường HE

Môi trường BSA

Cấy chuyển sang môi trường TSA

Thử nghỉệm kháng huyết thanh

Thử nghiệm này được thực hiện với kháng

huyết thanh Salmonella polyvalent o và

Salmonella polyvalent H.

Thực hiện phải có chứng âm là nước muối sinh lý

Phản ứng (+): ngưng kết với kháng huyết

thanh nhưng không ngưng kết với nước muối

Kết luân

Phát hiện hay không phát hiện Salmonella trong 25 g mẫu

ĐINH LƯƠNG

A UREUS

Nguyên tăc

Dựa vào phương pháp cấy trang

Khẳng định các khuẩn lạc đặc trưng bằng thử nghiệm coagulase

Môi trường

1 Blood agar

2 Baird Parker agar

3 Huyết tương thỏ

Quỵ trình phân tích

Chuân bi mâu

Tương tự như chuẩn bị mẫu cho phân tích E

Coỉỉ

Kết quả phân lập

Trên môi trường BA

Trên môi trường BP

Khẳng định

Sử dụng phản ứng coagulase

Tính toán kêt quả

Na: tổng số khuẩn lạc không đặc trưng

Số khuẩn lạc đặc trưng cho phản ứng ĐHT dương tính

Số khuẩn lạc đặc trưng

Số khuẩn lạc không đặc trưng cho phản ứng dương tính

Số khuẩn lạc đặc trưng

Xác định■

Tăng sỉnh chọn lọc

- Môi trường sử dụng: APW

- Môi trường sử dụng: TCBS

Phân lập

p5

s

s

o5

I

-Thử nghỉệm kháng huyết thanh

Mục đích: xác định các dòng Vibrio khác nhau

Kết luân

Phát hiện hay không phát hiện Vibrio trong 25g mẫu

Nguyên tăc

Trải qua 2 lần tăng sinh

Sử dụng các môi trường chuyên biệt để phân lập

Khẳng định

Giai đoạn khăng định

Tăng sỉnh chọn lọc

Sử dụng môi trường UVM hoặc LB Trải qua 2 lần tăng sinh chọn lọc

Sử dụng môi trường Oxford hoặc Palcam Khuẩn lạc đặc trưng trên Oxford

Phân lập

u r e o p sj S ujoju ; ỊOUI U9JỊ g u ru ; otjp OB] u

Khẳng định

- Thử nghiệm tan huyết

Thử nghiệm Catalase

Thử nghiệm Oxydase

- Thử nghiệm tính di động băng phương pháp giọt treo

- Thử nghiệm tính di động trên BHI

Rhamnose (+)

Xylose (-)

- Thử nghiệm khả năng biên dưỡng đường

- Thử nghiệm CAMP

z,ế monocytogenes

Chủng kiểm tra

S aureus

ASM MicrobeLibrary.org © Hanson

Kết luân

Phát hiện hay không phát hiện L monocytogenes

trong mẫu

Định nghĩa

Đây là nhóm vi sinh vật có nhân thật, có vách

tế bào là lớp vỏ chitin, có nhân và các bào

quan khác

Tất cả các loài nấm men và mốc đều thuộc nhóm vi sinh yật dị dưỡng, chúng cần nguồn dinh dưỡng cung cấp từ bên ngoài

• Phân biệt nâm men, nâm môc:

- Nấm men là vi nấm dạng sợi, sinh sản bằng bào

tử hoặc khuẩn ty.

- Nấm mốc là những tế bào đơn tính phát triển theo kiểu nẩy chồi Thỉnh thoảng có thể nhìn thấy các tế bào kết nối thành chuỗi.

Đơn vị hình thành khuẩn lạc của nấm mốc và nấm men là mầm tạo nên một khuẩn lạc khi• • •

nuôi cây ừong môi trường Mầm có thể là một bào tử, một tế bào hay một đoạn khuẩn tyỂ

Pepton broth 1 %

DG 18

DRBC

Môi trường

Chu ân bỉ mâu

HÉT CHƯƠNG VII