phân tích hóa lý aflatoxin

Aflatoxin thuộc nhóm các chất chuyển hóa có độc tính cao, được tiết ra từ các vinấm Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus. Điều kiện thời tiết nóng, ẩm, mưa nhiều ở Việt Nam rất thích hợp cho các loại vi nấm này phát triển mạnh và sản xuất ra aflatoxin. Aflatoxin thường nhiễm trên các loại thực phẩm thiết yếu cho người và vật nuôi như gạo, ngô, lạc, đậu, cám … Người bị nhiễm aflatoxin do ăn phải các loại ngũ cốc có aflatoxin hoặc ăn các sản phẩm như thịt, cá, trứng, sữa lấy từ động vật được nuôi bằng thức ăn nhiễm aflatoxin . Dùng các chất chỉ thị sinh học theo dõi trong suốt 1015 năm, người ta nhận thấy rằng ngay từ lúc còn là bào thai, con người đã tiếp xúc với aflatoxin và sẽ tiếp xúc liên tục trong suốt cuộc đời sau này. Nhiễm độc aflatoxin gây ra một loạt các triệu chứng cấp tính và mạn tính. Nhiễm độc cấp có thể gây chết người. Nhiễm độc mạn thường biểu hiện bằng ăn kém ngon, chậm lớn, tổn thương gan. Nhiễm độc mạn tính tác động đến yếu tố di truyền tương ứng với 3 kiểu gây ung thư, quái thai và đột biến .

Đề tài :

XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AFLATOXIN TRONG CÁC

HẠT CÓ DẦU

Danh sách nhóm

I Khái quát về Aflatoxin

parasiticus

bông,…

I Khái quát về Aflatoxin

aflatoxin nhưng B1 là độc nhất

gia súc, là nguồn có nguy cơ cao gây ung thư mạnh

(nhất là ung thư gan và tổn thương ở thận)

II.Một số kỹ thuật xác định aflatoxin

cao (HPTLC)

III Phương pháp định lượng Aflatoxin

 Mẫu được lấy phải đại diện cho cả lô hàng

Lấy mẫu

 Chiết aftoxin với các dung môi hữu cơ như: đicloromethan, benzen,

acetonitril, aceton, cloroform hay methanol

cloroform-nước methanol-nước hay acetonitril - nước

Chiết mẫu

Quá trình chiết có thể được thực hiện ở nhiệt độ phòng bằng cách lắc thông thường trong khoảng 30 phút hay dùng máy khuấy tốc độ cao trong 1-3 phút.

Chiết mẫu

• Thường sử dụng kỹ thuật chiết xuất pha rắn (Solid Phase Extraction-SPE).

( Florisil)

(cột ái lực miễn dịch - IAC)

Tinh sạch và làm giàu mẫu

• Trên cột IAC, kháng thể đặc hiệu với aflatoxin được gắn lên pha rắn

với kháng thể đã gắn trên pha rắn và bị giữ lại Các tạp chất theo dòng dung dịch ra khỏi cột Rửa các tạp chất còn lại trên cột Rửa giải aflatoxin bằng một thể tích nhỏ dung môi

Tinh sạch và làm giàu mẫu

IV Phương pháp xác định aflatoxin bằng cột ái lực miễn dịch:

Aflatoxin trong mẫu được chiết bằng methanol Sau đó được làm sạch bằng cột sắc ký ái lực miễn dịch và tạo dẫn xuất với trifluro acetic acid (TFA) rồi xác định trên máy sắc ký lỏng cao áp với đầu dò huỳnh quang

 Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Agilent 1100

• Cân phân tích 04 số lẻ: AB-204S (Mettler Toledo).

• Máy lắc mẫu

Hóa chất

phin lọc 0,45um, rung siêu âm đuổi khí

₋ Dung dịch chuẩn gốc Aflatoxin B1,B2,G1,G2 pha trong acetonitril:

benzene ( 2:98)

Trifluro acetic acid (TFA), n-Hecxane

 Dụng cụ

A

4. Cách tiến hành

Chuẩn bị dung dịch mẫu

Xác định Aflatoxin trên hệ thống

sắc ký lỏng

Xác định Aflatoxin trên hệ thống

sắc ký lỏng

Cân 25g mẫu thêm vào 5g NaCl cho vào bình tam giác có nút , sau đó thêm 125ml dung dịch chiết ( methanol: nước = 70:30) vào bình rồi lắc trên máy lắc ngang 60 phút Cuối cùng lọc qua giấy lọc thô.

Chuẩn bị mẫu

Lấy 15ml dung dịch lọc pha với 30ml nước cất rồi cho dung dịch qua cột sắc

kí ái lực với vận tốc khoảng 6ml/phút

Rửa cột sắc kí ái lực 2 lần bằng nước cất với vận tốc 6ml/phút, và rửa giải aflatoxin bằng 2ml methanol

Cuối cùng thổi khô dung dịch mẫu aflatoxin bằng khí nitơ

Chuẩn bị mẫu

Hòa tan mẫu aflatoxin bằng 200 µl n-hecxan rồi thêm vào 50 µl trifluro acetic acid, rồi để ở nhiệt độ phòng trong 5 phút.

Tiếp đến cho vào mẫu 2ml dung dịch acetonitril : nước ( 10 :90), lắc mạnh, rồi

để yên cho tách lớp

Dùng syringe để lấy lớp nước ở dưới rồi lọc qua phin lọc 0,45 um

Cuối cùng đưa vào máy HPLC

Tạo dẫn xuất Aflatoxin

Pha dung dịch chuẩn gốc từ 10ppb từ dung dịch chuẩn mẹ, rồi lấy 2ml dung dịch chuẩn 10ppb thổi khô bằng khói nitơ Dung dịch này được dùng để tạo dẫn xuất với trifluro acetic acid.

Chuẩn bị dung dịch chuẩn

 Chọn bước sóng kích thích là 360nm, bước sóng phát xạ là 440nm.

Xác định Aflatoxin trên hệ thống sắc ký

lỏng Xác định Aflatoxin trên hệ thống sắc ký

lỏng

SC : Diện tích peak chuẩn

V : thể tích cuối cùng để đo Caflatoxin=