Thực nghiệm thành phần hóa học cây sơn cúc hai hoa

Thực nghiệm thành phần hóa học cây sơn cúc hai hoa

1/ CÁC PHƯƠNG PHÁP VÀ DỤNG CỤ ĐÃ SỬ DỤNG

TRONG QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU

2/ CÔ LẬP CÁC CHẤT HỮU CƠ TRONG CÂY SƠN CÚC HAI HOA ~WEDELIA BIFLORA, HỌ CÚC (ASTERACEAE )

Cóp phần tìm hiểu thành phần hóa học cây &ơn Cúc Hai Hoa

Trang 44

1 / CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐÃ SỬ DỤNG TRONG QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU

1.1/ Các Phương Pháp Trích Ly Và Cô Lập

L1.1/ Điều chế các loai cao

Cao etanol được điều chế bằng phương pháp ngâm dâm

Các kết tủa thu được trong quá trình thu hồi dung môi etanol

L1.2 / Các dung cu đã sử dung : Máy cô quay RE 111, fiol 4 vide, phéu

Buchner, binh tam giác và máy bơm chân không

1.1.3 / Các dung môi đã sử dung: Dung môi eter dầu hỏa ( 60” — 90° ), benzen, cloroform, acetat etil, metanol va etanol 95 %

1.1.4/ Thuéc thi hiên hình: acid sulfuric đậm đặc

1.2/ Cô Lập Các Hợp Chất Hữu Cơ

Sắc ký cột với silica gel 60H, được sử dụng cho sắc ký lớp mỏng, của hãng

Merck Sử dụng sắc ký lớp mỏng và sắc ký điều chế có nhãn hiệu 25DC-

Alufolien 20 * 20cm, Kieselgel 60 F254, Merck

1.3 / Các Phương Pháp Hóa Lý Đã Sử Dụng

Đo nhiệt độ nóng chảy: khối Maquenne

Máy IR: IR - 470 SHIMADU, BRUKER EQUINOX55, BRUKER - IFS48” CARLO ERBA - GC6130

Máy RMN: Bruker Avance 500 MH2 cho 'H — RMN va 125 MHz cho

°C —RMN

Máy MS: Máy 5989 B MS - HP

của Phòng Phân Tích Cấu Trúc Viện Hóa Học Khoa Học Tự Nhiên Hà Nội

—————ƑƑ

CVHD: D&G T8 NGUYỄN KIM PHI PHỤNG HVTH: NGUYEN THANH HOANG

Góp phần tìm hiểu thành phần hóa học cây &cn Clic Hai Hoa

Trang 45

2 / CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CÂY SƠN CÚC

HAI HOA - WEDELIA BIFLORA

Cô lập các hợp chất hữu cơ theo trình tự như sau:

2.1/ Điều Chế Các Loại Cao

Mẫu cây ( gồm lá hoặc hoa ) được rửa sạch, để ráo nước, thái nhuyễn rồi

trích trong etanol 95 % ở nhiệt độ phòng bằng phương pháp ngâm dầm, trong

24 giờ Kế đến, thu hổi dung môi dưới áp suất kém, thu được kết tủa từ dich

trích alcol của lá, kết tủa từ dịch trích alcol của hoa, cao etanol lá và cao

etanol hoa

2.2/ Sắc Ký Cột Trên Các Kết Tủa Thu Được

2.2.1 / Sắc ký cột trên kết tủa từ dich trích alcol lá

Sử dụng phương pháp sắc ký nhanh cột khô để thực hiện việc sắc ký cột áp

dụng trên các kết tủa cao alcol lá và cao alcol hoa

Tiến trình nạp cột được thực hiện như sau:

Cho silica gel vào phễu đến tận miệng; vừa gõ nhẹ ngoài thành phễu

Bột Cao để chất hấp thu tụ gọn lại Gắn phễu

Silica gel z ⁄ `

ea§ vào hệ thống tạo áp suất kém và

Vòi nối dùng nút thủy tỉnh có đáy bằng để

chan nén ép đều silica gel xuống đáy

không phễu, tạo thành khối cứng, đổng

nhất; chặt chế; có bể mặt bằng

Dung dịch

giải ly phẳng và có chiều cao 5 cm Kế đến

cho dung môi sử dụng đầu tiên vào Hình 6 : Hệ thống sắc ký

nhanh cột khô

GVIID: DềG T$ NGUYỄN KIM PHI PHIJNG HVTH: NGUYEN THANH HOANG

Góp phần tìm hiểu thành phần hóa học cây Šơn Cúc Hai Hoa

Trang 46

TT

để cân bằng cột Sau đó, nạp mẫu ở dạng bột khô vào đầu cột rồi tiến hành

giải ly Dung dịch giải ly được hứng vào những lọ khác nhau, mỗi lọ 50 ml Các lọ có kết quả sắc ký lớp mỏng giống nhau được gom lại thành một phân

đoạn

Kết quả sắc ký cột thu được đã được trình bày ở bảng I

e© Khảo sát phân đoạn | bang 1:

Phân đoạn 1 ( bảng 1 ) ở dạng tinh thể không màu Nạp phân đoạn vào đầu

cột thực hiện sắc ký cột, dung môi khởi đầu là n - hexan, tới phân đoạn được

giải ly bằng hệ dung môi n — hexan: benzen 5 % thu được tinh thé hình vảy,

màu trắng Sau khi thực hiện sắc ký lớp mỏng, nhận thấy tinh thể này còn lẫn bẩn nên tiến hành sắc ký điều chế thu được hợp chất BIFLORA - I tinh khiết

e Khảo sát phân đoạn 2 bang 1:

Phân đoạn 2 ở dạng sáp dầu Sắc ký điểu chế nhiều lần, thu được hợp chất

BIFLORA - 2

e Khảo sát phân đoạn 3 bảng l:

Tiến hành sắc ký cột silica gel trên phân đoạn 3, mỗi lọ hứng 10 ml, tới

phân đoạn có dung môi giải ly là benzen: cloroform 2% Sau đó sắc ký điều chế, kết quả thu được 25 mg tinh chất là tinh thể hình kim, mau trắng được đặt

tén 14 BIFLORA - 3

22.2/Sắc Ký Côt Trên Kết Tủa Từ Dịch Trích Alcol Hoa

Sắc ký cột trên kết tủa từ dịch trích alcol hoa cũng bằng phương pháp sắc

ký nhanh cột khô và tiến trình cũng được thực hiện như đã trình bày trong phần 2.2.1 Kết quả thu được đã được trình bày ở bằng Š

ee

CVHD: D&G TS NGUYEN KIM PHI PHUNG HVTH: NGUYEN THANH HOÀNG

Góp phần tim hiéu hành phần hóa học cây &ơn Cúc Hai Hoa

Trang 47

® - Rhảáo sát phân đoạn 5 bảng 2

Phân đoạn này ở dạng sáp màu vàng Sắc ký điều chế nhiều lần phân đoạn

này trong dung môi giải ly là cloroform thu được 2 chất tình khiết đặt tên là

BIFLORA ~ 4 VÀ BIFLORA _ 5,

CVED; D&C TS NGUYEN KIM DHE DHUNG HVTH: NGUYEN THANE HOANG