một số kỹ thuật dùng trong sinh học phân tử

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNGGẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP Chuẩn đầu ra Sau khi kết thúc bài học, sinh viên cĩ thể: 1.Tĩm tắt nguyên lý của một số kỹ thuật SHPT: PCR, Realtime-PCR và

Trang 1

Bài 1: MỘT SỐ KỸ THUẬT DÙNG TRONG

SINH HỌC PHÂN TỬ

Trang 2

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG

GẮN KẾT – PHÁT TRIỂN – HỘI NHẬP

Chuẩn đầu ra

Sau khi kết thúc bài học, sinh viên cĩ thể:

1.Tĩm tắt nguyên lý của một số kỹ thuật SHPT: PCR,

Realtime-PCR và giải trình tự gen

2.Áp dụng các kỹ thuật Sinh học phân tử trong xét nghiệm

hỗ trợ chẩn đốn và theo dõi bệnh

Trang 3

Trang 4

1 Kỹ thuật PCR

(polymerase chain

reaction)

khuếch đại nhanh nhiều

bản sao các đoạn DNA

mà khơng qua tạo dịng.

Trang 5

Trang 6

Kỹ thuật PCR (polymerase chain reaction) là một phương pháp tổng hợp DNA dựa trên mạch khuơn là một trình tự đích DNA ban đầu, khuếch đại, nhân số lượng bản sao của khuơn này thành hàng triệu bản sao nhờ hoạt động của enzyme polymerase và một cặp mồi (primer) đặc hiệu cho đoạn DNA này.

Nguyên lý của kỹ thuật PCR

Trang 7

Trang 8

Trang 9

Trang 10

)

Trang 11

Trang 12

Phát hiện sản phẩm PCR

• Điện di trên gel agarose (submarine agarose gel

electrophoresis)phân loại DNA dựa vào kích thước

1 Trong điện trường, DNA tích điện âm sẽ di chuyển về cực dương, đoạn DNA cĩ kích thước ngắn di chuyển nhanh hơn

so với đoạn cĩ kích thước lớn.

2 Trong khi điện di, ethidium bromide sẽ đan xen vào cấu trúc sợi đơi DNA và làm sợi đơi DNA phát sáng khi quan sát dưới đèn UV

Trang 13

Trang 14

Trang 15

Trang 16

Trang 17

Trang 18

Trang 19

Trang 20

Trang 21

Trang 22

RT-PCR

Trang 23

Multiplex-PCR

Trang 24

Nested PCR

Trang 25

Semi/Hemi-nested PCR

Trang 26

Non-stop nested PCR

Trang 27

Touch-down PCR

Trang 28

Trang 29

3 Realtime PCR

Trang 30

Trang 31

Trang 32

Trang 33

Trang 34

Trang 35

Trang 36

Trang 37

Trang 38

Trang 39

4 Kỹ thuật giải trình tự gen

(sequencing)

Trang 40

Kỹ thuật giải trình tự gen Sanger

• Kỹ thuật nhân bản

DNA

• Đoạn DNA sẽ được

ngừng khơng kéo dài

bởi

dideoxynucleotides.

Trang 41

Trang 42

Trang 43

Trang 44

Trang 45

Trang 46

Trang 47

5 Enzyme giới hạn

• Cắt DNA ở những vị trí xác định

Trang 48

6 RFLP (hiện tượng đa hình về chiều dài của

các đoạn DNA do enzyme giới hạn)

Trang 49

7 Dấu ấn DNA (DNA fingerprinting)

Trang 50

Trang 51

9 Phương pháp Northern blotting

• Phát hiện RNA

• Phương pháp

Dot-blotting,

Slot-blotting

Trang 52

10 Kỹ thuật lai tại chỗ huỳnh quang FISH

Trang 53

Trang 54

Trang 55

Câu hỏi lượng giá

• Trình bày các bước của kỹ thuật PCR

• Trình bày các thành phần của phản ứng

Realtime-PCR

• Tĩm tắt nguyên lý của kỹ thuật giải trình tự gen sequencing

Trang 56

Tài liệu tham khảo

• Nguyễn Văn Thanh (2007) Sinh học phân tử (Dùng cho Đào tạo Dược sĩ Đại học) Nxb Giáo dục, Hà Nội.

• Tạ Thành Văn (2010) PCR và một số kỹ thuật Y Sinh học phân tử Nxb Y học, Hà Nội.

• Trịnh Văn Bảo (2008) Di truyền Y học Nxb Giáo dục, Hà Nội.

Trang 57

Thiết kế mồi

• Tìm trình tự FASTA

• Thiết kế mồi với độ dài mong muốn

Trang 58

Trang 59

Trang 60

Kỹ thuật giải trình tự gen

Trang 61

Lượng giá kỹ thuật

• Đánh giá sản phẩm:

- DNA tinh sạch

- Sản phẩm được nhân lên đúng kích thước

• Đánh giá báo cáo

Định dạng
Số trang	61
Dung lượng	3,65 MB