Y sinh học phân tử thực hành bài 3 kỹ thuật sinh học phân tử ứng dụng trong chẩn đoán một số bệnh không truyền nhiễm DHQ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG Bài 3: Kỹ thuật sinh học phần tử ứng dụng trong chân đoán một số bệnh không truyền nhiễm GAN KET — PHAT TRIEN — HOI NHAP... TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘ

Trang 1

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG

Y sinh hoc phan tw

TS Duong Hong Quan Trung tam Xét nghiém, Truong Dai hoc Y té cong cong

GAN KET — PHAT TRIEN — HOI NHAP

Trang 2

Bài 3: Kỹ thuật sinh học phần tử ứng

dụng trong chân đoán một số bệnh

không truyền nhiễm

Trang 3

Sau khi hoc xong, sinh vién co kha nang:

1.T6m tắt nguyên lý và ứng dụng của một sô kỹ thuật SHPT ứng

dụng trong chân đoán bệnh không truyền nhiễm

2 Trình bày được các bước của kỹ thuật

3 Phân tích đúng kết quả

Trang 4

Bệnh không truyên nhiễm

4 Quy trinh tach chiét DNA/RNA

+ Kỹ thuật xác định tang biéu hién HER2

+ Kỹ thuật xác định đột biên EGFR

Trang 5

Quy trình tách chiết DNA/RNA

Trang 6

DNA Quantity & Quality

Trang 7

Trang 8

Trang 9

Trang 10

Mini spin column—NucleoSpin totalRNA FFPE

Mini spin column

elution volume

3 Ỗ 3 ỗ 30-50 HỈ

Paraffin

Paraffin Dissolver Lysis and x

ramoval removal decrossinking „4 RNA/ = nau ~~ RNA _ "

3 ) \ DNA “— digestion —— washing Ce elution

binding

XS column elution volume

5-30 pl

{>

a ồ

XS column—NucleoSpin totalRNA FFPE XS

Trang 11

Magnet non-DNA

Material

GẮN KẾT — PHÁT TRIẾN — HO!

Trang 12

s* Phương pháp huỳnh quang

Trang 13

100% DNA 60%DNA/40% protein 40%DNA/60% protein 30%DNA/70% protein 20%DNA/80% protein 14%DNA/86% protein 1O%DNA/90% protein

<L 4

T T 1

260 280 300 Wavelength (nm)

T

Trang 14

DNA template

Trang 15

Trang 17

Trang 18

Kỹ thuật xác định tăng biểu hiện HE.R2

Trang 19

“2Đâu ân sinh học và chân đoán tiên lượng bệnh

“Screen for disease

Biomarker

GAN KET - PHAT TRIEN — HOI NHAP

Trang 20

+» Dâu ân chân đoán/dự báo bénh (Predictive marker)

Trang 21

+ Tiên lượng hiệu quả điêu trị bệnh

Trang 22

+

+» Chân đoán/dự báo tiễn trình phát triển bệnh

+ *» Chấn đoán/dự báo pháp đô điêu trị bệnh

Trang 23

——Dang dau an sinh hoc va chan đoán tiên lượng bệnh

s* Biéu hién gen

s* Nhân gen

@ “? @

¢ Giai trinh tu gen

Trang 24

Trang 25

Trang 26

Trang 27

s* Biéu hién protein

Colored Product : ee:

Substrate, @ @, — | Secondary Antibody \ OG 2% Substrate

| i Substrate yr Secondary Antibody ae i é HE

| € Conjugate Antigen

| Primary Antibody

Primary Antibody

19 @ Axe (comm Antibody

(go _ Fixed Cell Tissue DIRECT ELISA INDIRECT ELISA SANDWICH ELISA COMPETITIVE ELISA

Proteins

Trang 29

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG HER2 và điêu trị ung thư

Extracellular space HER2-HER2 HER2-EGFR HER2-HER3 HER2-HER4

Trang 30

va diéu tri ung thư

The HER Family of Receptors

Trang 31

Esophagus 0-50 \ %

GẮN KẾT - PHÁT TRIẾN — HỘI NHẬP

Trang 32

HER2 và điêu tri ung thư

Trang 33

up to ~ 2,000,000

HER2 receptors

Pegram MD, et al Cancer Treat Res 2000;103:57-75

Ross JS, et al Am J Clin Pathol 1999;112(supp! 1):S53-S771

Slamon DJ, et al Science 1987;235:177-182

Excessive cellular division

GAN KET - PHAT TRIEN — HOI NHAP

Trang 34

+ Tái phát sớm hơn sau điêu trị băng hóa trị liệu

* Quyết định pháp đô điều trị với thuốc điêu trị

trang dich HER2

Trang 35

HER2 gene amplification

HER2 normal 6—7 years

Trang 36

HER2 và điêu tri ung thư

Trang 37

Trang 39

Phương pháp xác định HER2

Trang 40

Trang 41

SCORE 0 SCORE 1+ SCORE 2+ SCORE 3+

2:

;= An O T— " aN

a SS” =>

| Spectrum of HER2-low carcinomas

No benefit from anti-HER2 agents, lack = Possible benefit from new generation of ADCs oettaching to the HER2 receptors Benefit from anti-HER2 agents blocking addition

of HER2 expression and HER2 pathway present on the cell membrane and then delivering the chemotherapeutic to HER2 pathway hyperactivation stemming

activation compounds from HER2 overexpression and amplification

IHC

HER2-pos carcinomas

Trang 42

FISH positive

_

Trang 44

HER2 va điêu trị bệnh nhân ung thư

Amplified Result, Score > 2 T5 n nhc = Positive Result, Score 3+

Trang 45

Thuốc diéu tri trang dich HER2

° Pertuzumab ° Neratinib

Trang 46

Trang 47

Trang 48

Lapatinib

Phospholipid cell membrane

Trang 49

Kỹ thuật xác định đột biến EGFR

Trang 50

pY980 IGF-1R

=) pIGF-1R

= J pcMET IRS-1

Gene transcription, Celtular effects

GẮN KẾT — PHÁT TRIẾN — HỘI NHẬP

Trang 51

7p11.2

Dot bién gen EGFR trong UTPKTNB

G719S (c.2155G>A) G719C (c.2155G>T) G719A (c.2156G>C) S720F (c.2159C>T)

Exon 19 deletion**

D770 N771 tinsNPG O770 N771 timsSVQ D770 N77T1 tinsG)

T783A (c.2347A>G S768! (c.2303G>T) V765A (C2527A-€

T7S0AM (c.2

V769SL (c2 M771T (c2 L858R (c.2573T>G)

L861Q (c.2582T>A) L861R (c.2582T>G)

Trang 52

TRUGNG DAI HOC Y TE CONG CONG

Trước XN ¬ 2 - - Bệnh phẩm xét nghiệm

Nhận bệnh phầm, hoàn ; P ¬ 5

thành thủ tục — Kết quả giải phầu bệnh

— Hóa đơn thanh toán

Ngày 1 Tach DNA - Ủ mẫu loại paraffin (16 giờ, qua đêm)

— PCR/ - Tách DNA (1,5-2 giờ, tùy số lượng mẫu ( 9 5 Ọ y ° ° )

real-time PCR — Thiét lap phan wng (0,5 gid)

Ngày 2 - Chạy máy (1,5 giờ cho mỗi loại xét nghiệm)

Phân tích, og , — Phan tich bang phan mém (thoi gian phu thuộc mỗi loại XN,

in ket qua `

số lượng mầu)

— In, ký kết quả, xin duyệt lãnh đạo

GAN KET — PHAT TRIEN — HO! NHAP

Trang 53

> Bệnh nhân già yếu, không đủ sức khỏe để sinh thiết

> Bệnh nhân có u ở vị trí không thể sinh thiết

> Bệnh nhân không còn u sau một thời gian điều trị

> Bệnh nhân không đông ý sinh thiết

Trang 54

TRƯỜNG ĐAI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG

+» Mẫu bệnh phẩm: Khoanh vùng tế bao u

Trang 55

s* Mâu bệnh phâm

Tế bào ung thư

không đột biên

Tế bào ung thư

mang đột biên GAN KET — PHAT TRIEN — HO! NHAP

Trang 56

TRƯỜNG DAI HOC Y TE CONG CONG

= Quy trình xét nghiệm PCR

+ Mẫu bệnh phẩm: Số lượng tế bào khối u

Tế bào Tế bào Tế bào ung thư Tế bào ung thư

không đột biên mang đột biên

bình thường ung thư

Trang 57

= Cân thiệt phôi hợp trong quy trình xét nghiệm

Trả KỌ cho BS Giải Phẫu Bệnh

Phân tích kết quả trả lời

Bệnh nhân BS Nội hô hấp / Ung

bướu 3 BS phẫu thuật ' BS Giải Phẫu Bệnh Phòng xét nghiệm SHPT

Chan đoán xác định UTPKTBN, ADC/Squamous

Source: IMS Health, integration from different sources

Trang 58

paraffin mang DNA DNA Biotin

Tach DNA San pham PCR > sen

|

San pham mau

|

¬ = Lai với

<< =————— dau do

DNA CG®>==———, 22 N

PCR dac hiéu alen

Trang 59

Standardized

Reporting cobas ® DNA Sample Preparation Kit

Trang 60

` Độ nhạy, đặc hiệu tronø xét nghiệm đột biên øen

EKGFR huyết tương

+ Vận chuyển mẫu làm xét nghiệm EGFR huyết tương

NSCLC patients (n=49)

|

Automated DNA extraction (1.5 mL) Automated DNA extraction (1.5 mL)

EGFR mutational status (qPCR) EGFR mutational status (qPCR) Cobas ® EGFR Mutation Test v2 Cobas ® EGFR Mutation Test v2

Invalid EGFR Wild type EGFR mutated EGFR Wild type EGFR mutated Invalid

2 patients 37 patients 10 patients 34 patients 12 patients 3 patients

Concordance / Sensitivity / Specificity / PPV / NPV

Trang 61

Trang 62

Định dạng
Số trang	62
Dung lượng	3,43 MB