Gi i thi u các k thu t ch n oán
nh di truy n
CÁC K THU T
DI TRUY N T BÀO
Nhi m s c th
Nguyên lý
gi a
c nh c tr ng
lý b ng
Nh n bi t, s p x p toàn b NST, theo
Kích th c
Ch s tâm
u trúc b ng
Ph ng pháp
Nuôi c y / ch n TB phân chia Thu ho ch
c nh c tr ng nh
lý b ng
Ch p hình và phân tích
t qu
Kh o sát toàn b b NST
t th ng s l ng
t th ng c u trúc
n ch
Th i gian: 72h - 2 tu n phân gi i : nh nh t 2 Mb
Th t b i
ng tính gi / Âm tính gi
FISH
Nguyên lý Nguyên t c b sung Ph n ng LAI
n m i t ng ng v i vùng c n kh o sát, ánh d u hu nh quang
Bi n tính DNA b i nhi t Tách i 2 m ch n DNA
Ph ng pháp
ng h p n m i ánh d u hu nh quang
Bi n tính DNA
Ph n ng lai Quan sát, ch p hình và phân tích k t qu
t qu
2 tín hi u, úng NST
t ho c thêm tín hi u Chuy n ch các tín hi u
n ch c hi u nh ng thi u t ng quát
t th ng c u trúc trên 10 Kb
Nhu m toàn b m t NST
Nguyên lý
Ph n ng LAI
i hu nh quang: toàn b 1 NST
Bi n tính DNA
Ph ng pháp Nh FISH
t qu Chuy n n Thêm n
n ch
t th ng c u trúc nh t n
p n Giá thành cao h n FISH
NST quang ph
Nguyên lý
Ph n ng LAI
i hu nh quang: toàn b các NST
Bi n tính DNA
Ph ng pháp Nh FISH
t qu
i NST : m t màu hu nh quang Chuy n n Thêm n
n ch t th ng c u trúc nh
t n
p n Giá thành r t cao
NH NHI M S C TH CÁC K THU T
DI TRUY N PHÂN T
n di
Nguyên lý DNA tích n di chuy n d i n tr ng
c di chuy n tùy kích th c Phân tách DNA theo kích th c, trên m t ch t n n
So sánh v i m t thang kích th c chu n
Ph ng pháp Chu n b DNA và ch t n n (gel)
n di DNA cùng thang kích th c chu n
Phát quang DNA (v i Ethidium Bromide và tia c c tím)
Phân tích kích th c DNA n di
t qu Kích th c n DNA chính xác
Lo i gel
Th i gian n di, n th
n ch phân gi i Bán nh l ng
PCR
Nguyên lý Theo c ch t sao DNA Các u ki n
n thi t tách r i c a hai m ch DNA g c
n m i
t ng h p m ch DNA m i b i enzyme
Phóng i m t n DNA c hi u lên nhi u l n
Ph ng pháp Chu n b các n m i
Bi n tính DNA, lai n m i, t ng h p
p l i 20 - 35 l n
Ki m tra s n ph m / n di Tinh s ch
t qu
Có SP/ không có SP
2 phiên b n / 1 phiên b n
dài SP Thêm n, l p n
nh l ng SP
1 phiên b n / 2 pb / 3pb
d ng SP cho các k thu t khác
Gi i trình t
o dòng
n ch
c hi u nh ng không t ng quát
t gi i h n
Nguyên lý
t DNA m ch kép t i v trí xác nh
Ph ng pháp
Ch n enzyme
DD m thích h p, 37ºC
t qu
t r i DNA Phân tích kích th c
n DNA c t r i Bình th ng
t n / thêm n
d ng cho các k thu t khác
o dòng
n ch Nhi u m c t
Southern-Blot
Nguyên lý
n m i ánh d u phóng x Phát hi n và làm hi n hình DNA ích
Ph ng pháp
Bi n tính DNA
n di
Chuy n sang màng c nh Nitrocellulose
Nylon
nh b ng nhi t / UV
Ph n ng LAI Ghi tín hi u phóng x
t qu DNA ích có / không Kích th c DNA ích (so v i chu n)
n ch thu t c ng k nh
d ng ch t phóng x phân gi i th p và bán nh l ng
CGH array
Nguyên lý Microarray và nh ng n m i: spots DNA b nh nhân và ch ng: xanh lá và
Ph n ng lai DNA b nh nhân và
ch ng trên microarray
So sánh c ng tín hi u BN và ch ng
Ph ng pháp
Chu n b microarray t ng ng vùng c n kh o sát DNA b nh nhân và DNA ch ng nhu m hu nh quang
Ph n ng lai R a C nh Scan Phân tích c ng và màu s c các tín hi u
t qu Tín hi u DNA b nh nhân ng: thêm n, nhân n
Gi m: M t n
t th ng s l ng
t th ng c u trúc : thêm n, nhân n, m t n
n ch
t th ng c u trúc d ng chuy n
n, o n Giá thành cao
Gi i trình t DNA
Nguyên lý
DNA polymerase t ng h p DNA
dideoxynucleotide ng ng ph n ng
4 lo i dideoxynucleotide A, T, G, C
Nhi u s n ph m - kích th c khác nhau
n di, c trình t chu i DNA
4 màu hu nh quang thay th cho
ánh d u phóng x
Ph ng pháp
ng h p DNA v i nucleotide th ng
và 4 lo i dideoxynucleotide A, T, G, C
hu nh quang
n di
c tín hi u hu nh quang
trình t chu i DNA
t qu Trình t chu i DNA chính xác
n ch
c c n DNA ng n 500 - 650 pb
Phân tích d u
n di truy n
Nguyên lý
u n di truy n: Allelle cha và m : khác nhau methyl hóa Bisulfite bi n C thành U
u methyl hóa: không tác d ng PCR phóng i các n DNA
Có SP = methyl hóa
Không SP = không methyl hóa
nh l ng ho c bán nh l ng SP
t qu
l ng allelle methyl hóa bình th ng (1) hay b t th ng (0 ho c 2)
NH GIEN
Gioi thieu cac ky thuat chan doan di truyen.mmap - 12/17/2010 - Mindjet