Phương pháp Sắc ký lỏng HPLC

Qu¸ tr×nh s¾c kýPha tĩnh Sắc đồ khai triển Sắc đồ Rửa giải... Sù do·ng pic -ThuyÕt vÒ §Üa... Sù do·ng pic -ThuyÕt §éng häc• KhuÕch t¸n xo¸y • KhuÕch t¸n däc • Sù chuyÓn khèi vËn chuyÓn c

Phương pháp Sắc ký lỏng

HPLC

PGS Ph¹m gia HuÖ

Hµ Néi 10-2010

Kh¸i niÖm më ®Çu v SK ề

Chất PT Phân bố giữa 2 pha

A

A = chất Phân tích S = Pha tĩnh M = Pha động lỏng

Qu¸ tr×nh s¾c ký

Pha tĩnh

Sắc đồ khai triển

Sắc đồ Rửa giải

aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaaaaaa

t 1

t 2

1.3 Ph©n lo¹i s c ký l ng ắ ỏ

• Theo bản chất của phương pháp

Hấp phụ, Phân bố, Trao đổi ion, SK theo cỡ, SK ái lực, SK điện

• Theo bản chất của các pha

pha thuận, pha đảo

• Theo cách tiến hành:

SK khai triển, SK rửa giải

• Theo phương tiện:

SK trên cột, SK trên mặt phẳng (giấy, lớp mỏng)

Sù do·ng pic -ThuyÕt vÒ §Üa

Sù do·ng pic -ThuyÕt §éng häc

• KhuÕch t¸n xo¸y

• KhuÕch t¸n däc

• Sù chuyÓn khèi (vËn chuyÓn chÊt)

Sù do·ng pic -Hi u l c c a c t ệ ự ủ ộ

• Chiều cao đĩa lý thuyết H

• Số đĩa lý thuy t c a c t: ế ủ ộ N = L / H

• Số đĩa lý thuy t c a 1 m c t: n ế ủ ộ

 H=0,001 cm, n= 100 000

Độ phân giải

• Cách tính RS= 2(tRB-tRA) / (wA+w2)

• Các yếu tố ảnh hưởng

R S = 2(t RB -t RA ) / (w A + w B )

Rửa giải thường

Rửa giải thường

Röa gi¶i gradient

¦ng Dông S K trong PT

• §Þnh tÝnh

• Thö tinh khiÕt

• Đ nh l ị ượ ng

M¸y HPLC

1 2

Bơm

Detector

Máy ghi

Cột SK Tiêm mãu

Bình Pha Động

Cột Cột

C2, C8, C18, Phenyl

hay dïng nhÊt

Pha tÜnh cña BPC

CH3 CH3 CH3 CH3 | | | |

- Si - OH + Cl - Si – R → - Si O Si – – – R

| | | |

CH3 CH3 CH3 CH3

Nhãm silanol DÉn chÊt DÉn chÊt

cña silicagel Clorosilan Siloxan

– Pha thu ậ n : R = NH2, CN (phân cực)

– Pha đảo: R = C8, C18, C6H5 (không phân cực)

PT thuèc trõ s©u

C8 MeOH-H 2 O gradient 67-80%

Sắc ký Trao đổi ion

• Chất trao đổi ion: c ỏc ionit

Các loại cationit (SCX, WCX)

anionit (SAX, WAX)

Đặc điểm m nh, y u, dung lạ ế ượng

S K cation

S K anion

S K chất hữu cơ

S K läc trªn Gel vµ ThÈm thÊu trªn gel

– Nguyên tắc thay dung môi, dd đệm

– Thay đổi tốc độ,

– Gradient (chương trình)

– Bọt khí

Những điều cần lưu ý 2

– tự động, thủ công

- chuẩn bị mẫu: bụi, nồng độ, thể tích

– Động tác tiêm (nạp mẫu, tiêm)

– Tránh nhiễm (lọ đựng, bơm tiêm, van tiêm)

Những điều cần lưu ý 3

– Các loại cột

– Lý lịch cột: nội dung N~10-15000

– Sử dụng, bảo quản theo hướng dẫn

– Chiều dung môi

– Cột bảo vệ

– Thay dung môi, dd đệm

– Thay đổi tốc độ

Lo i DAD: 3 chi u, peak purityạ ề

Bảo Dưỡng, hiệu chuẩn