Bài giảng Đại Cương về Sắc ký

Sù do·ng pic -ThuyÕt §éng häc• KhuÕch t¸n xo¸y • KhuÕch t¸n däc • Sù chuyÓn khèi vËn chuyÓn chÊt... Röa gi¶i th êng... Röa gi¶i th êng... Röa gi¶i gradient... Bộ bơm mẫu, bơm mẫu tự động

L p C KiÓm NghiÖm ATVSTP ớ Đ

Mét sè kh¸i niÖm më ®Çu

§Þnh nghÜa

Qu¸ tr×nh S¾c Ký

Ph©n lo¹i c¸c ph ¬ng ph¸p s¾c ký

1.1 Mét sè kh¸i niÖm më ®Çu

Chất PT Phân bố giữa 2 pha

A

A = chất Phân tích S = Pha tĩnh M = Pha động

1.2 Qu¸ tr×nh s¾c ký

Pha tĩnh

1.3 Ph©n lo¹i s c ký l ng ắ ỏ

• Theo bản chất của phương pháp

Hấp phụ, Phân bố, Trao đổi ion, SK theo cỡ, SK ái lực, SK điện

• Theo bản chất của các pha

pha thuận, pha đảo

• Theo cách tiến hành:

SK khai triển, SK rửa giải

• Theo phương tiện:

SK trên cột, SK trên mặt phẳng (giấy, lớp mỏng)

Th ời gian chết

Các đại l ợng đặc tr ng

• Thời gian lưu tR

• Thời gian l u hiệu chớnh t’R = tR – t0

• Hệ số dung l ợng k’ = t’R / t0

• Hệ số chọn lọc α = t’R,B / t’R,A

Sù do·ng pic -ThuyÕt §éng häc

• KhuÕch t¸n xo¸y

• KhuÕch t¸n däc

• Sù chuyÓn khèi (vËn chuyÓn chÊt)

Sù do·ng pic

Sù do·ng pic -Hi u l c c a c t ệ ự ủ ộ

• Chiều cao đĩa lý thuyết H

• Số đĩa lý thuyết của cột: N = L / H

• Số đĩa lý thuyết của 1 m cột: n

• Ví dụ: L=15 cm, N=15 000

 H=0,001 cm, n= 100 000

§é ph©n gi¶i

• C¸ch tÝnh RS= 2(tRB-tRA) / ( wA+w2)

• C¸c yÕu tè ¶nh h ëng

Röa gi¶i th êng

Röa gi¶i th êng

Röa gi¶i gradient

¦ng Dông S K trong PT

• §Þnh tÝnh

• Thö tinh khiÕt

Đường chuẩn thêm

M¸y HPLC

1 2

4

5

6

Dung môi

Bơm

Detector Cột SK

Tiêm mãu

Bộ bơm mẫu, bơm mẫu tự động

Bơm tiêm, Van tiêm

cña silicagel Clorosilan Siloxan

– Pha thuận : R = NH2, CN (phân cực)

– Pha đảo: R = C8, C18, C6H5 (không phân cực)

PT thuèc trõ s©u

C8 MeOH-H2O gradient 67-80%

Sắc ký Trao đổi ion

• Chất trao đổi ion: cỏc ionit

Các loại cationit (SCX, WCX)

anionit (SAX, WAX)

Đặc điểm mạnh, yếu, dung lượng

S K cation

S K anion

S K chất hữu cơ

S K läc trªn Gel vµ ThÈm thÊu trªn gel

• Bơm: Áp suất 1 bar ~ 105 Pa ~ 14,5 psi

– Nguyên tắc thay dung môi, dd đệm

– Thay đổi tốc độ,

–

Những điều cần lưu ý 2

• Tiêm mẫu :

– tự động, thủ công

- chuẩn bị mẫu: bụi, nồng độ, thể tích

– Động tác tiêm (nạp mẫu, tiêm)

– Tránh nhiễm (lọ đựng, bơm tiâm, van tiêm)

Xin Cảm Ơn !

Danke

Schon !