Thực hành hóa sinh học

NGUYÊN TẮC TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM HÓA SINH 1.1.1... Bảo quản dụng cụ thủy tinh... Pha dung dịch của chất rắn trong nước theo nồng độ phần trăm a.. Pha dung dịch của chất rắn không ngậm

ệ T ự H viên ệ

T ệ N ệ

on u n n 29 t n 11 năm 2015

n so n

Ậ

trang ƯƠN Á N UYÊN TẮ TRON T Í N IỆM Ó SIN Ọ 1

N ệ 1

ù ệ 7

3 P 15

ƯƠN .PROTEIN 22

ệ 22

2.2 C 26

2.3 C ầ 32

2.4 C 39

2.5 X ầ ằ 44

ƯƠN 3.GLUCID 47

3.1 G ệ glucid 47

3.2 C 51

3.3 C 59

ƯƠN 4 LIPID 67

4.1 G ệ 67

4.2 C ệ 71

4.3 C ỉ ố 74

4.4 C 79

ƯƠN 5 VITAMIN 83

5.1 G ệ 83

5.2 C vitamin 85

5.3 C 91

ƯƠN 6 K ẢO SÁT ENZYM 98

6.1 K 98

6.2 K ừ ầ 99

6.3 K 102

ƯƠN 7 ACID NUCLEIC 104

7.1 G ệ 104

7.2 P 105

7 3 107

7 4 109

ƯƠN 8 SỰ TR O ỔI ẤT 113

8.1 Sự ổ 113

8.2 Sự ổ 116

8.3 Sự ổ 118

TÀI LIỆU T M K ẢO 121

ù 17

Tỉ ố 17

1 ệ ố ổ ố ẫ 39

B 3 KM O4 (1/30 N) 61

M ự 2

è 7

Hình 1.3 Cách và 8

Hình 1.4 Cách 8

5 ở 8

6 ệ N 9

7 M ố 11

8 ố 12

S 22

23

3 24

Hình 2.4 T ỡ 24

5 K ằ ố 31

6 K 37

7 K 41

8 ẩ 45

3 α và β 48

3 48

3 3 amylose 48

3 4 49

3 5 50

3 6 50

3 7 50

3 8 K 53

3 9 K 56

3 K ệ 57

4 68

4 2 sáp 68

4 3 chollesterol 68

4 4 ố 69

Hình 4.5 ệ ố S 80

5 ố 84

8.1 Ố ệ 116

1

YÊ Ắ Í Ệ Ó Ọ 1.1 NGUYÊN TẮC TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM HÓA SINH 1.1.1 quy p òn t í n m Sự ự ệ ầ M ệ ễ

V ự

ệ hóa sinh ự ệ :

1 ệ ự ữ ệ ự ệ ự ệ

ệ ự

M ố ự phòng thí ệ ỉ ữ ệ ố ầ ự ỗ

ở

3 K ố ố ù ỡ

ệ ệ

4 T ẫ ệ ệ óa N

ự ố ệ

5 ệ ố ù ệ óa ù ũ óa P ẩ

ố

6 ố ự ầ ệ ố ỗ ù

ố ỏ Hóa ổ

nhãn 7 K ự ẫ ệ

é

8 P ệ ự ệ

ự

9 K é ẫ ệ

T ự ỏ ẫ

Nếu vi p ạm n ữn qu địn tr n tuỳ t eo mức độ vi p ạm m sin vi n c n

bộ sẽ bị ìn t ức kỷ luật t eo mức độ vi p ạm (N ệ – ự

, N ễ (2003))

1.1.2 Quy tắ về kĩ t uật o ểm khi làm thí n m T N ễ (2003), q ệ :

1.1.2.1 Thí nghiệm với chất độc T ệ ố ầ

ỏ CO ( %

mg/L ũ

amoniac, clor ; ỏ ỏ

metylic, phenol, acid ỏ Uố

mL ù ; ũ ữ ễ

: - N ệ ở út h ở

ở ỉ ố

- K ằ ệ P ẩ

K ũ ầ

ỉ ù ẩ ẹ ũ - ự ỏ ở K ổ ở

ỏ ù ũ N ỏ ố ầ ỳ

K ằ

- P ở ;

ỏ

M ự

1.1.2.2 Thí nghiệm với các chất dễ ăn da và làm bỏng

ễ ỏ acid m, : 2SO4, HNO3, HCl, HBr,

H3PO4 : N O KO K :

- P ữ ầ ệ N ù ầ ầ - K ự acid ; ổ

- Khi pha loãng acid ầ ổ acid

ừ ỏ

- K ễ ỏ ệ ố

ố ệ ệ ố ệ phía

1.1.2.3 Thí nghiệm với các chất dễ bắt lửa ễ ầ , benzen, ac ễ ẩ ệ

- N ù ữ ỏ ễ ữ

ự ệ P ễ

K ầ ự ỏ

- K ễ ự

1.1.2.4 Thí nghiệm với các chất dễ nổ ễ ổ ở ệ ố K

ệ ầ ự ệ ữ ầ :

- T ễ ổ K ễ ổ ầ

- K ỗ ổ ầ ù

K ự ệ ữ

t ệ

- T ệ ố ữ ệ

ỗ ữ ệ ầ

- T ố ẳ

ẫ

ỗ ổ

- K ễ

ổ

ằ

- P ỏ : ù ẩ 3BO3 3% acetic CH3 OO % ẹ ỏ ầ ữ ỏ

ằ 1%

- P ỏ : ù ù ẩ ầ ỏ

N 2S2O3 %

- K ỏ ố CuSO4 5% S

ẫ ỏ T ệ ố g bôi vase ố ỡ ỏ

- N ỏ ỏ ỏ

ằ ằ N 2S2O3 5% bôi vase ữ

1.1.3.3 Tai nạn ở mắt

- Acid : ù

ầ ằ

NaHCO3 1% - : ằ ằ H3BO3 1% - M : ằ ữ ở ở ệ ệ ầ

1.1.3.4 Trường hợp bị ngộ độc - ệ : ệ ầ ằ

NaHCO3 % N ố ố -3 ỗ ie hydroxid (Mg(OH)2) ữ - ệ : ệ ầ ằ % N

ố ố vào - N : ỏ i thoáng mát, ỏ ầ N ở ệ ệ ầ

Chú ý: K

khi ỉ - Ă ố : N

ệ ẳ ằ ệ ố

ố II

ầ SO4 3 ầ Tố ù ỗ

ù MgO g MgO trong 300 L S

ố ệ ệ ệ

- N ầ ệ

ố ữ ệ ố

- N ố ố

nfat: 0,5g CuSO4 trong 1 – 5 ố K

ố ữ ầ ỡ

- N ố

ố ệ ố

natri thiosunfat Na2S2O3 1% ố 5%

ằ Na2S2O3 ù

ố se

- Hít : K ầ ỉ

ệ ở ổ ệ ỗ

ố ầ ở

ầ ằ

amoniac - N : ầ ệ ỗ ở ằ N ầ

- N : ầ ệ ở ở ỗ

ầ ở ằ

- N : K ầ ệ S ố

1.1.3.5 Khi bị thương - K ẹ ù

ù ố ù 9 ° ố iod ố ỏ ù III FeCl3 ầ S

- N

T ù ỏ ầ ữ ỏ ễ ù ằ g

1.1.3.6 Chữa cháy - ỏ: ằ

- : ù O2

- N ở

ầ ố

- K ầ ỡ ữ ữ ù

- K ệ ầ ệ ố ù ữ

mà dùng bình CO2 1.1.3.7 Tủ thuốc cấp cứu của phòng thí nghiệm ỏ ệ ầ ố ự ẵ ố ố :

- d 5% - NaHCO3 8% và 10% - Dung d ammoniac NH3 5% - acid boric H3BO3 1% và 3% - ố KMnO4 1 – 3% ự

- III Fe2Cl3

- acid acetic CH3COOH 1% và 5%

- sunfat CuSO4 5%

- D acid picric C6H3N3O7 3%

- ẩ ù

C c đề p òn tai nạn tốt n ất l tu ệt đối c ấp n nội qu p òn t í

n iệm n e t eo sự c ỉ dẫn của c n bộ p ụ tr c t í n iệm để k ỏi xả ra n ữn tai nạn đ n tiếc tron qu trìn t ực iện

1.2 CÁCH SỬ D NG D NG C NG DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM HÓA SINH

ố ũ K ổ ầ ỏ é M ố

ừ ẩ ầ

Hình 1.5 ở

1.2.3 Cân

ù ệ

T ệ ầ ệ ù 01 g

6 ệ N

1.2.3.1 Cân đĩa (cân Rôbecvan) P ằ ẳ K ỉ ằ N ằ ầ ố ỉ ở ầ cán cân - Q cân: ự : g, 5 5 ố ỏ

ữ ỏ K ù

ở ù ẹ ầ

ằ ẽ

- Cách cân: T ệ ố ự ;

ỏ ự ố ự K

ù ổ ằ ổ

ở K ỏ ố ễ ầ ù

- M ố ố

ố

ữ ố ầ

ổ ầ ầ ằ

- ầ ữ ổ K

ũ ầ ừ ầ ố ữ ỏ

1.2.3.2 Cân phân tích điện tử

- : T ệ ỡ ằ

ệ ự ỉ ở

ệ ố Ư ẹ g - P : ệ N J

ệ : .+ Q ằ ;

ằ ự ỉ

ẫ + ệ ổ

ở ệ

Ấ ệ ố 8 ệ ố 0,0000 ở ẵ ệ N

ố ố 11 Z ỏ ở

ỉ ố g + N ẹ ố

ệ ên màn hình + M ố hóa ố ừ :

cho hóa Z ỏ ở ẵ ệ

ệ ố T ệ ố

+ S ố hóa ỏ N ữ

ệ Chú ý: S Cal; Print; Unit/Menu N ự ố ệ ữ E trên

ẫ 1.2.4 ụn ụ t ủy t n tron p òn t í n m óa s n 1.2.4.1 Khái niệm T ố

ố

ệ ằ

oxit ữ ệ ố ở

1.2.4.2 Yêu cầu đối với dụng cụ thủy tinh dùng trong phòng thí nghiệm

- : ầ

ở ệ ừ

ù ệ

ệ ệ ệ ằ ù ằ 3

ù ự

- ĩa petri: ù

ẩ ệ ữ ỡ

ẩ ầ

- Buret: ù ệ ẩ

K ù ầ é ệ ố ẩ ở ố ố ở N ầ é ằ ầ

ẩ K ẳ é

ẹ ẳ ố ầ ầ ỏ

8 ố

1.2.5 uy tắ sử ụn và rửa ụn ụ t ủy t n 1.2.5.1 Quy tắc sử dụng các dụng cụ thuỷ tinh - K ừ ừ K

ũ

- K ự

ỏ

- N ữ ù K

ố ầ ẫ - P ở

N ệ

ẩ

1.2.5.2 Cách rửa một số dụng cụ thuỷ tinh

S ệ ầ ố ệ

:

- C c rửa cơ ọc: ù

ổ

- C c rửa o ọc: N ù ổ

ù

+ T ằ

N ằ acid

+ N ù her ỗ ù ỳ ẩ ở ố ệ

+ ỗ : ầ ố ố kali bicromat K2Cr2O7 5 ầ ố S 3 ầ

acid = 84 3 ầ ố ừ

ỗ ẹ S ổ ỗ

ỗ ù ầ ổ

ỏ

+ S

ữ

- ố ầ

ự ự

ằ ầ ằ

- ầ

H2SO4 4 R ằ ầ

pH trung tính - ù

ệ ằ

- ổ ừ ố ầ

ỏ ầ ố ệ ù ổ ù

ố ỉ ầ ù X

ằ ầ ằ

- un ị sunfo romat

T n p ần: K2CrO7 60 g; H2SO4 66 mL; N ẫ 1 lít

Cách pha: Hòa tan 60 g K2CrO7 vào 700 mL

ỏ ổ acid ổ ừ ừ 66 mL acid H2SO4 vào

- K ù ằ ù ự oC,

1 atm 3 ù S ù

1.2.5.4 Bảo quản dụng cụ thủy tinh

- P ù ù áy

- N ẩ N :

ẩ ố

là ố :

1.3.2.1 Pha dung dịch của chất rắn trong nước theo nồng độ phần trăm

a Pha dung dịch của chất rắn không ngậm nước

- Ví dụ: Pha 100g dung % ừ ố SO4 5H2O

+ L K ố CuSO4.5H2O = 250 K ố SO4 ằ 6 g

8 4 ẵ acid >> 9 % N acid ữ ẩ ỉ ố con ố ỉ ố ở acid

+ M ố 5 2SO4 10% 5 g acid % N ở ỉ acid 9 % : 25 x 100/92 = 27,2 L acid này (27,2 : 1,824) = 14,9 mL

ầ ầ 5 g NaCl ố

5 mL N ầ M ố

1.3.2.4 Pha dung dịch có nồng độ đương lượng (N)

Ví dụ: Pha 100 mL N ố 2.2 H2O M ố

ố 4 ằ 44 : =

2.2H2O N 2,2 g BaCl2.H2O V mL g BaCl2.2H2O Quá trình pha dung

ự

+ V X = 36 6 37 = 98 65 K 98 65

w w X =

= 83 (mL)

Q ỳ (tím) ữ ỏ môi acid, xanh trong môi

– Cách pha dung dịc quỳ: Hoà tan 1 ỳ

n Thuốc thử Diazo (Pauli)

fanilic 1 g trong 100 mL HCl 1 N n L

N NO2 7% ễ

ỉ ù

2 PROTEIN

Mục đích thí nghiệm

- Hiểu được k i qu t về cấu tạo v tín c ất của protein acid amin

- c địn được tín c ất kết tủa của protein v c c p ản ứn óa ọc c ứn min sự kết tủa t uận n ịc v k ôn t uận n ịc

- T ực iện v iải t íc được c c p ản ứn m u của protein và acid amin

- Địn lượn được hàm lượn protein bằn c c p ươn p p k c n au n ư Kjeldal, Lowry

Hình 2.2

P ự ố R 5 :

- Nhóm I: 7 R ự ỵ : alanine, proline, valine, leucine, isoleucine và methionine

- Nhóm II: 3 ố R e,

tyrosine và tryptophan

- N III 5 ố R ự ệ serine, theonine, cysteine, aspargine và glutamine

- Nhóm IV: 3 R ệ amin

- N V ố R ệ glutamate, trong phân

Hình 2.3

2.1.4 t số tín ất ủa am no a

2.1.4.1 Màu sắc và mùi vị của amino acid

; ố

2.1.4.2 Tính tan của amino acid

ễ ũ ễ

ừ ); khó tan trong alcohol và ether ừ và hydroxyprolin)

2.1.4.3 Tính lưỡng tính của amino acid

T -COOH nên + ệ -NH2

- P ản ứn c un

L ự α- COOH và α- NH2 T

- P ản ứn ri n biệt

ệ α- COOH và α- NH2 α- OO N OO

ầ N- ù -4

S iod E

- ố là: ệ

ố Pb, Fe, Hg, Cu

ũ ẫ T ầ Í 983 M ố

ũ 3 4 protein ố ỏ

P ầ 3 ầ : P ầ 8 mL

N % tein hòa tan trong ố loãng – P ầ ethanone 60 – 7 % L tein u – P ầ 3 NaOH 0,2%, t ầ

5 ỏ (globulin)

- P ầ T ố ệ (NH4)2SO4 ẽ t L ầ anbumin ẽ ổ ỏ

ố ổ P ẽ ố biurê (màu xanh) ỏ ầ protein K protein ằ ố ệ

L ầ Acid hóa ầ

ằ acid % ẽ L Biurê

2.2.2.3 Kết tủa protein bằng dung môi hữu cơ

a uy n tắ

ữ protein trong môi

Sự ẽ ố ệ NaCl Protein ầ protein ẽ

+ T acid, ự carboxil protein ệ ệ

ầ protein ổ ệ Sự protein ở ố

3 protein ổ peptid ầ

ầ 3 protein Sự protein ổ protein – protein

ệ K protein ẽ ở ừ HCl, H2SO4 Sự protein

ở HNO3 t T ầ Ích, 1983) N é ầ ầ V HNO3 thì