Tiểu luận môn Nhập môn công nghệ sinh học: Test kit

Tiểu luận môn Nhập môn công nghệ sinh học: Test kit sẽ làm rõ những một số vấn đề liên quan tới test kit để ta có thể hiểu rõ hơn về công dụng và cơ chế của chúng. Qua đó, chúng ta có thể chọn cho mình bộ test phù hợp để sử dụng. Mời các bạn cùng tham khảo tài liệu để nắm vững nội dung chi tiết.

Tp H  Chí Minh, tháng 11 năm 2016ồ

DANH SÁCH THÀNH VIÊN 

Phan Th  Băng Trâmị 2008130142 ­Tìm ph n khái ầ

ni m và phệ ương pháp mi n d chễ ị

­T ng h pổ ợ

Nhóm trưởngHoàn thành

Tr n Hoài Namầ 2008130116 ­Tìm ph n phầ ương 

pháp mi n d chễ ị Hoàn thànhNguy n Cao Th y Tiênễ ủ 2008140314 ­Tìm ph n phầ ương 

pháp phân tử Hoàn thành 

Vũ Th  Xuân Hi nị ề 2008140083 ­Tìm ph n phầ ương 

pháp phân tử

Hoàn thành 

c a m t s  lo i test kit ­ nh ng lo i liên quan t i ngành công ngh  sinh h c và y dủ ộ ố ạ ữ ạ ớ ệ ọ ược. Bài vi t s  làm rõ nh ng m t s  v n đ  liên quan t i test kit đ  ta có th  hi u rõ h nế ẽ ữ ộ ố ấ ề ớ ể ể ể ơ  

v  công d ng và c  ch  c a chúng. Qua đó, chúng ta có th  ch n cho mình b  test phù h pề ụ ơ ế ủ ể ọ ộ ợ  

Test kit được hi u nôm na là b  ki m tra. Nó là m t b  công c  đ  ki m traể ộ ể ộ ộ ụ ể ể  

m t v n đ  c  th  nào đó b ng cách l y m t lộ ấ ề ụ ể ằ ấ ộ ượng nh  m u và ch  xem k t quỏ ẫ ờ ế ả trong m t th i gian ng n.ộ ờ ắ

Tesst kit không ch  là nh ng s n ph m nh  g n đỉ ữ ả ẩ ỏ ọ ược bán ra ngoài th  trị ườ  ng

nh  ta đã th y mà nh ng b  ki m tra/ch n đoán trong b nh vi n hay phòng thíư ấ ữ ộ ể ẩ ệ ệ  nghi m cũng g i là test kit.ệ ọ

Hi n nay chúng đệ ược thi t k  nh  g n, d  s  d ng, đ  chính xác khá cao.ế ế ỏ ọ ễ ử ụ ộ  

Nh ng s n ph m đ a ra th  trữ ả ẩ ư ị ường nước ta ch  là m t ph n nh  và thông d ng nhỉ ộ ầ ỏ ụ ư que th  thai, đo pH, test nhóm máu, test nử ước, hóa ch t trong th c ph m… ấ ự ẩ

Nh ng   các nư ở ước phát tri n thì còn có các lo i test kit phát hi n m t s  b nhể ạ ệ ộ ố ệ  

nh  ti u đư ể ường, viêm gan B/C, test vi khu n, test DNA, thu c…th m chí là testẩ ố ậ  HIV

2 Phân lo i:  ạ  

Có nhi u phề ươ  ngpháp   s   d ng   trongử ụ  test kit, nh ng phư ươ  ngpháp   ph   bi n   sổ ế ử 

d ng trong ngành côngụ  ngh   sinh   h c   và   yệ ọ  

dược cũng nh  các ngành khác là phư ương pháp ch nẩ  đoán phân t  và phử ương pháp ch n đoán mi n d chẩ ễ ị

Phương pháp ch n đoán mi n d ch, đi n hình là ELISA: ẩ ễ ị ểTest kit ELISA giúp cung c p k t qu  chính xác, nh y c m và nh t quán.ấ ế ả ạ ả ấ  

M i đ u dò protein đỗ ầ ược nghiên c u và các b  d ng c  đứ ộ ụ ụ ược đi u ch nh đề ỉ ể cung c p đ  nh y c m v  m t sinh lý có liên quan. Ngoài ra, b  d ng c  đấ ọ ạ ả ề ặ ộ ụ ụ ượ  cxác nh n s  d ng các lo i m u ph  bi n, bao g m huy t thanh, huy t tậ ử ụ ạ ẫ ổ ế ồ ế ế ươ  ng

và d ch n i nuôi c y t  bào. Lysates (d ch phân gi i) di đ ng đị ổ ấ ế ị ả ộ ượ ử ục s  d ng để xác nh n b  d ng c  phát hi n các protein truy n tín hi u ho c phosphorylậ ộ ụ ụ ệ ề ệ ặ  hóa

u đi m c a nh ng b  kit ELISA:

 Dùng trên 800 đ i tố ượng khác nhau

 T i  u hóa cho hi u su t nh y, chính xác và nh t quán.ố ư ệ ấ ạ ấ

 K t qu  có trong 2,5 ­ 4h.ế ả

 Xác đ nh v i nhi u lo i m u.ị ớ ề ạ ẫ

Phương pháp ch n đoán phân t , đi n hình là PCR và RT­PCR:ẩ ử ể

T  m t khuôn DNA r t nh  nh  giot máu, s i tóc hay m t t  báo… ngừ ộ ấ ỏ ư ợ ộ ế ườ  i

ta có th  khu ch đ i chính xác, tr t t  l n lên đ n hàng tri u b n nh m ph cể ế ạ ậ ự ớ ế ệ ả ằ ụ  

v  cho quá trình kh o sát trong ph n  ngụ ả ả ứPCR đượ ức  ng d ng r t r ng rãi trong y h c : ch n đoán b nh ung th  (tìmụ ấ ộ ọ ẩ ệ ư  HPV trong ung th  c  t  cung, gen APC trong ung th  đ i tràng, gen BRC1 –ư ổ ử ư ạ  BRCA2 trong ung th  vú, gen TPMT trong b nh b ch c u tr  em, gen NF­1,2ư ệ ạ ầ ẻ  trong u x  th n kinh…), nghiên c u kháng nguyên b ch c u ngơ ầ ứ ạ ầ ười…

Trong vi sinh v t thì PCR là m t phậ ộ ương tiên h u d ng đ  phát hi n tácư ụ ể ệ  nhân gây b nh.ệ

II S  phát tri n c a test kit:  ự ể ủ  

1960s and earlier Phát hi n nhi u d u  n sinh h c và xét nghi m ch n đoánệ ề ấ ấ ọ ệ ẩ  

b nh ho c m m b nh. Xét nghi m mi n d ch phát tri nệ ặ ầ ệ ệ ễ ị ể1980’s to 1990’s Nh ng công ty dữ ược bán và mua nh ng công ty ch n đoán,ữ ẩ  

h p nh t thành nh ng đ i th  l nơ ấ ữ ố ủ ớ

1983 Công ngh  PCR s  d ng nhi t và Tag polymerase enzyme ệ ử ụ ệ

đ  khu ch đ i đo n DNA, đây là công c  chính trong ể ế ạ ạ ụnghiên c u công ngh  sinh h c và phát tri n trên toàn th  ứ ệ ọ ể ế

gi iớ

1991 Ra nh ng s n ph m microarrayữ ả ẩ

1997 FDA phê chu n vi c bán các thu c th  c n phân tích cho ẩ ệ ố ử ầ

các phòng thí nghi m đệ ượ ủc  y quy nề

2000 Hoàn thành công trình nghiên c u b  gen ngứ ộ ười

Phòng thí nghi m t  đ ng, công ngh  microaray tăng, ệ ự ộ ệ

được thương m i hóaạ

2002 Kh i đ ng đ  án b n đ  haplotype (SNPs)(d  án ở ộ ề ả ồ ự

HAPMAP)

2003 FDA t ng h p nh ng hổ ợ ữ ướng d n đ  s  d ng markers sinhẫ ể ử ụ  

h c trong nh ng th  nghi m lâm sàng.ọ ữ ử ệ

Bi u đ  v  s  phát tri n c a th  tr ể ồ ề ự ể ủ ị ườ ng ch n đoán trong  ng nghi m (IDV) toàn c u ẩ ố ệ ầ   năm 2012, t  l  các nhu c u c u ch n đoán (theo  ỉ ệ ầ ầ ẩ Genetic Engineering News)

Top 10 công ty IVD (in vitro diagnostics) có doanh thu l n năm 2007(theo top 10 ớ  

Global In­vitro Diagnostics c a Business Insights) ủ

III.C  ch  ch n đoán mi n d ch:  ơ ế ẩ ễ ị  

1  B n ch t c a s  k t h p c a kháng nguyên và kháng th :  ả ấ ủ ự ế ợ ủ ể 

S  k t h p gi a kháng nguyên và kháng th  ph  thu c vào c u trúc b  m tự ế ợ ữ ể ụ ộ ấ ề ặ  

c a kháng nguyên và kháng th  S  k t h p này x y ra gi a m t ph n r t giwoisủ ể ự ế ợ ả ữ ộ ầ ấ  

h n gi a ph n t  kháng nguyên (nhóm quy t đ nh) và m t ph n r t gi i h n c aạ ữ ầ ử ế ị ộ ầ ấ ớ ạ ủ  

ph n t  kháng th  (trung tâm ho t đ ng).ầ ử ể ạ ộ

Theo Pauling, ph n t  kháng th  thẩ ử ể ường hóa tri hai, nghĩa cùng m t lúc có thộ ể 

k t h p v i hai ph n t  kháng nguyên. Còn kháng nguyên đa hóa tr  nên cùng lúcế ợ ớ ầ ử ị  

có th  k t h p v i r t nhi u ph n t  kháng th  Cho nên kháng nguyên và khángể ế ợ ớ ấ ề ầ ử ể  

th  có th  k t h p v i nhau t o thành m t ph c h p hình m ng lể ể ế ợ ớ ạ ộ ứ ợ ạ ưới trong khong gian ba chi u. Vì kích thề ước quá l n nên ph c h p k t t a ho c ng ng k t.ớ ứ ợ ế ủ ặ ư ế

Kháng nguyên và kháng th  có th  k t h p v i nhau theo b t c  t  l  nàoể ể ế ợ ớ ấ ứ ỉ ệ  

nh ng ph n  ng y u đi n u th a hoăc thi u kháng nguyên ho c kháng th  Ph nư ả ứ ế ế ừ ế ặ ể ả  

ng rõ r t nh t lúc s  phân t  kháng nguyên t ng đ ng v i phân t  kháng th

S  k t h p gi a ph n t  kháng nguyên và kháng th  x y ra nh  các l c nh :ự ế ợ ữ ầ ử ể ả ờ ự ư  

l c liên k t ion gi a các nguyên t  ho c các nhóm hóa h c mang đi n tích tráiự ế ữ ử ặ ọ ệ  

d u; l c liên k t c a các c u n i hydro gi a các nguyên t  hydro mang đi n tíchấ ự ế ủ ầ ố ữ ử ệ  

dương v i các nguyên t  mang đi n tích âm, l c Van der Walls gi a hai phân tớ ử ệ ự ữ ử 

ph  thuôc vào tụ ương tác gi a các đám mây đi n t    m t ngoài và l c   th y n uữ ệ ử ở ặ ự ố ủ ế  

di n ti p xúc c  phía kháng nguyên và kháng th  đ u có các acid amine   th y thìệ ế ả ể ề ố ủ  kháng nguyên và kháng th  k t h p, nể ế ợ ướ ẽ ị ẩc s  b  đ y ra t o nên l c g n k t gi aạ ư ắ ế ữ  các acid amine   th y đó, s  k t h p này không ph i là m t ph n  ng hóa h c.ố ủ ự ế ợ ả ộ ả ứ ọ

Ph n  ng k t h p gi a kháng nguyên và kháng th  r t đ c hi u. M t khángả ứ ế ợ ữ ể ấ ặ ệ ộ  nguyên ch  k t h p v i kháng th  do nó kích thích c  th  t o thành. Do đó ph nỉ ế ợ ớ ể ơ ể ạ ả  

ng k t h p kháng nguyên và kháng th  đ c s  d ng đ  xác đ nh kháng nguyên

ho c kháng th  n u m t trong hai phân t  đã bi t. Hi u giá c a kháng th  trongặ ể ế ộ ử ế ệ ủ ể  huy t thành ngế ười ho c đ ng v t có th  xác đ nh nh  kháng nguyên đã bi t  và doặ ộ ậ ể ị ờ ế  

đó cho bi t s  ti p xúc trế ự ế ước đó v i kháng nguyên. Ngớ ượ ạc l i nh  kháng th  đãờ ể  

bi t nh ng kháng nguyên khác nhau c a m t vi sinh v t có th  nh n m t. M tế ữ ủ ộ ậ ể ậ ặ ặ  khác s  hi u bi t c u t o kháng nguyên cho phép l a ch n thích đáng vi sinh v tự ể ế ấ ạ ự ọ ậ  dùng đ  làm vaccine phòng ng a b nh nhi m trùng.ể ừ ệ ễ

2 Ph  ương pháp ELISA: 

ELISA (Enzyme – Linked ImmunoSorbent Assay) là m t k  thu t sinh hóa dùngộ ỹ ậ  

đ  phát hi n kháng th  hay kháng nguyên trong m  c n phân tích. Hi n nay ELISAể ệ ể ẫ ầ ệ  

được s  d ng r ng rãi trong nhi u lĩnh v c nghiên c u nh  y h c, nông nghi p vàử ụ ộ ề ự ứ ư ọ ệ  

đ c bi t là trong quy trình ki m tra an toàn ch t lặ ệ ể ấ ượng các s n ph m th c ph m.ả ẩ ự ẩNguyên t c:  ắ Phương pháp ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay­ xét nghi m h p th  mi n d ch liên k t v i enzyme) có r t nhi u d ng mà đ c đi mệ ấ ụ ễ ị ế ớ ấ ề ạ ặ ể  chung là đ u d a trên s  k t h p đ c hi u gi a kháng nguyên và kháng th , trong đóề ự ự ế ợ ặ ệ ữ ể  kháng th  để ược g n v i m t enzyme. Khi cho thêm c  ch t thích h p (thắ ớ ộ ơ ấ ợ ường là 

nitrophenol phosphate) vào ph n  ng, enzyme s  th y phân c  ch t thành m t ch t cóả ứ ẽ ủ ơ ấ ộ ấ  màu. S  xu t hi n màu ch ng t  đã x y ra ph n  ng đ c hi u gi a kháng th  v iự ấ ệ ứ ỏ ả ả ứ ặ ệ ữ ể ớ  kháng nguyên và thông qua cường đ  màu mà bi t độ ế ược n ng đ  kháng nguyên hayồ ộ  kháng th  c n phát hi n.ể ầ ệ

Phương pháp này được thi t k  cho vi c phát hi n và đ nh lế ế ệ ệ ị ượng v t ch t nhậ ấ ư peptides, protein, antibodies, hormone,… Đôi khi nó còn được g i b i m t tên g iọ ở ộ ọ  khác là EIA (Enzyme ImmunoAssay)

Kĩ thu t này khá nh y và đ n gi n, cho phép ta xác đ nh kháng nguyên ho cậ ạ ơ ả ị ặ  kháng th    m t n ng đ  r t th p (kho ng 0,1 ng/ml). So v i kĩ thu t mi n d chể ở ộ ồ ộ ấ ấ ả ớ ậ ễ ị  phóng x  (RIA­ Radio Immuno Assay) thì kĩ thu t này r  ti n và an toàn h n mà v nạ ậ ẻ ề ơ ẫ  

đ m b o đ  chính xác nh  nhau. ELISA đả ả ộ ư ược dùng đ  xác đ nh nhi u tác nhân gâyể ị ề  

b nh nh  virus, vi khu n, n m, kí sinh.ệ ư ẩ ấ

Kĩ thu t ELISA g m ba thành ph n tham gia ph n  ng là: kháng nguyên, khángậ ồ ầ ả ứ  

th  và ch t t o màu; th c hi n qua hai bể ấ ạ ự ệ ước:

­ Ph n  ng mi n d ch h c: Là s  k t h p gi a kháng nguyên và kháng thả ứ ễ ị ọ ự ế ợ ữ ể

­ Ph n  ng hóa h c: Thông qua ho t tính xúc tác c a enzyme làm gi i phóng oxyả ứ ọ ạ ủ ả  nguyên t  [O] t  Hử ừ 2O2 đ  oxy hóa c  ch t ch  th  màu, do đó làm thay đ i màu c aể ơ ấ ỉ ị ổ ủ  

h nỗ   h pợ   trong   dung   d chị   thí   nghi m.ệ 

(Trích

       t  Chemicon International)  ừ  

3 Phân lo i ELISA:  ạ  

3.1  Direct ELISA (ELISA tr c ti p)ự ế  

 Direct ELISA: Đây là d ng đ n gi n nh t c a phạ ơ ả ấ ủ ương pháp ELISA. Trong đó, kháng nguyên c n phát hi n s  đầ ệ ẽ ược g n tr c ti p lên b  m t giá th  và s  đắ ự ế ề ặ ể ẽ ược phát hi n b ng ệ ằ

m t kháng th  duy nh t (kháng th  này đã độ ể ấ ể ược g n enzyme).ắ

S  đ : Ti n trình th c hi n ph n  ng ELISA tr c ti p ơ ồ ế ự ệ ả ứ ự ế

S  đ  :  Ti n trình th c hi n ph n  ng ELISA gián ti p ơ ồ ế ự ệ ả ứ ế

­  u đi m: Kháng th  g n enzyme có th  s  d ng đ  đánh d u cho nhi u lo i khángƯ ể ể ắ ể ử ụ ể ấ ề ạ  nguyên   nên   ti n   l i   và   kinh   t   h n,   d   dàng   thệ ợ ế ơ ễ ương   m i   hóa.ạ

­ Nhược đi m: Đ  đ c hi u c a t ng kháng huy t thanh là khác nhau. Đi u này d n đ nể ộ ặ ệ ủ ừ ế ề ẫ ế  

k t qu  khác nhau gi a các thí nghi m và do đó c n ph i th  nghi m v i nhi u khángế ả ữ ệ ầ ả ử ệ ớ ề  huy t thanh khác nhau đ  k t qu  có th  tin tế ể ế ả ể ưởng được

3.3

      Sandwich ELISA   

Đây là m t d ng ELISA độ ạ ượ ử ục s  d ng ph  bi n nh t trong th c ti n do nó cho ph nổ ế ấ ự ễ ả  

ng m nh và nh y. Đ c g i là “sandwich” là do k t qu  thí nghi m đ c đánh giá thông

qua s  k t h p c a hai lo i kháng th  là kháng th  b t (capture antibodies) và kháng thự ế ợ ủ ạ ể ể ắ ể phát hi n (detection antibodies).ệ    K  thu t này cũng đỹ ậ ược phân làm hai d ng là Directạ  sandwich ELISA (DAS­ELISA ­ Double antibody sandwich) và Indirect sandwich ELISA (TAS­ELISA – Triple antibody sandwich)

DAS ELISA g m s  dính th  đ ng c a kháng th  vào pha r n (đáy gi ng). Nh ngồ ự ụ ộ ủ ể ắ ế ữ  kháng th  này sau đó k t h p v i các kháng nguyên để ế ợ ớ ược thêm vào. Nh ng kháng nguyênữ  

được pha loãng trong blocking buffer nh m ngăn s  dính không chuyên bi t c a chúng vàoằ ự ệ ủ  pha r n.   đây, nh ng ph n c a blocking buffer không nên ch a b t k  kháng nguyên nàoắ Ở ữ ầ ủ ứ ấ ỳ  

mà có th  k t h p v i kháng th  b t. Sau khi   và r a, ch  còn ph c h p kháng nguyên ­ể ế ợ ớ ể ắ ủ ử ỉ ứ ợ  kháng th  dính vào pha r n.ể ắ

 Kháng th  b t sau đó để ắ ược thêm vào. Do v y, đây là s  k t h p tr c ti p v i khángậ ự ế ợ ự ế ớ  nguyên đích và kháng th  b t. Kháng th  th  hai này có th  gi ng kháng th  m t ho c khácể ắ ể ứ ể ố ể ộ ặ  

v  ngu n đ ng v t hay loài đ ng v t s n xu t kháng th  Sau khi  , r a, thêm c  ch t vàoề ồ ộ ậ ộ ậ ả ấ ể ủ ử ơ ấ  

và đ c trên máy đo quang ph  Vì s  d ng m t kháng th  g n k t v i enzyme nên h  th ngọ ổ ử ụ ộ ể ắ ế ớ ệ ố  

b  gi i h n v  tính chuyên bi t và nh ng thành ph n g n li n v i kháng th  chuyên bi t.ị ớ ạ ề ệ ữ ầ ắ ề ớ ể ệ  

Đi u này gi i h n s  linh ho t c a phề ớ ạ ự ạ ủ ương pháp, ví d  nh  m i kháng th  đụ ư ỗ ể ượ ử ụ  c s  d ng

ph i đả ược đánh d u riêng (cho nh ng kháng nguyên khác nhau). Theo cách này, directấ ữ  ELISA b  gi i h n v  s  chu n b  kháng th  H  th ng cũng b  gi i h n   ch  khángị ớ ạ ề ự ẩ ị ể ệ ố ị ớ ạ ở ỗ  nguyên ph i có ít nh t hai epitope vì c  hai kháng th  b t và phát hi n đ u k t h p tr cả ấ ả ể ắ ệ ề ế ợ ự  

ti p v i kháng nguyên.ế ớ

Kháng th  b t trên pha r n và kháng th  phát hi n có th  ch ng l i nh ng epitope khácể ắ ắ ể ệ ể ố ạ ữ  nhau trên ph c h p kháng nguyên. Do đó, thu n l i khi kh o sát s  khác bi t nh  gi aứ ợ ậ ợ ả ự ệ ỏ ữ  

nh ng kháng nguyên n u s  d ng kháng th  phát hi n và kháng th  b t khác nhau. Vi c sữ ế ử ụ ể ệ ể ắ ệ ử 

d ng cùng m t kháng th  b t và phát hi n có th  d n đ n v n đ  khi có gi i h n v  v  tríụ ộ ể ắ ệ ể ẫ ế ấ ề ớ ạ ề ị  

g n k t s n có cho s  phát hi n. Kích thắ ế ẵ ự ệ ước và m i quan h  không gian c a các epitopeố ệ ủ  trên kháng nguyên đích là r t quan tr ng và có th   nh hấ ọ ể ả ưởng m nh đ n th  nghi m.ạ ế ử ệ

Sandwich ELISA có th  để ược chia làm hai h  th ng:ệ ố

3.3.1 Sandwich ELISA tr c ti pự ế

S  đ  :Ti n trình th c hi n ELISA Sandwich tr c ti p ơ ồ ế ự ệ ự ế

­  u đi m: Có th  phát hi n s  khác bi t nh  gi a các kháng nguyên n u s  d ng kháng Ư ể ể ệ ự ệ ỏ ữ ế ử ụ

th  b t và kháng th  phát hi n khác nhau.ể ắ ể ệ

­ Vì phương pháp này có  u đi m h n h n nh ng phư ể ơ ẳ ữ ương pháp khác mà chúng tôi ch n ọ

phương pháp này đ  ch n đoán b nh virus đang nghiên c u.ể ẩ ệ ứ

Chú ý: n u s  d ng kháng th  b t và kháng th  phát hi n gi ng nhau có th  d n đ n v n ế ử ụ ể ắ ể ệ ố ể ẫ ế ấ

đ  n u có s  gi i h n v  trí k t h p s n có đ  phát hi n. M i quan h  v  kích thề ế ự ớ ạ ị ế ợ ẵ ể ệ ố ệ ề ước và v  ịtrí không gian c a các epitope cũng có  nh hủ ả ưởng đ n th  nghi m.ế ử ệ

3.3.2 Sandwich ELISA gián ti pế

S  đ :  Ti n trình th c hi n ph n  ng ELISA Sandwich gián ti p ơ ồ ế ự ệ ả ứ ế

Chuyên bi t h n Direct sanwich ELISA do antispecies kháng th  đệ ơ ể ược g n enzyme không ắ

ph n  ng v i kháng th  b t kháng nguyên.ả ứ ớ ể ắ

3.4. Ph n  ng  c ch  /c nh tranhả ứ ứ ế ạ

Ph n  ng c nh tranh mang nghĩa là hai ch t tham gia ph n  ng cùng ái l c b t c pả ứ ạ ấ ả ứ ự ắ ặ  

v i ch t th  ba. Ph n  ng c nh tranh đúng đ n thì hai ch t c nh tranh ph i đớ ấ ứ ả ứ ạ ắ ấ ạ ả ược đ a vàoư  

S  khác bi t gi a  c ch  và c nh tranh ự ệ ữ ứ ế ạ

3.4.1. Direct C­Elisa: Ki m tra kháng nguyênể

Trong h  th ng tr c ti p, lệ ố ự ế ượng kháng nguyên trên b  m t đĩa và lề ặ ượng kháng thể 

g n enzyme đã đắ ược chu n đ  đ  t i  u. Kháng nguyên và kháng th  g n enzyme đẩ ộ ể ố ư ể ắ ượ  cthêm vào đĩa cùng m t lúc đ  t o  u th  c nh tranh.ộ ể ạ ư ế ạ

N u kháng nguyên tế ương t  ho c cùng nh  kháng nguyên đã đự ặ ư ược g n trên đĩa thìắ  kháng th  g n enzyme s  g n lên kháng nguyên này. Khi n ng đ  c a kháng nguyên c nhể ắ ẽ ắ ồ ộ ủ ạ  tranh cao s  ngăn c n b t k  s  k t h p c a kháng th  g n enzyme v i kháng nguyên trênẽ ả ấ ỳ ự ế ợ ủ ể ắ ớ  

b  m t đĩa (c nh tranh 100%). N u n ng đ  kháng nguyên c nh tranh gi m (ví d  : phaề ặ ạ ế ồ ộ ạ ả ụ  loãng) s  c nh tranh s  gi m. Nh  v y n ng đ  kháng nguyên c nh tranh càng cao thì đự ạ ẽ ả ư ậ ồ ộ ạ ộ 

h p thu màu càng gi m.ấ ả

Kháng nguyên c nh tranh có th  đạ ể ược thêm tr c ti p vào đĩa n u nó đự ế ế ược pha loãng trong blocking buffer trước khi thêm kháng th  g n enzyme.ể ắ

M c đ  c nh tranh theo th i gian ph  thu c vào m i tứ ộ ạ ờ ụ ộ ố ương quan c a n ng đ  phânủ ồ ộ  

t  c n ki m tra và kháng nguyên trên b  m t đĩa (và m c đ  tử ầ ể ề ặ ứ ộ ương đ ng c a khángồ ủ  nguyên)

Sau khi   và r a, lủ ử ượng kháng th  để ược đánh d u đấ ược đ nh lị ượng sau khi thêm cơ 

ch t. khi không có kháng nguyên trong m u ki m tra hay không có s  tấ ẫ ể ự ương đ ng c aồ ủ  kháng nguyên thì không có s  g n k t v i kháng nguyên đự ắ ế ớ ược đánh d u và không có sấ ự