Các ký thuật cơ bản trong điện di

Điện di là gì? Hiện t ợng các phân tử dịch chuyển trên giá thể trong môi tr ờng có dòng điện chạy qua..  Giá thể có thể là:  Gel acrylamide, agar, agarose, tinh bột…  Kỹ thuật điện d

§iÖn di

Chu Hoang Mau Ph.D

Molecular Biologist

Department of Education, Genetics and Modern Biology

Faculty of Biology and Agrotechnology

§iÖn di

Chu Hoang Mau Ph.D

Molecular Biologist

Department of Education, Genetics and Modern Biology

Faculty of Biology and Agrotechnology

Điện di là gì?

 Hiện t ợng các phân tử dịch chuyển trên giá thể trong môi tr ờng có dòng điện chạy qua.

 Giá thể có thể là:

 Gel (acrylamide, agar, agarose, tinh bột…))

 Kỹ thuật điện di cho phép tách đ ợc các tiểu phần có khối l ợng phân tử khác nhau, dùng cho các nghiên cứu, phân tích những tiểu phần đó.

Nguyên tắc điện di

 Tốc độ dịch chuyển khác nhau theo khối l ợng phân tử của các tiểu phần

 Điện di một chiều: (-) (+)

 Các tiểu phần có thể tích điện (-) hoặc

(+) cho nên phải làm cho tất cả các tiểu phần tích điện (-) bằng cách phủ lên các tiểu phần chất SDS (Soudium dedoxyl

Thiết bị và vật liệu điện di

 Máy điện di

 Bộ nguồn điện

 Kỹ thuật chế gel điện di bao gồm các

b ớc:

 (1) Lắp ráp khuôn gel

 (2) tạo gel

 (3) đổ gel

Điện di DNA

Đặc điểm cấu trúc của ADN

 DNA đ ợc cấu tạo từ các nucleotide

 DNA mạch kép có các cặp base liên kết với nhau bằng các cầu nối hydrro

 Để tính kích th ớc phân tử DNA ng ời ta

dùng đơn vị bp (base pair)- cặp base, cặp

nucleotide 1 Kb (kilo base) = 1000 bp

Tách chiết ADN

 Tách chiết ADN từ mô sống

 Kiểm tra bằng quang phổ hấp thụ ở

260 nm

 Phân tích diện di để khẳng định dung

dịch chứa ADN

Chế tạo bản gel agarose

 Bột agarose đ ợc đun cùng với dung dịch

đệm chứa SDS 0,8%; 1,0%; 1,5%.

 Đổ bản gel

 Lắp ráp vào máy điện di

 Chạy điện di

 Chụp ảnh để phân tích

Preparation of an agarose gel

H×nh ¶nh ®iÖn di ADN

H×nh ¶nh ®iÖn di ADN

§iÖn di Protein

Ph ¬ng ph¸p

Cấu trúc và đặc tính của protein

 Cấu tạo từ khoảng 20 loại acid amin

 Cấu trúc bậc I, II, III, IV Bậc IV gồm

nhiều chuỗi polypeptid

 Chuỗi polypeptid có thể tích điện (+)

hoặc (-)

Quy tr×nh ®iÖn di protein

BiÕn tÝnh

protein

DiÖn di ë thÕ hiÖu kh¸c

nhau

Chôp anh

vµ ph©n tÝch kÕt qua thµnh phÇn ®iÖn

di protein

ChiÕt

protein

Chiết protein

 Protein chiết từ mẫu t ơi bằng dung dịch

đệm ở 40C (NaCl, H2O, Tris.HCl…)) trong 24h

 Ly tâm thu dịch chứa protein

 Dịch chứa protein đ ợc bảo quản ở 200C

Tạo bản gel, tra mẫu và chạy điện di

Chế gel (gel cô và gel tách)

 Đổ gel gồm 2 lớp

 Đ a bản gel vào bộ phận điện di

 Tra mẫu vào giếng

 Chạy điện di

 Chụp ảnh để phân tích

Hinh anh phæ ®iÖn di protein chiÕt b»ng n íc cÊt cña c¸c

MXU21; 4 MXE01; 5 MX1608, 6 MX1103; 7 Tiªu gièng gèc; 8 TXU21;

H×nh ¶nh ®iÖn di protein ë lóa

H×nh ¶nh ®iÖn di protein ë l¹c