Thực tập vi khuẩn đường ruột

HỌ ENTEROBACTERIACEAE: trực khuẩn gram âm sống ở ống tiêu hóa người hay vật • Mọc được trên các môi trường nuôi cấy thông... CÁCH LẤY VÀ CHUYÊN CHỞ BỆNH PHẨM Bệnh phẩm Phân Chất tiết

THỰC TẬP

VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT

DÀN BÀI

HỌ VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT

E coli is a member of the normal intestinal microbiota Other enteric

bacteria (Proteus, Enterobacter, Klebsiella, Morganella, Providencia, Citrobacter, and Serratia species) are also found as members of the normal intestinal microbiota but are considerably less common than E coli

HỌ ENTEROBACTERIACEAE:

trực khuẩn gram âm sống ở ống tiêu

hóa người hay vật

• Mọc được trên các môi trường nuôi cấy thông

PHẢN ỨNG KHỬ NITRATE (NITRATE REDUCTION TEST)

ESCHERICHIA COLI (E.coli)

• Là những VK thường trú, bình thường có ở

ruột (ruột già - vùng hồi manh tràng)…

• Là tác nhân gây bệnh khi ra khỏi nơi thường

trú, có thể gây nhiễm trùng tiểu, nhiễm trùng máu, viêm màng não sơ sinh…

• Có một số chủng E coli có khả năng gây

bệnh tiêu chảy: ETEC, EPEC, EIEC,EHEC

(E.coli O 157), EAEC…

SHIGELLA

• 1888, vi khuẩn gây tiêu chảy và hội chứng lỵ

Không tiết độc tố

SALMONELLA

+ Có tới 2.500 typ huyết thanh Salmonella khác nhau/DNA Homology study Salmonella enterica (Salmonella typhi,

Salmonella choleraesuis, S.typhimurium,S.enteritidis…)

+ Gây bệnh cho người hoặc động vật hoặc cả hai

Four serotypes of salmonellae that cause

enteric fever ( identified in the clinical laboratory by bio-chemical and serologic tests

Salmonella Paratyphi A (serogroup A)

Salmonella Paratyphi B (serogroup B),

Salmonella Choleraesuis (sero-group C1),

và S Typhi (serogroup D)

CÁCH LẤY VÀ CHUYÊN CHỞ BỆNH PHẨM

Lấy bệnh phẩm và chuyên chở bệnh phẩm đúng cách là điều quan trọng nhất để phân lập

vi khuẩn gây bệnh

CÁCH LẤY VÀ CHUYÊN CHỞ BỆNH PHẨM

Bệnh phẩm

Phân

Chất tiết

Nước tiểu

Dịch,

mủ

13

Nguyên tắc: vô trùng, tránh nhiễm tối đa các bệnh

phẩm phải lấy ở vùng da và niêm mạc

MT phong

phú

Chọn khúm Oxidase (-) TSI

Lactose

Các Phản Ứng Sinh Hóa

CÁC LOẠI MÔI TRƯỜNG

CÁC LOẠI MÔI TRƯỜNG

2 MÔI TRƯỜNG PHONG PHÚ

 Dùng để tăng sinh loại vk cần tìm

 Vd:

GN (Gram negative): Salmonella, Shigella

Selenite F broth: Salmonella

CÁC LOẠI MÔI TRƯỜNG (tt)

Môi trường phân lập

MT

không

ngăn chặn

MT phân biệt - không ngăn chặn

MT phân biệt – có chọn lọc lọc cao: Bismuth Sulfit MT phân biệt có chọn

Agar

MT phân biệt có chọn lọc vừa: SS

Mac Conkey, EMB

MÔI TRƯỜNG EMB

MÔI TRƯỜNG MacConkey (MC)

 MT phân lập chọn lọc ít

 TP : peptone, polypeptone,

lactose, bile salt, crystal

violet, sodium chloride, thạch

 Chất chỉ thị màu : đỏ trung

tính,

 Chất ức chế Gr (+) : bile salt,

crystal violet

MÔI TRƯỜNG SS

 MT phân biệt chọn lọc vừa

 Dùng để phân lập Salmonella

và Shigella

 TP: Beef extract, peptone,

lactose, sodium citrate, sodium

thiosulfate, ferric citrate, thạch

green

CẤY BỆNH PHẨM LÊN MÔI TRƯỜNG

PP vạch 3 chiều

E.Coli TRÊN MÔI TRƯỜNG MC/SS

 Không mọc hay mọc rất ít, khúm có màu hồng hay đỏ

HÌNH ẢNH NHUỘM GRAM CỦA E.Coli

Klebsiella TRÊN MÔI TRƯỜNG MC/SS

 Khúm lớn, bóng, nhớt, giữa đỏ, tăng trưởng dính nhau

Proteus TRÊN MÔI TRƯỜNG MC/SS

 Khúm rất nhỏ, không màu, có khi mọc lan rộng ra

giữa khúm tựa như sóng gợn

Shigella TRÊN MÔI TRƯỜNG MC/SS

 Khúm nhỏ, trong, không màu

KHÚM VI KHUẨN

27

Mấy loại

vi khuẩn?

E.coli Klebsiella

Proteus Shigella

Phân biệt?

28

MC/SS Lactose

?

NHUỘM GRAM

30

E.coli Klebsiella

Proteus Shigella

Phân biệt?

31

CÁC PHẢN ỨNG SINH HÓA GIÚP ĐỊNH

DANH VK ĐƯỜNG RUỘT

TSI ( TRIPLE SUGAR IRON)

• Là môi trường hướng dẫn định danh

• TP : glucose, lactose, saccharose

(sucrose)

• Chất chỉ thị màu : đỏ phenol, sulfate

sắt

• Đọc kq :

– Sự lên men glucose

– Sự lên men lactose

– Sinh hơi

– Sinh H2S

CYTOCHROME OXIDASE TEST

• Mục đích : Kiểm tra sự hiện diện của men cytochrome oxidase

p-phenylenediamine dihydrochloride khi có sự hiện diện của cytochrome oxidase và oxy khí trời thì bị oxi hóa tạo thành indophenol blue

• KQ : (+): có màu tím đen

(-): không đổi màu

http://w w w.coleparmer.com/Product/Test_for_cytochrome_oxidase _activity/EW-36151-16

http://chsw eb.lr.k12.nj.us/psidelsky/class%20eleven%20summer.htm

PHẢN ỨNG OXIDASE

MÔI TRƯỜNG SIM

• TP: Beef extract, peptone, peptonized iron, sodium thiosulfate, agar

SỰ SINH H 2 S ( SIM)

SIM có màu đen

KHẢ NĂNG DI ĐỘNG (SIM)

• VK có khả năng di động sẽ làm đục mt cấy

• VK không có khả năng di động chỉ thấy vk mọc theo đường kim cấy, môi trường xung quanh trong

SỰ SINH INDOLE ( SIM)

• Nguyên tắc : vk tiết được men Tryptophanase

có khả năng sx Indole từ Tryptophane Indole kết hợp với p-dimethylaminobenzaldehyde (thuốc thử Kovac) tạo thành hợp chất muối dimethylammonium có màu đỏ

• KQ : (+) có màu đỏ

(-) có màu vàng

SỰ SINH INDOLE ( SIM)

KẾT QUẢ TRÊN MÔI TRƯỜNG SIM

SỰ LÊN MEN ĐƯỜNG

đường sinh acid, biến mt

PHENYLALANINE DEAMINASE TEST

• Nguyên tắc : vk có khả năng sx men phenylalanine deaminase (PAD) để biến đổi phenylalanine thành phenyl-pyruvic acid, khi

có thuốc thử FeCl310% (5 giọt) sẽ tạo thành phức hợp màu xanh

• KQ : (+) màu xanh lá cây

(-) màu vàng

Proteus, Morganella, Providencia

PHENYLALANINE DEAMINASE TEST

UREASE TEST

phân giải urea thành

ammoniac, làm kiềm hóa mt

• KQ: (+) màu hồng đậm

(-) màu hồng nhạt

LYSINE DECACBOXYLASE TEST

• Nguyên tắc : vk lên men glucose tạo mt màu vàng Nếu vk tiết men lysine decarboxylase khử -COOH của lysine tạo cadaverine, mt trở lại màu tím Chất chỉ thị màu: bromocrésol purple

(-) màu vàng

CITRATE TEST

• Nguyên tắc : vk sử dụng citrate như là nguồn cacbon duy nhất, biến sodium citrate thành những chất làm kiềm hóa

mt

• Chất chỉ thị màu : bromothymol blue

• KQ : (+) màu xanh dương

(-) màu xanh lá cây

TÍNH CHẤT SINH HÓA CỦA MỘT SỐ

VKĐR THƯỜNG GẶP

TSI GAS H 2 S MOT IND Sucro

se

Man nitol