Nuôi cấy đỉnh sinh trưởngLimmasets và Cornuet 1949 đã phát hiện rằng ở các cây nhiễm bệnh virus, virus phân bố không đồng nhất trên cây và thường không thấy chúng ở vùng đỉnh sinh trưởn
Trang 1Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng
Limmasets và Cornuet (1949) đã phát hiện rằng
ở các cây nhiễm bệnh virus, virus phân bố
không đồng nhất trên cây và thường không thấy
chúng ở vùng đỉnh sinh trưởng
Morel và Martin (1952) chứng minh giả thuyết trên bằng cách
tạo được cây sạch bệnh virus từ
6 giống khoai tây qua nuôi cấy đỉnh sinh trưởng
Trang 2Đinh Nghĩa
Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng là sử dụng phần mô phân sinh ngọn với 3 – 4 tiền phát khởi lá, tức là các đỉnh sinh trưởng có kích thước từ 0,1 – 0,15mm tính từ chóp sinh trưởng
Kỹ thuật này khá phức tạp, phải thực hiện dưới kính lúp và khả năng sống sót của mẫu cấy
có kích thước nhỏ như thế thường không cao, do đó chỉ được tiến hành khi cần nuôi cấy với mục đích tạo các cây con invitro sạch virus
Trên thực tế người ta thường nuôi cả đỉnh chồi non với kích thước khoảng vài mm Đó có thể là đỉnh chồi ngọn hoặc đỉnh chồi nách
Trang 3Vô trùng mẫu cấy và môi
trường
Chồi tiếp tục phát triển vươn thân, ra lá, rễ
Chồi tiếp tục phát triển vươn thân, ra lá, rễ
Mẫu tạo 1 hay nhiều chồi
Môi trường thích hợp: chất dinh dưỡng và chất điều hòa
sinh trưởng
Môi trường thích hợp: chất dinh dưỡng và chất điều hòa
sinh trưởng
Xét về nguồn gốc của các cây đó có ba khả năng:
- Cây phát triển từ chồi đỉnh (chồi ngọn).
- Cây phát triển từ chồi nách phá ngủ.
- Cây phát triển từ chồi mới phát sinh
Trang 4Các phương thức phát triển cây hoàn chỉnh từ nuôi
cấy đỉnh sinh trưởng
- Phát triển cây trực tiếp
Chủ yếu ở các đối tượng hai lá mầm (dicotyledon) như khoai tây, thuốc lá, cam chanh, hoa
cúc… Ví dụ: Khoai tây (Solanum tuberosum):
Đỉnh sinh trưởng → Chồi nách → Cây
Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng
Trang 5 Phát triển cây thông qua giai đoạn protocorm
Chủ yếu gặp ở các đối tượng một lá mầm (monocotyledon) như phong lan, dứa, huệ… Cùng một lúc đỉnh sinh trưởng tạo hàng loạt protocorm (proembryo)
và các protocorm này có thể tiếp tục phân chia thành các protocorm mới hoặc phát triển thành cây hoàn chỉnh Bằng phương thức này trong một thời gian ngắn
người ta có thể thu được hàng triệu cá thể.
Đỉnh sinh trưởng → Protocorm → Cây
Trang 6Các giai đoạn hình thành PLB và cây con địa lan bằng phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng
Trang 7Ưu điểm:
Tạo các giống cây con sạch bệnh, sạch virus
Nhược điểm:
Do kích thước đỉnh sinh trưởng rất bé 0,1 – 0,15mm tính từ chóp sinh trưởng nên thao tác phải chuẩn xác, tỉ
mỉ, cẩn thận
Phải lựa chọn hợp lý loại đỉnh ST sử dụng