Thu nhận enzyme cellulase từ nấm mốc trichoderma harzianum

Thu nhận enzyme cellulase từ nấm mốc trichoderma harzianum

Chủ đề:

THU NHẬN ENZYME CELLULASE TỪ NẤM MỐC

TRICHODERMA HARZIANUM

GVHD: TS Vũ Ngọc Bội

Nhóm 5

THU NHẬN ENZYME CELLULASE TỪ NẤM MỐC

TRICHODERMA HARZIANUM

Phương pháp sản xuất enzyme từ vi sinh vật

Nguồn thu enzyme: nấm sợi Trichoderma Harzianum

Đặc điểm sinh lý, sinh hoá và sinh thái

- Khuẩn lạc Trichoderma Harzianum trên môi trường PGA có dạng bông, khi còn non có màu trắng, khi già có màu vàng xanh

do màu của bào tử, mặt trái của Petri có màu vàng nhạt đến vàng nghệ.

- Đặc tính sinh lý: sinh trưởng ở nhiệt độ tối thiểu 00C, tối ưu 20- 300C, tối đa 34- 380C

- Độc tố: không sinh độc tố

- Sinh thái: chiếm ưu thế ở vùng khí hậu nhiệt đới.

Phương pháp nuôi:

Để thu nhận enzyme cellulase, người ta thường nuôi cấy theo phương pháp bề mặt bằng môi trường xốp (môi trường bán rắn)

- Độ ẩm : 55%

- pH môi trường ban đầu cho nấm sợi 4,5 – 5,5.

- Trong quá trình nuôi, cần thường xuyên cung cấp oxy

- Xốp: không khí có thể lưu thông từ bên ngoài từ môi trường vào trong khối môi trường.

Pha khoáng cho môi trường

•NaNO3 3.5 g/l.

•K2HPO4 1,5g/l.

•MgSO4.7H2O 0,5g/l.

•KCl 0.5 g/l.

•FeSO4.7H2O 0.01g/l.

Lượng nước cần bổ sung vào để đạt độ ẩm cần thiết(độ ẩm 55%):

F=

F: lượng nước bổ sung vào môi trường để có độ ẩm cần thiết(ml)

A: khối lượng cơ chất cần bổ sung

B: độ ẩm cần đạt được

C: độ ẩm có sẵn trong cơ chất

100%: độ ẩm 100%

A(B%-C%)

100%

1 Sơ đồ quy trình thu nhận

Bã

Đồng hoá

Môi Trường

Giống

Thu canh trường

Nghiền

Thu chế phẩm enzim thô

Tủa

Tinh sạch

Nhân giống

Lọc

Li tâm Trích ly

Thu tủa

Hoà vào đệm Na acetat Sắc kí lọc gel

Hấp khử trùng 121độ C trong 20’

Khuấy trong 30’

Enzyme tinh khiết

Click to edit Master text styles

Second level

Third level

Fourth level

Fifth level

Thu nhận enzim bằng sắc kí lọc gel

Đối với các sản phẩm tủa bằng cồn lạnh và acetone, quá trình tinh sạch chỉ được thực hiện trên Biogel P-100

Đối với các sản phẩm tủa bằng muối , quá trình tinh sạch xảy ra qua hai bước: loại muối bằng gel Sephadex G- 25 và tinh sạch trên Biogel p- 100

Click to edit Master text styles

Second level

Third level

Fourth level

Fifth level

Click to edit Master text styles

Second level

Third level

Fourth level

Fifth level

• Hóa chất:

nước: 12ml/g gel khô, phạm vi phân tách 5000- 150000 Dal

nước :2,5 ml/g gel khô, thể tích nền 6 ml/g gel khô

Huyền phù hoá hạt gel

Hydrat hoá

Gạn lớp bề mặt

Khử khí của dung dịch 5-10 phút

Gạn lớp bề mặt

Nạp gel vào cột Mẫu enzim

Tiến hành chạy sắc kí

Thêm dd đêm với

V gấp 2lần

Trong 12 h ở 20oC

hoặc là 4h ở 100oC

Ổn định gel

Hạt mịn

4 lần

Dung dịch gel

• Thu và xác định mẫu tách được

Dịch ra khỏi cột được đo ở bước sóng 280nm bằng detector trong hệ sắc kí và được thể hiện độ hấp thụ dưới dạng sắc kí đồ

Tiến hành thu các phân đoạn cuối cùng và phân tích hàm lượng protein.

Enzyme sau khi đã làm sạch và xác định trọng lượng phân tử bằng kĩ thuật điện

di trên gel polyacrylamide.