ENZYME GIỚI HẠN RESTRICTION ENZYME 2... CÁC ENDO- & EXONUCLEASE Loại enzyme Cơ chất Vị trí nhận biết và cắt trên DNA, RNA... LẬP BẢN ĐỒ CẮT GIỚI HẠN RESTRICTION MAP Trình tự DNA cần ngh
Trang 1SỬ DỤNG CÁC ENZYME THÔNG DỤNG TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ
1 ENZYME GIỚI HẠN (RESTRICTION ENZYME)
2 POLYMERASE (DNA, RNA)
3 NUCLEASE (DNase, RNase)
4 LIGASE
Trang 2MỘT SỐ ENZYME GIỚI HẠN (RE)
Trang 3MỘT SỐ ENZYME GIỚI HẠN (RE)
Trang 4CÁC ENDO- & EXONUCLEASE
Loại enzyme Cơ chất Vị trí nhận biết và cắt trên DNA, RNA
Trang 5LẬP BẢN ĐỒ CẮT GIỚI HẠN (RESTRICTION MAP)
Trình tự DNA cần nghiên cứu được cắt với nhiều RE, theo các tổ hợp cắt đơn, cắt phối hợp Các sản phẩm cắt sau đó được phân tích bằng điện di và xử lý với các phần mềm vi tính để xây dựng bản đồ cắt giới hạn
Trang 6KỸ THUẬT DNASE I
FOOTPRINTING : XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ CIS TRÊN DNA
Một đọan DNA được đánh dấu phóng xạ
ở một đầu 5’ và được ủ chung với các
phân đoạn protein được xem là có tương tác với DNA này Sau đó, tổ hợp được
mang phân cắt bằng enzyme Dnase I
Nơi nào trên DNA có gắn protein, nơi đó sẽ được bảo vệ khỏi sự phân cắt này, và hình thành “dấu chân” (giếng 9-12 và O trên hình) Đó chính là trình tự CIS Kích thước của trình tự có thể được nhận biết khi so sánh với thang DNA (M trên hình)
Trang 7CÂU HỎI – PHẦN 3
1 Cách xây dựng bản đồ cắt hạn chế (restriction map)
2 Cách tiến hành phương pháp DNase Footprinting, ứng dụng của phương pháp
3 Ứng dụng của các nuclease : Nuclease S1, DNase I, RNase A, RNase H,
4 Ứng dụng của các polymerase : reverse transcriptase, DNA polymerase, SP6 RNA polymerase, Taq polymerase, DNA polymerase I, Terminal transferase
5 Ứng dụng của T4 polynucleotide kinase, của alkaline phosphatase