The Greatest Gene Editing Technology on the Planet- 123docz.net

Cas-CLOVER significantly reduces off-target risk with a paired gRNA, deactivated Cas fusion (dCas), and dimeric Clo051 nuclease.

A proven for cell line development (CLD) and bioprocessing, , and synthetic biotechnology, Cas-CLOVER also features in target and organisms coupled with simple and flexible design and technology licensing (Figure 1).

Cas-CLOVER giảm đáng kể rủi ro ngoài mục tiêu với gRNA được ghép nối, phản ứng tổng hợp Cas (dCas) đã hủy kích hoạt và nuclease Clo051 dimeric. Là một công nghệ đã được chứng minh về phát triển dòng tế bào (CLD), x lý sinh học và công nghệ sinh học tổng hợp, Cas-CLOVER cũng có tính năng trong mục tiêu và sinh vật cùng với thiết kế đơn giản và linh hoạt cũng như cấp phép công nghệ (Hình 1).

Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn

―One common question is, ‗Without Cas9, how do we design the guides?‘‖ says David Norman, senior scientist at Demeetra. ―Some have struggled with other alternatives to Cas9 where less is known about guide design. Cas-CLOVER seamlessly works with your favorite design platforms and gRNA manufacturers.‖

Cas-CLOVER‘s flexible spacer between the two gRNAs required for Clo051dimerization enables target accessibility. ―In cells, yeast and plants, high activity between 12 and 32 base spacers is common. I‘ve never seen a sequence we couldn‘t target. Our guidance is to start with spacers of 15–30 bases,‖ Norman says. (See Figure 2 and Figure 3).

David Norman, nhà khoa học cấp cao tại Demeetra cho biết: ―Một câu hỏi phổ biến là: 'Không có Cas9, làm cách nào để thiết kế các hướng dẫn?'‖. ―Một số người đã phải vật lộn với các lựa chọn thay thế khác cho Cas9 khi ít người biết đến thiết kế hướng dẫn hơn. Cas- CLOVER hoạt động trơn tru với các nền tảng thiết kế và nhà sản xuất gRNA yêu thích của bạn.‖

Bộ đệm linh hoạt của Cas-CLOVER giữa hai gRNA cần thiết cho quá trình thu nhỏ Clo051 cho phép truy cập mục tiêu. ―Trong các tế bào, nấm men và thực vật, hoạt động cao giữa 12 và 32 miếng đệm cơ sở là phổ biến. Tôi chưa bao giờ thấy một trình tự mà chúng tôi không thể nhắm mục tiêu. Hướng dẫn của chúng tôi là bắt đầu với các miếng đệm có 15–30 cơ sở,‖ Norman nói. (Xem Hình 2 và 3).

―The end result is beneficially distinct from CRISPR-Cas9, because it‘s a completely different nuclease. While Cas9 typically results in smaller blunt-end deletions, Clo051 yields larger deletions with four- base overhangs,‖ Norman continues. Large deletions are easier to identify, cutting down workflow processes. Researchers have also observed higher knock-in efficiency with Cas-CLOVER using homology-directed repair (HDR) and non-homologous end joining (NHEJ).

―Kết quả cuối cùng rất khác biệt so với CRISPR-Cas9, bởi vì nó là một nuclease hoàn toàn khác. Trong khi Cas9 thường tạo ra các phần xóa ở đầu cùn nhỏ hơn, thì Clo051 mang lại các phần xóa lớn hơn với phần nhô ra bốn đáy,‖ Norman tiếp tục. Việc xóa lớn dễ xác đ nh hơn, cắt giảm quy trình công việc. Các nhà nghiên cứu cũng đã quan sát thấy hiệu quả gõ c a cao hơn với Cas-CLOVER bằng cách s dụng s a chữa theo hướng tương đồng (HDR) và nối đầu không tương đồng (NHEJ).

Maintaining the ROI for geneediting technology

Gene editing can improve biotherapeutics; the manufacturing of viral vectors;cultured meats and proteins; and even agriculture. However, economic barriers and FTO confusion have slowed commercial use.

―We want Cas-CLOVER applied for maximum ROI for our partners,‖ says Jack Crawford, CEO at Demeetra. ―For established companies with large pipelines, an ideal license structure is much different than for CDMOs working on a cash-flow basis or start-ups looking to get to the next value inflection.‖ Demeetra has established a flexible license framework for all situations. ―If Cas-CLOVER can help, we want to do the deal now and on mutually beneficial terms for licensees and, ultimately, society,‖ Crawford adds.

A beneficial agricultural revolution

Cas-CLOVER in plants is a growing success in both dicots and monocots. One such project is with Leena Tripathi at the International Institute of Tropical Agriculture (IITA), Kenya.

Tripathi group and Demeetra collaborated to test Cas-CLOVER in banana plants. Delivering the Cas-CLOVER reagents to banana cell suspension and targeting the PDS gene resulted in the PDS knockout.

This revealed the expected

albino phenotype, and sequencing later confirmed large deletions associated with Cas-CLOVER (Figure 4).

Duy trì ROI cho công nghệ chỉnh sửa gen

Chỉnh s a gen có thể cải thiện liệu pháp sinh học; sản xuất vec tơ virus; th t và protein nuôi cấy; và cả nông nghiệp. Tuy nhiên, các rào cản kinh tế và sự nhầm lẫn của FTO đã làm chậm việc s dụng thương mại. Jack Crawford, Giám đốc điều hành của Demeetra cho biết: ―Chúng tôi muốn áp dụng Cas-CLOVER để đạt được ROI tối đa cho các đối tác của mình. ―Đối với các công ty đã thành lập với quy mô lớn, cấu trúc giấy phép lý tưởng khác nhiều so với các CDMO hoạt động trên cơ sở dòng tiền hoặc các công ty mới thành lập đang tìm cách đạt được bước ngoặt giá tr tiếp theo.‖ Demeetra đã thiết lập một khung giấy phép linh hoạt cho mọi tình huống. ―Nếu Cas- CLOVER có thể giúp đỡ, chúng tôi muốn thực hiện thỏa thuận ngay bây giờ và theo các điều khoản đôi bên cùng có lợi cho những người được cấp phép và cuối cùng là xã hội,‖ Crawford cho biết thêm.

Một cuộc cách mạng nông nghiệp có lợi

Cas-CLOVER trong thực vật là một thành công ngày càng tăng ở cả hai lá mầm và một lá mầm. Một dự án như vậy là với Leena Tripathi tại Viện Nông nghiệp Nhiệt đới Quốc tế (IITA), Kenya. Nhóm Tripathi và Demeetra đã hợp tác th nghiệm Cas-CLOVER trên cây chuối. Việc cung cấp thuốc th Cas-CLOVER vào huyền phù tế bào chuối và nhắm mục tiêu gen PDS đã dẫn đến việc loại bỏ PDS. Điều này tiết lộ dự kiến

kiểu hình bạch tạng và giải trình tự sau đó đã xác nhận việc xóa lớn liên quan đến Cas-CLOVER (Hình 4).

―We are very excited to improve the banana varieties preferred by farmers in Africa for disease-resistant bananas using Cas-CLOVER‖, Tripathi says. ―The gene edited banana with no foreign gene integration will not be regulated as a GMO in Kenya. The disease- resistant varieties will enhance banana production and increase the incomes of smallholder farmers in East Africa, where the banana is one of the major staple foods.‖

Engineering for disease resistance and delayed browning are next on the list. Traits for varieties that are sold locally in Africa will not be royalty bearing, while varieties that are exported such as Cavendish will be licensed by Demeetra. ―We have set up a robust process with Leena‘s group and are open to partnering with banana export companies, while providing unhindered value to African food security.‖ Crawford says.

Unlike most traditional agricultural companies, Demeetra does not plan on providing seed or managing acreage. Instead, Cas-CLOVER is licensed for research that can convert to flexible commercial access. ―Clients can edit their target crop in-house or can use any CRO, including Demeetra, or academic group to create the edits they desire,‖ Crawford says. ―Since we do not ourselves have an interest in any crop, other than for manufacturing cannabinoid drug candidates, we can be very creative with our license structure—and the client owns all the IP created with the technology.‖

Tripathi cho biết: ―Chúng tôi rất vui mừng được cải tiến các giống chuối được nông dân ở Châu Phi ưa chuộng để có giống chuối kháng bệnh bằng cách s dụng Cas-CLOVER‖. ―Chuối chỉnh s a gen không tích hợp gen ngoại lai sẽ không được quy đ nh là GMO ở Kenya. Các giống kháng bệnh sẽ nâng cao sản lượng chuối và tăng thu nhập cho nông dân sản xuất nhỏ ở Đông Phi, nơi chuối là một trong những thực phẩm chủ yếu.‖

Tiếp theo trong danh sách là kỹ thuật kháng bệnh và làm chậm quá trình hóa nâu. Các tính trạng của các giống được bán tại đ a phương ở Châu Phi sẽ không mang tính bản quyền, trong khi các giống được xuất khẩu như Cavendish sẽ được cấp phép bởi Demeetra. ―Chúng tôi đã thiết lập một quy trình mạnh mẽ với nhóm của Leena và sẵn sàng hợp tác với các công ty xuất khẩu chuối, đồng thời mang lại giá tr không b cản trở cho an ninh lương thực châu Phi.‖ Crawford nói.

Không giống như hầu hết các công ty nông nghiệp truyền thống, Demeetra không có kế hoạch cung cấp hạt giống hoặc quản lý diện tích. Thay vào đó, Cas-CLOVER được cấp phép cho nghiên cứu có thể chuyển đổi sang truy cập thương mại linh hoạt. ―Khách hàng có thể chỉnh s a cây trồng mục tiêu của họ trong nhà hoặc có thể s dụng bất kỳ CRO nào, kể cả Demeetra hoặc nhóm học thuật để tạo các chỉnh s a mà họ mong muốn,‖ Crawford nói. ―Vì bản thân chúng tôi không quan tâm đến bất kỳ loại cây trồng nào, ngoài việc sản xuất các ứng c viên thuốc cannabinoid, nên chúng tôi có thể rất sáng tạo với cấu trúc giấy phép của mình — và khách hàng sở hữu tất cả IP được tạo bằng công nghệ.‖

Can it get any better?

―Imagine nearly 100% targeted editing with under 1% off-target risk.

That is precisely what we are aiming for with our new Clo051 variants,‖ says Corey Brizzee, strain engineering scientist at Demeetra. Through robust yeast gene editing and protein engineering capabilities, Demeetra has discovered hyperactive Clo051 mutants that reach 99% targeted editing as well as 10 times less cellular toxicity compared to Cas9 in yeast (Figure 1).

New hyperactive variants which Demeetra refers to as ―CLOVERx‖

are expected to apply to all projects but will be especially important for organisms that require more resources such as plants and agricultural animals. ―Our licenses have always included future technology improvements; this is another benefit of partnering with Demeetra,‖ Crawford concludes. These improvements to the platform aresimilar to pdates to operating software—improving performance on a complimentary basis.

Nó có thể trở nên tốt hơn không?

―Hãy tưởng tượng việc chỉnh s a gần như được nhắm mục tiêu 100%

với rủi ro ngoài mục tiêu dưới 1%. Corey Brizzee, nhà khoa học kỹ thuật biến dạng tại Demeetra cho biết, đó chính xác là những gì chúng tôi đang hướng tới với các biến thể Clo051 mới của mình.

Thông qua khả năng chỉnh s a gen và kỹ thuật protein mạnh mẽ của nấm men, Demeetra đã phát hiện ra các đột biến Clo051 siêu hoạt động đạt được khả năng chỉnh s a mục tiêu 99% cũng như độc tính tế bào ít hơn 10 lần so với Cas9 trong nấm men (Hình 1).

Các biến thể hiếu động mới mà Demeetra gọi là ―CLOVERx‖ dự kiến sẽ áp dụng cho tất cả các dự án nhưng sẽ đặc biệt quan trọng đối với các sinh vật cần nhiều tài nguyên hơn như thực vật và động vật nông nghiệp. ―Giấy phép của chúng tôi luôn bao gồm các cải tiến công nghệ trong tương lai; đây là một lợi ích khác của việc hợp tác với Demeetra,‖ Crawford kết luận. Những cải tiến này đối với nền tảng tương tự như pdates đối với phần mềm điều hành—cải thiện hiệu suất trên cơ sở miễn phí.

The Greatest Gene Editing Technology on the Planet?

Application of animal cell culture review

Understanding How COVID-19 Vaccines Work