Bai viet tham khao

Các hạt nano có thể được tổng hợp bằng cách sử dụng các phương pháp khác nhau bao gồm phương pháp hóa học, vật lý và sinh học.. Các hạt nano bạc được tổng hợp bằng phương pháp hóa học độ

1 Giới thiệu

Các vi khuẩn gây bệnh khác nhau và kháng khuẩn kháng sinh đã trở thành một thách thức lớn trong thời hiện tại Hiện nay, các nhà nghiên cứu đang tìm kiếm các chất kháng khuẩn mới Trong kịch bản hiện nay, vật liệu nano đã nổilên như là các chất chống vi khuẩn mới do tỷ lệ bề mặt cao đến khối lượng vàphức tạp hóa học độc nhất Công nghệ nano là một lĩnh vực phát triển nhanh chóng với mục đích sản xuất vật liệu mới ở cấp độ nano Khu vực này dự kiến sẽ mở ra một nền tảng mới để chống lại bệnh tật bằng cách sử dụng cácvật liệu nano Trong số các vật liệu nano có tiềm năng kháng khuẩn cao nhất, các hạt nano kim loại trở thành công cụ thú vị nhất ( Morones et al., 2005, Albrecht và cộng sự, 2006 )

Các hạt nano bạc đã trở thành tâm điểm của các nghiên cứu sâu rộng do hiệu quả kháng khuẩn tốt của nó chống lại vi khuẩn, vi rút và các vi sinh vật nhân chuẩn khác ( Gong et al., 2007 ) Các nghiên cứu trước đây cho thấy Ag

NP có khả năng thực hiện kháng khuẩn hữu hiệu đối với Staphylococcus aureus , Escherichia coli , Vibrio cholera , Pseudomonas

aeruginosa và Salmonella typhi ( Morones et al., 2005; Moyer và cộng sự,

1965, Li et al., 2010) Trong điều trị y tế, bạc nitrat được kết hợp với

sulfonamide để tạo thành kem bạc sulfadiazine, được sử dụng như là một tácnhân kháng khuẩn phổ rộng và được sử dụng để điều trị bỏng Nó cũng có

hiệu quả cao đối với các vi khuẩn như E coli , S aureus , Klebsiella sp

Và Pseudomonas sp và cho thấy hoạt động chống nấm và thuốc kháng virut

đáng kể ( Fox và Modak, 1974 ) Các ứng dụng này phụ thuộc mạnh mẽ vào các đặc tính lý hoá của các phân NPN được sản xuất như kích thước hạt và hình dạng, sự phân bố kích cỡ và tính tích điện bề mặt ( Soukupov và cộng

sự, 2008) Các hạt nano có thể được tổng hợp bằng cách sử dụng các

phương pháp khác nhau bao gồm phương pháp hóa học, vật lý và sinh

học Các hạt nano bạc được tổng hợp bằng phương pháp hóa học độc hại cho các tế bào bình thường khác nhau và dẫn đến các sản phẩm phụ không thân thiện với môi trường có thể làm phiền các tế bào bình thường Các nồng

độ Ag NP được phát hiện thấy có tác dụng độc cấp mạnh đến các tế bào nuôikhác nhau Chỉ có tiếp xúc với Ag NPs, có độc tính tế bào ở liều cao hơn và gây ra hình thái tế bào bất thường, hiển thị co lại tế bào và thu nhận một hình dạng bất thường ( Kawata và cộng sự, 2009) Vì vậy, nhu cầu ngày càng tăng

về các giao thức thân thiện với môi trường, không độc đối với việc tổng hợp các hạt nano dẫn đến sự quan tâm phát triển trong các phương pháp tiếp cậnsinh học không có sử dụng các hóa chất độc hại như các sản phẩm phụ Các khía cạnh sinh học khác nhau đối với việc chế tạo các hạt nano đã được báo cáo đến nay bao gồm các vi khuẩn ( Dickson, 1999, Pum và Sleytr, 1999, Joerger và cộng sự, 2001, Nair và Pradeep, 2002 ), nấm ( Mukherjee et al.,

2001; Ahmad et al., 2003 ; Durán et al, 2005 ) và thực vật ( Singhal et al, 2011; Huang et al, 2007; Leela và Vivekanandan, 2008; Singh et al

2015.) Do nhu cầu ngày càng tăng về hạt nanô sinh thái thân thiện, các phương pháp xanh được sử dụng để tổng hợp các hạt nano kim loại khác nhau Nhưng gần đây, quá trình chế tạo các hạt nano chiết xuất thực vật đã chứng minh là một cách thuận lợi so với các phương pháp khác Sự tổng hợphạt trung gian của các chất chiết xuất từ thực vật đang trở nên quan trọng bởi

sự đơn giản và tính thân thiện với sinh thái ( Awwad and Salem, 2012 ) Các

cơ chế của NPK ức chế sự phát triển của vi khuẩn vẫn còn chưa rõ ràng Đã

có báo cáo rằng kích thước và hình dạng của NP có thể ảnh hưởng đến hoạt động kháng khuẩn của chúng ( Zhou et al., 2012) Các nghiên cứu đề xuất bốn cơ chế được giả thiết cho hoạt động kháng khuẩn và trước hết là sự tích lũy và giải phóng các hạt nano trong màng vi khuẩn thay đổi độ thẩm thấu của

nó, sau đó giải phóng các phân tử sinh học trong tế bào khác nhau và sự giải phóng lực đẩy proton qua màng tế bào ( Amro et al , 2000 ) Thứ hai là tạo racác loại oxy phản ứng (ROSs) trong tế bào bởi NP, với sự hủy hoại oxy hóa sau đó đối với các cấu trúc tế bào ( Applerot et al., 2012) Thứ ba là sự hấp thu của các hạt nano và / hoặc các ion kim loại vào các tế bào, tiếp theo là sựsuy giảm sản xuất ATP trong tế bào, phá vỡ sự sao chép DNA và tổn thương DNA, và thứ tư là các hạt nano và các ion hoạt động của nó liên kết với các enzym khác nhau và khử hoạt tính của chúng, hô hấp ( Morones et al, 2005 Raffi và cộng sự, 2008, Rai và cộng sự, 2009) Các hạt nano dính vào màng

tế bào và cũng xâm nhập vào bên trong vi khuẩn và tạo ra các dạng oxy phảnứng (ROS) Màng tế bào chứa các protein có chứa lưu huỳnh và các hạt nano bạc tương tác với các protein này trong tế bào cũng như các hợp chất chứa phốt pho như DNA Ag NPs gây bất ổn tiềm năng màng tế bào máu và

sự suy giảm các mức độ ATP trong tế bào bằng cách nhắm mục tiêu màng tế bào gây ra chết tế bào vi khuẩn ( Raffi et al., 2008, Rai và cộng sự, 2009 ) Vì vậy, các nghiên cứu gần đây cho thấy tạo ra các loại oxy hoạt tính, các

enzyme tế bào gây hại (chuỗi hô hấp tế bào), phá vỡ màng tế bào, và sự phá hủy DNA cuối cùng dẫn đến sự phân li và chết của tế bào

Hoạt tính kháng khuẩn của các vi khuẩn kháng thuốc chống vi khuẩn chống vikhuẩn đã được thiết lập nhưng cần phải nghiên cứu thêm để xác định liệu cáchạt này có thể là một lựa chọn để điều trị và phòng ngừa các bệnh nhiễm vi khuẩn kháng thuốc

Trong bài báo này, chúng tôi đã thiết kế nghiên cứu tổng hợp nhanh chóng các nguồn gốc nông nghiệp mới với phương pháp đơn giản, không độc, hiệu quả về mặt kinh tế và thân thiện với môi trường khi sử dụng chiết xuất

lá Ocimum gratissimum sử dụng tính chất giảm của chiết xuất

lá O.gratissimum , hiệu quả chống lại các vi khuẩn gram dương và gram âm

khác nhau ngay cả ở liều thấp

2 Vật liệu và phương pháp

2.1 Phương tiện truyền thông và hóa chất

Tất cả các phương tiện vi sinh vật và hóa chất thu được từ HiMedia

Laboratories, Ấn Độ, Merck Ltd., SRL Pvt., Ltd., Mumbai Nước Ultrapure Milli

Q được sử dụng trong suốt nghiên cứu

2.2 Các chủng vi khuẩn được sử dụng trong nghiên cứu này

Các vi khuẩn E coli ( MC - 2 ) và S aureus ( MMC - 20 ) đã bị phân lập trước

đây trong phòng thí nghiệm của chúng tôi ( Dash et al., 2012, Chakraborty và cộng sự, 2011 ) Các chủng được nuôi cấy và được sử dụng trong suốt

nghiên cứu Các chủng này cũng kháng với một số kháng sinh truyền thống

2.3 Chuẩn bị chiết xuất lá

Lá của O gratissimum được thu thập từ khu vực trường đại học Vidyasagar, Tây Bengal, Ấn Độ 20 g lá tươi của O.gratissimum đã được thu thập và rửa

sạch nhẹ nhàng với nước cất đôi để loại bỏ các hạt bụi Các lá được cắt nhỏ

và tiếp xúc với ánh nắng mặt trời cho đến khi chúng hoàn toàn khô Các vật liệu này đã được hòa tan trong nước cất (10 g bụi / 100 ml nước cất kép) và lọc bằng giấy lọc Whatman số 1 Bộ lọc được thu thập, sấy khô và bảo quản

ở nhiệt độ 4 o C cho đến khi sử dụng

2.4 Tổng hợp và thanh lọc các VQG Ag

Tổng hợp Ag NP sử dụng bột khô của O gratissimum chiết xuất lá đã được

thực hiện theo phương pháp của Sintubin et al., (2011) với một số sửa

đổi Hạt nano bạc (Ag NPS) đã được tổng hợp bằng cách hòa tan 10 -3 M muối nitrat bạc (Agno 3 ) trong 100 ml nước cất và giải pháp này được đặt trong một chiếc tàu phản ứng 250 ml Có tổng cộng 100 mg chất chiết từ lá cây đông khô đã được thêm vào Agno 3 giải pháp ở nhiệt độ phòng cho quá trình sinh học giảm Sau khi thêm chiết xuất lá, giá trị pH của dung dịch ngay lập tức được điều chỉnh đến 10,0 pH bằng dung dịch NaOH 7,7 M Các phản ứng tàu sau đó đã được rung với tốc độ quay 150 vòng / phút trong điều kiện bóng tối ở 30 ° C trong 48 giờ Dung dịch chứa Ag NPs sau đó được thu thập và ly tâm ở tốc độ 3000 vòng / phút trong 10 phút để loại bỏ các thành phần chiết xuất thừa

2.5 Đặc điểm của VQG Nông nghiệp

2.5.1 Quang phổ UV-vis

Để quan sát tài sản quang học của các hạt nhân Ag, các mẫu được phân tích cho các nghiên cứu quang phổ UV-vis (Shimadzu UV / vis 1800

spectrophotometer) ở nhiệt độ phòng hoạt động ở độ phân giải 1 nm giữa khoảng 190 và 1100 nm ( Dash et al., 2014 )

2.5.2 Quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier

Các NPN của Ag đã được điều tra bằng quang phổ IR biến đổi Fourier với một hệ thống IR IR biến đổi Fourier của PerkinElmer Spectrum RX I với tần số

từ 500 đến 4000 cm -1 và độ phân giải 4 cm -1 Phương pháp viên KBr đã được sử dụng để chuẩn bị mẫu ( Chattopadhyay et al., 2013a )

2.5.3 Tán xạ ánh sáng động (DLS) và tiềm năng zeta

Phân tích DLS được thực hiện bằng Zetasizer Nano ZS (Malvern

Instruments) theo phương pháp chuẩn với một số sửa đổi ( Chattopadhyay vàcộng sự, 2013a ) Nồng độ các NPN của nông nghiệp là 100 μg / mL

sonicated trong 2 phút, và kích thước hạt động được đo bằng cách ngưng hai giọt dung dịch nước NPs trong 10 mL nước Millipore Khi các NP đã phântán hoàn toàn trong nước, chúng được phân tích bằng máy phân tích

DLS Các thí nghiệm được lặp lại nhiều lần để có được kích thước trung bình của NP

Tiềm năng zeta của các NPN Nông nghiệp đã được đo bằng cách sử dụng Zetasizer-Nano ZS (Malvern, Malvern Hills, Anh) 1 mg / ml Dung môi Ag NP được chuẩn bị trong nước Milli-Q Sau đó, tạm ngưng này đã được sử dụng cho thử nghiệm ( Dash và cộng sự, 2014 )

2.5.4 Quét kính hiển vi điện tử

Kích thước hạt và cấu trúc vi mô được nghiên cứu bằng kính hiển vi điện tử quét độ phân giải cao (SEM, dụng cụ của Nikon, Nhật Bản) ( Chattopadhyay

et al., 2013a ) Nói tóm lại, các NPN của nông nghiệp bị ngâm trong nước khửion ở nồng độ 1 mg / ml và sau đó sonic sử dụng bồn sonicator cho đến khi mẫu tạo thành một hệ thống treo đồng nhất Đối với phép đo kích thước, dungdịch phân giải nước tiểu của các NPN Ag (1 mg / mL) đã được pha loãng 20 lần Sau đó, một giọt dung dịch nước đã được sonicated được lấy trên một tấm kính và làm khô nó Sau đó, mẫu được tráng vàng và hình ảnh đã được chụp SEM được sử dụng để mô tả đặc điểm kích cỡ và hình dạng của các NPN Nông nghiệp

2.5.5 Siêu âm điện tử truyền

Kích thước hạt và cấu trúc vi mô được nghiên cứu bằng kính hiển vi điện tử truyền qua độ phân giải cao trong JEOL 3010, Nhật Bản, hoạt động ở 200 kVtheo phương pháp Chattopadhyay và cộng sự, (2012) với một số sửa đổi Nói

tóm lại, các NPN của Ag đã bị đình chỉ trong nước khử ion với nồng độ

1 mg / mL sau đó mẫu được sonicated bằng cách sử dụng bồn sonicator chođến khi mẫu tạo thành một hệ thống treo đồng nhất Đối với phép đo kích thước, dung dịch mẫu sonicated của tất cả các NPN của Ag (0.5 mg / mL) đãđược pha loãng 20 lần TEM được sử dụng để mô tả đặc điểm kích thước và hình dạng của các VQG Ag Một giọt dung dịch Ag NPs trong nước được đặt lên lưới đồng phủ bằng cacbon và điều này đã được làm khô trong không khí

để có được hình ảnh TEM

2.5.6 Nghiên cứu nhiễu xạ tia X

Sự phân tán trạng thái rắn của các NPN nông nghiệp được đánh giá bằng nhiễu xạ tia X Các mẫu nhiễu xạ thu được bằng cách sử dụng một thiết bị chiết xuất XPERT-PRO (PANalytical Ltd., Hà Lan) với bán kính 240 mm Các bức xạ Cu Kα (Kα 1.54060 Å) được lọc Ni Một hệ thống phân chia và nhận các khe tương ứng là 1 ° và 0,1 mm, đã được sử dụng Các mẫu được thu

thập với 40 kV của điện áp ống và 30 mA ống hiện và quét qua 2 θ loạt các

10-90 °

2.5.7 Nghiên cứu EDX

Kỹ thuật này xác định thành phần nguyên tố của một mẫu Trong nghiên cứu này, nó đã được sử dụng để xác nhận sự hiện diện của bạc trong các hạt cũng như để phát hiện các thành phần nguyên tố khác của các hạt Bên cạnh việc xác định các yếu tố có trong mẫu bằng cách sử dụng EDX cũng có thể ước lượng nồng độ của chúng Dung dịch hạt đã được pha loãng 100 lần trong nước và một giọt dung dịch pha loãng 10 μl được đặt trên đầu còn carbon và không khí khô Phổ EDX thu được ở điện áp tăng tốc 20 kV và thu thập được trong 19 S Việc lập bản đồ đã được hoàn thành bằng cách sử dụng các màu giả để đại diện cho sự phân bố không gian hai chiều lượng phát thải năng lượng của các nguyên tố hóa học có trong mẫu Phân tích đã được thực hiện bằng cách sử dụng JEOL JSM 6360 được trang bị máy phân tích X-quang phân tán EDX ( Majumdar và cộng sự, 2013 )

2.6 Phép thử kết hợp protein huyết tương

Xét nghiệm gắn kết protein huyết tương được thực hiện bằng cách sử dụng huyết tương người theo Chattopadhyay và cộng sự, (2013b) Mẫu huyết tương của con người được thu thập từ 10 người khoẻ mạnh theo sự chấp thuận của cơ quan sinh học Hai miligam mỗi mililít nanosilver được trộn với

5 mL 50 mM PBS và 0.5 mL huyết tương người (8 mg / mL) đã được thêm vào với nhau và khuấy mạnh trong lồng ấp lắc trong 24 giờ ở 37 ° C Các hạt nano được ly tâm ở tốc độ 10000 vòng / phút trong 10 phút và đã được

sử dụng trên bề mặt để xác định nồng độ protein bằng cách làm theo phươngpháp Lowry và cộng sự, (1951) Plasma không có NPs được sử dụng như là

một kiểm soát để đảm bảo rằng không có lượng mưa protein (Lowry và cộng

24 h ủ bệnh, giá trị MIC thu được bằng cách kiểm tra độ đục của sự phát triểncủa vi khuẩn Giá trị MIC tương ứng với nồng độ ức chế 99% sự phát triển của vi khuẩn ( Dash et al., 2012 )

Giá trị nồng độ diệt khuẩn (MBC) tối thiểu của các hạt được xác định theo phương pháp chuẩn ( Dash et al., 2012 ) Các giá trị của MBC được xác định bằng cách nhân các pha loãng MIC vào đĩa thạch Muller Hinton vô trùng ủ ở 37oC trong 24 giờ Nồng độ thấp nhất của các hạt nano đã giết chết hoàn toàn các vi khuẩn đã được kiểm tra đã được ghi nhận và lập bảng theo mức MBC Giá trị của MBC tương ứng với nồng độ 100% sự phát triển của vi khuẩn đã bị bắt, so với kiểm soát dương (không điều trị) Tất cả các xét

nghiệm được thực hiện trong tủ an toàn sinh học

2.7.2 Mức độ cho phép

Mức độ khoan dung của mỗi chủng vi khuẩn đối với NPN của nông nghiệp được xác định theo phương pháp May và cộng sự, (2006) sử dụng công thứcsau:

Lòng khoan dung=MBC/MIC.

2.7.3 Phun đĩa thạch (DAD)

Tính nhạy cảm của các vi khuẩn kháng đa kháng khác nhau đối với các tế bào AG Ag tổng hợp được xác định bằng kỹ thuật khuếch tán thạch đĩa (DAD)theo Bauer và cộng sự, (1966) Các vi khuẩn thử nghiệm lấy từ một nền văn hóa qua đêm (tiêm từ một thuộc địa duy nhất) được tươi được trồng trong

4 h có 10 6 CFU / mL chuẩn chống lại tiêu chuẩn McFarland của Với nền văn hoá này, một bãi cỏ vi khuẩn đã được chuẩn bị trên thạch Mueller-

Hinton Lọc các đĩa giấy có kích thước 6-mm được sử dụng để quan sát các

mô hình nhạy cảm với thuốc chống vi khuẩn đối với các vi khuẩn Ag thu được

tổng hợp Các hạt nano bạc và đĩa giấy lọc AgNO 3 được chuẩn bị bằng cách hấp thụ 10 μL 2 mg / ml Ag NP và AgNO 3giải pháp tương ứng Đường kính của khu vực ức chế tăng trưởng vi khuẩn xung quanh đĩa (kể cả đĩa) đã được

đo ( Dash et al., 2012, Bauer và cộng sự, 1966 )

2.7.4 Giết chết động học

Xét nghiệm động học diệt chủng E coli và S aureus đã được nghiên cứu

chống lại các nguồn nước nông nghiệp theo phương pháp Guggenbichler và cộng sự, (1985) Sự phát triển của vi khuẩn sau khi điều trị (theo giá trị MBC tương ứng) được đo bằng cách xác định số lượng tế bào tồn tại ở thời điểm

0, 2, 4, 8, 12, 18 và 24 giờ sau khi ấp trứng với các nồng độ Ag NP Tỷ lệ ức chế tăng trưởng đã đạt được đối với kiểm soát dương Khả năng tồn tại của

tế bào vi khuẩn được đo bằng phương pháp quang phổ bằng phương pháp quang phổ Shimadzu UV / vis 1800

2.7.5 Ức chế sự hình thành màng sinh học

Yếu tố nguy cơ về hình thành màng sinh học được đo theo phương pháp của Stepanovic et al với một số sửa đổi ( Stepanovic et al, 2004 ) 20 μL

(2,5 x 10 5 CFU / mL) của mỗi chủng vi khuẩn được bổ sung riêng lẻ vào

2 mL nước dung môi (NB) Các nồng độ khác nhau của các hạt thử tinh thể thuần chủng (bằng sonication) được thêm vào các ống nghiệm có chứa các mẫu thử nghiệm Các tế bào vi khuẩn đã xử lý NPP của Ag NP được nuôi cấyqua đêm trong môi trường LB và sau đó được chuẩn hóa với mật độ giống nhau dựa trên OD 600 và 5 μL được tiêm vào 500 μL nước dùng LB trong

10 mL ống thủy tinh borosilicate Các ống này được ủ ở trạng thái tĩnh

tại 30oC trong 22 h Các ống được rửa bằng nước cất, được ủ với 600 μl 0,1% tinh thể tím trong 30 phút, và rửa lại bằng nước cất Sau đó

thêm 1.0 mL dimethyl sulphoxide, ống được vortex và để trong 10 phút, và mật độ quang học được đo trong quang phổ kế UV Shimadzu UV / vis ở bướcsóng 570 nm

2.7.6 Nghiên cứu khả năng sinh sôi của tế bào vi khuẩn

Khả năng sống sót của tế bào vi khuẩn được thực hiện sau 12 giờ điều trị vớiNPN bằng phương pháp bromide 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-

diphenyltetrazolium (MTT) theo phương pháp chuẩn ( Mosmann, 1983 ) Các

vi khuẩn được điều trị bằng thuốc được ly tâm ở 1000 g trong 10 phút ở 4 °

C, sau đó rửa nhiều lần hai lần với PBS vô trùng (pH 7,4) Sau đó, môi trườngđược thay thế bằng RPMI tươi (không có phenol đỏ và FBS) chứa 0,5 mg /

mL MTT Sau khi thêm 3 giờ ủ ở 37 ° C, thêm dung dịch HCl-isopropanol và sau 15 phút ủ ở nhiệt độ phòng, độ hấp thụ của sản phẩm formazan đã đượchòa tan được đo bằng máy quang phổ Shimadzu UV / vis 1800 ở bước sóng

570 nm

2.7.7 Số lượng tế bào sống của máy dò sét kích hoạt huỳnh quang

Rh123 là vết bẩn mà làm mờ các ty thể của tế bào sống, ở đây chúng tôi sử dụng nó như một vết bẩn tồn tại ( Mason và cộng sự, 1993b ) Các vi khuẩn

có tiềm năng màng ngăn cấm thuốc nhuộm xâm nhập, nhưng các vi khuẩn không thể sống được với các màng khử cực cho phép chúng xâm nhập vào

tế bào Các tế bào vi khuẩn đã nuôi cấy được ly tâm ở tốc độ 1800 vòng / phút trong 10 phút ở 4 ° C, rửa hai lần với dung dịch muối phosphate (pH 7,4), thay thế bằng dung dịch đệm tương tự và các hạt nano bạc được gắn nhãn Rh123 theo nồng độ yêu cầu (nồng độ MIC tương ứng) và đặt ở 37 ° C trong 12 giờ trong điều kiện tối Các tế bào không có Rh123 được dùng làm kiểm soát âm Sau khi ủ, tế bào được rửa hai lần trong PBS, và phân tích bằng phép đo dòng chảy (Model: FACS calibur flow cytometer, Becton

Dickinson)

2.7.8 Nghiên cứu hấp thu nội bào

RhB là thuốc nhuộm cation nhạy cảm với điện áp, nó được nạp vào các vi khuẩn có nguồn năng lượng nhờ vào tiềm năng điện hóa xuyên màng (bên trong âm) của màng tế bào Các NPG của nông nghiệp được dán nhãn với Rhodamine B theo Mason et al (1993) Đối với việc ghi nhãn này, thuốc nhuộm Rh-B ( 20mg / mL trong nước vô trùng) đã được thêm vào Ag NP để cho nồng độ của vết bẩn 0.2 mg / mL và giữ ở 37oC trong bóng tối trong

1 giờ Các vi khuẩn vi khuẩn tươi được ly tâm ở 1000 g ở 4 ° C trong

10 phút, rửa sạch hai lần với PBS (pH 7,4), thay thế bằng cùng một đệm và cho các nồng độ Ag bắt buộc là Rh-B theo nồng độ yêu cầu và đặt ở 37 ° C trong bóng tối 12 h Các tế bào không có Rh-B là kiểm soát âm Sau 12 giờ

ủ, các tế bào được rửa sạch và treo lại trong PBS, và một giọt huyền phù đã được kiểm tra với một pha nghiên cứu của Olympus tương phản với kính hiển

vi huỳnh quang (Model: CX41; Olympus Singapore Pvt., Ltd., Valley Point Office Tower, Singapore) Hình ảnh huỳnh quang đã được thu được

với laser 540 nm cho kính hiển vi tương phản chênh lệch tạp

và laser 625 nm cho kích thích và phát xạ Rh-B

2.7.9 Thế hệ ROS nội bào

Sản xuất ROS nội bào được đo bằng cách sử dụng diacetate

2,7-dichlorofluorescein (DCFH 2 -DA) ( Dash et al., 2014 ) Quá trình oxy hóa của DCF huỳnh quang không huỳnh quang với huỳnh quang 20,70-

dichlorofluorescein (DCF) mang lại một bài kiểm định định lượng về sự hình thành ROS DCFH 2 -DA thụ động nhập vào tế bào và phản ứng với ROS để tạo thành hợp chất huỳnh quang cao 2,7-dichlorofluorescein Tóm lại, 10 mM DCFH 2 giải pháp -DA chứng khoán (trong methanol) đã được pha loãng trongmôi trường nuôi cấy để tạo ra một 100 mM giải pháp làm việc Khi tiếp xúc

với NP, các tế bào vi khuẩn được thu hoạch và rửa ba lần với PBS Các viên

tế bào đã được thu thập và một hệ thống treo đồng nhất được thực hiện bởi PBS lên đến 1 mL Sau đó, các tế bào được ủ với 1,5 ml dung dịch DCFH làm việc 2 -DA ở 37 ° C trong 30 phút Các tế bào được lysed trong dung dịch kiềm và ly tâm ở tốc độ 2200 vòng / phút Một mililit nước bề mặt được chuyển sang cuvette, huỳnh quang được đo ở 520 nm với quang phổ huỳnh quang (Hitachi F-1700) sử dụng kích thích 485 nm và một bộ khác cũng đượcchuẩn bị theo cách tương tự để phân tích cytometry dòng chảy Các giá trị được biểu diễn dưới dạng cường độ huỳnh quang phần trăm so với giếng đối chứng Các bức xạ huỳnh quang cũng được chụp bằng kính hiển vi tương phản pha Sự tạo ra ROS nội bào này đã được xác nhận bằng phân tích FACs

2.7.10 Hành động của các hạt nano bạc trên cấu trúc của các tế bào vi khuẩn

Các thể tích môi trường nuôi cấy khác nhau, các dung dịch Ag NP và các tế bào vi khuẩn được thêm vào 10 ml nuôi cấy, kết quả là nồng độ cuối cùng của các giá trị MIC tương ứng và nồng độ 10 8 CFU / mL tế bào vi

khuẩn Kiểm soát thí nghiệm đã được tiến hành trong trường hợp không có các VQG Ag Các môi trường nuôi cấy ở 37 ± 2 ° C với lắc ở tốc

độ 198 rpm trong 12 giờ Sau khi ủ, nuôi cấy vi khuẩn được ly tâm và loại bỏ các chất siêu phủ Pallet của vi khuẩn đã được cố định với 50 μl 2,5%

glutaraldehyde trong 5 phút ở 37oC và rửa ba lần với 1X PBS 50 μl PBS đã được thêm vào pallet này để tạo thành một hệ thống treo Một giọt pallet cố định được lấy trên một tấm kính và làm khô Sau đó mẫu được bọc bằng vàng được sử dụng để quan sát trong kính hiển vi điện tử quét (SEM, Hitachi S-3000N)

2.8 Phân tích thống kê

Các dữ liệu được biểu diễn bằng giá trị trung bình ± sai số chuẩn của trung

bình ( n = 6) Sự so sánh giữa các phương tiện kiểm soát và các nhóm đối

xử được thực hiện bằng cách phân tích một chiều phương sai (sử dụng gói thống kê Xuất xứ 6.1, Lab gốc, Northampton, MA, USA) với nhiều bài kiểm

tra so sánh t và p < 0,05 là giới hạn tầm quan trọng

3 kết quả và thảo luận

3.1 Tổng hợp Ags NP

Sau quá trình giảm sinh học, màu sắc của bình phản ứng là màu nâu tối Sự xuất hiện của một màu nâu sẫm trong bình phản ứng là dấu hiệu của sự hình thành của Ag NP Cường độ màu tăng theo thời gian do giảm Ag + Việc giảmion bạc đã được rõ ràng rõ ràng từ những thay đổi màu sắc liên kết với

nó Hình 1 cho thấy chỉ số AgNO 3giải pháp (A), màu sắc thay đổi trước (B) và

sau (C) quá trình giảm các tiền thân khi chúng chuyển đổi thành các VQG Nông nghiệp và sau thời kỳ lão hóa khác nhau trong quá trình bảo quản trong điều kiện môi trường xung quanh Sau khi bổ sung sinh khối vào dung dịch bạc nitrate, dung dịch chuyển từ màu không màu sang màu nâu tối Sinh khối khô đã được tìm thấy đóng một vai trò quan trọng trong việc tổng hợp các NPN của Nông nghiệp Người ta biết rằng sự thay đổi màu sắc của các giải pháp là do kích thích sự rung động Plasmon bề mặt với các NPN của Ag ( Mulvaney, 1996 ).

1. Tải xuống hình ảnh có độ phân giải cao (139KB)

2. Tải về hình ảnh kích thước đầy đủ

Hình 1 Thay đổi màu sắc cho thấy sự hình thành các NPN của Nông

nghiệp Ở đây, A: Agno 3giải pháp, B: Agno 3 + hương nhu trắng chiết xuất lá tại 0 h, C: Agno 3 + hương nhu trắng chiết xuất lá tại 48 h Màu tím đậm chỉ ra

sự hình thành các NPN của Nông nghiệp

3.2 Đặc tính của hạt nano

3.2.1 Quang phổ UV-vis

Phổ hấp thụ của NPN Ag được thể hiện trong hình 2 Mẫu cho thấy plasmon

bề mặt đặc trưng của các NPN Nông nghiệp Các VQG Nông nghiệp có một dải hẹp với tối đa là 415 nm Phổ hấp thụ của các NPN tam giác Ag cho thấy một đỉnh cao nhất giữa 420 và 450 nm với sự dịch chuyển màu xanh hoặc đỏkhi kích thước hạt giảm hoặc tăng tương ứng ( Pal và cộng sự, 2007, Jana vàcộng sự, 1999 )

1. Tải xuống hình ảnh có độ phân giải cao (96KB)

2. Tải về hình ảnh kích thước đầy đủ

Hình 2 Phân tích quang phổ UV-vis của chiết xuất lá Ocimum

gratissimum và giải pháp tổng hợp Ag NP.

3.2.2 Quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier

Các phép đo FTIR của các VQG Nông nghiệp tổng hợp được tiến hành để xác định sự tương tác có thể giữa protein và NPN của Ag Kết quả nghiên cứu của FTIR cho thấy những đỉnh điểm hấp thụ sắc nét ở khoảng 1631 và

3435 cm -1 ( Hình 3 ) Hấp thụ đỉnh tại 1631 cm -1 được gán cho liên kết amit của protein phát sinh do sự giãn nở cacbonyl trong protein, và các đỉnh tại

3435 cm -1 được gán cho OH kéo dài trong rượu và các hợp chất

phenolic Nồng độ hấp thụ ở 1631 cm -1 gần với mức báo cáo đối với các protein bản địa ( Macdonald và Smith, 1996) cho thấy các protein đã được tương tác với các hạt nano sinh tổng hợp và cấu trúc thứ phát của chúng cũng không bị ảnh hưởng trong quá trình phản ứng với các ion Ag + hoặc sau khi gắn với các hạt nano Ag ( Fayaz và cộng sự, 2010 ) Dải đã được quan sát ở 1588 cm -1 vì sự hiện diện của vòng thơm và dải phát sinh ở 1452 cm -

1 , 1383 cm -1 , và 1349 cm -1do rung động xương của các chất hữu cơ Các nghiên cứu quang phổ hồng ngoại này khẳng định rằng một nhóm cacbonyl

dư lượng amino axit và cho thấy khả năng liên kết chặt chẽ với kim loại đã gợi ý sự hình thành lớp phủ các hạt nano kim loại và hoạt động như tác nhân ngăn chặn sự tích tụ và cung cấp sự ổn định trong môi trường ( Sathyavathi

và cộng sự, 2010 ) Những kết quả này đã khẳng định sự hiện diện của các protein có thể hoạt động như các chất giảm và ổn định

1. Tải xuống hình ảnh có độ phân giải cao (100KB)

2. Tải về hình ảnh kích thước đầy đủ

Hình 3 Phân tích quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FTIR) của các NPN của Nông nghiệp Phương pháp pallet KBr được áp dụng để chuẩn bị mẫu

3.2.3 Tán xạ ánh sáng động (DLS) và tiềm năng zeta

Kích thước hạt trung bình, phân bố và chỉ số polydispersity (PDI) của NPs tổng hợp Ag trong các dung dịch được đánh giá bằng kỹ thuật DLS, được thể hiện trong hình 4 Mô hình DLS cho thấy NPN tổng hợp được tổng hợp theo

phương pháp xanh có đường kính trung bình Z là 31,45 nm theo phân bố

kích thước về số lượng và 20,53 nm theo phân bố mật độ (q0) bằng cách liênquan đến số lượng với PDI là 0,646 gợi ý rằng các hạt nano có độ phân tán cao trong môi trường nước Phân tán ánh sáng động (DLS) đo đường kính thủy động lực học của các hạt nano lớn hơn đường kính thực tế thu được từ hình ảnh SEM và TEM Giá trị tiềm năng zeta của các hạt nano bạc được tổng hợp là -15,2 mV và chúng tôi giả định rằng Ag NPS cho thấy sự ổn định trong nước do sự phóng tĩnh điện Sự ổn định được quan sát kết hợp với giá trị đo được cho các gợi ý zeta cho một cơ chế điện giải do hấp phụ các thành phần của chiết xuất lá cho các hạt Những hợp chất hữu cơ này hoạt động như những miếng đệm và ngăn ngừa sự tiếp xúc gần gũi giữa các hạt nano bạc Các hình ảnh TEM hỗ trợ cơ chế ổn định steric

1. Tải xuống hình ảnh có độ phân giải cao (72KB)

2. Tải về hình ảnh kích thước đầy đủ

Hình 4 Xác định kích thước năng động thuỷ điện của các Vườn Quốc gia Nông nghiệp bằng cách phân tán ánh sáng động (DLS) (Báo cáo Phân bố Kích thước theo Số)

3.2.4 Quét kính hiển vi điện tử

Kích cỡ, hình dạng và hình thái học của các VQG Nông nghiệp tổng hợp (Ag NPs) đã được đặc trưng bởi phân tích SEM Hình ảnh SEM cho thấy các NPN Nông nghiệp riêng lẻ Hình thái SEM của NPN Nông nghiệp cho thấy họ

có hình học gần như hình tam giác với kích thước trung bình

18 ± 3 nm Phát hiện này được thể hiện trong hình 5 Hình thái học của cácVườn Quốc gia được tổng hợp bằng các phương pháp chủ yếu là cấu trúc tam giác với hình thái học được xác định rõ ràng

1. Tải xuống hình ảnh có độ phân giải cao (186KB)

2. Tải về hình ảnh kích thước đầy đủ

Hình 5 Kính hiển vi điện tử quét (SEM) của các NPP tổng hợp Ag

3.2.5 Siêu vi điện tử truyền

Các hình ảnh TEM của các NPN nông nghiệp đã được chuẩn bị được trình bày trong Hình 6 Nó đã được tiết lộ rằng các hạt nano Ag có hình dạng tam giác chủ yếu với các hạt cực đại có kích thước với đường kính trung bình

16 ± 2 nm và không tiếp xúc trực tiếp với nhau Người ta cũng quan sát thấyrằng NPN của Nông nghiệp được phân bố đều trong mẫu Kích cỡ NP được quan sát thấy (SEM và TEM) lớn hơn một chút so với đường kính thủy động lực học thu được từ thí nghiệm DLS SEM hoặc TEM mô tả kích thước ở trạng thái khô của mẫu, trong khi DLS đo kích thước trong trạng thái ngậm nước của mẫu, vì vậy kích thước được đo bằng DLS là đường kính thủy động

lực và phạm vi lớn hơn ( Huang và cộng sự, 2010) Tuy nhiên, người ta phải lưu ý rằng bằng SEM hoặc TEM phân tích, chúng tôi đo hình ảnh của các hạt khô Vì vậy, loại phạm vi phân loại này đã thu được Hình ảnh TEM cho thấy rằng các hạt nano được gắn vào một ma trận dày đặc có thể là các thành phần ổn định hữu cơ của những chiết xuất lá.

1. Tải xuống hình ảnh có độ phân giải cao (206KB)

2. Tải về hình ảnh kích thước đầy đủ

Hình 6 Kính hiển vi điện tử truyền (TEM) của NPs tổng hợp Ag

3.2.6 Nghiên cứu nhiễu xạ tia X

Hình ảnh nhiễu xạ tia X của các NPN Ag được tổng hợp bằng phương pháp màu xanh lá cây được biểu diễn trong Hình 7 Quá trình lập chỉ mục của hình

ảnh nhiễu xạ bột đã được thực hiện và Miller chỉ số ( h k l ) cho mỗi đỉnh

được phân công trong bước đầu tiên Không có tạp nhiễu giả được nhận thấy

do không có các tạp chất tinh thể ( Varshney và cộng sự, 2010 ) Tất cả các phản xạ tương ứng với kim loại bạc tinh khiết với đối xứng khối lập phương trung tâm Cường độ đỉnh núi phản ánh mức độ kết tinh cao của các VQG

Ag Các XRD cho thấy rằng các NPN Ag được hình thành có tính chất tinh thểcao trong tinh thể ( Hình 7 ) Dữ liệu cho thấy các đỉnh điểm nhiễu xạ ở

2 θ = 31.74, 45.74, 54.35, 57.04, 76.40 và 85.26 có thể được lập chỉ mục tới

(1 0 0), (1 0 3), (0 0 6), (1 0 5), (0 0 8) và (2 0 3 ) máy bay hạt tinh thể bạc tinh khiết (JCPDS 41-1402) Nó khẳng định rằng thành phần chính của các hạt nano là bạc Từ độ rộng đầy đủ tối đa một nửa của đỉnh nhiễu xạ tia

X, kích thước tinh thể của các NPN của Ag được tính bằng phương trình Scherrer như sau:

B=kλ/βcosθ

Trong đó: B là kích thước trung bình của các miền có trật tự (tinh thể), có thể nhỏ hơn hoặc bằng kích thước hạt; k là một yếu tố không có kích thước, với

một giá trị gần với sự thống nhất Yếu tố hình dạng có giá trị điển hình là

khoảng 0,9, nhưng thay đổi theo hình dạng thực tế của tinh thể; λ là bước sóng tia X; β là đường mở rộng ở một nửa cường độ cực đại (FWHM), sau

khi trừ đi sự mở rộng của đường dụng cụ, tính bằng radian Số lượng này

cũng đôi khi được biểu thị là Δ (2 θ ); θ là góc Bragg.

1. Tải xuống hình ảnh có độ phân giải cao (119KB)

2. Tải về hình ảnh kích thước đầy đủ

Hình 7 Phân tích nhiễu xạ tia X (XRD) của các NPN của Nông nghiệp

Các kích thước tính toán của các VQG Ag là 20,29 nm tại 2 θ = 31,74 ° và 28,93 nm tại 2 θ = 45,74 ° Các giá trị kích thước hạt có nguồn gốc từ đồ thị

bột XRD theo phương trình Scherrer được kết hợp tốt với kích thước hạt thu được từ ảnh SEM và TEM

Phạm vi kích thước thu được từ XRD là 20,29 Khi kích thước quá thấp, NP phải là polycrystalline, và crystal đơn cho thấy phạm vi kích thước cao hơn

3.2.7 Nghiên cứu EDX

Hình 8cho thấy phổ EDX của các hạt nano Ag đã được chuẩn bị Tín hiệu Silver (Ag) xuất phát từ các hạt nano của Ag và tỷ lệ phần trăm nguyên tử củabạc là 31,39% Trừ Ag, cũng có một số đỉnh khác Tỷ lệ phần trăm nguyên tử của cacbon (C), oxy (O), clo (cl) và natri (Na) lần lượt là 64,66%, 1,24%, 1,08% và 1,63% Tín hiệu carbon (C) đến từ các thành phần hấp phụ của chất chiết xuất lá cũng như vật liệu phủ của dụng cụ Các tín hiệu của O và Cl

có thể là do sự hấp thụ các yếu tố thực vật trên các NPN của Nông

nghiệp Các tín hiệu của O một phần có thể đến từ khí quyển hoặc -OH từ NaOH được sử dụng để điều chỉnh pH Tín hiệu natri có thể được sản xuất từ

sodium hydroxide được sử dụng để điều chỉnh pH trong quá trình tổng hợp

Ag NP Ngoại trừ carbon, các nguyên tố khác có tỷ lệ phần trăm nguyên tử rấtthấp so với bạc,

1. Tải xuống hình ảnh có độ phân giải cao (43KB)

2. Tải về hình ảnh kích thước đầy đủ

Hình 8 Phổ X-quang Xerox phân tán năng lượng (EDX) của các NPN Nông nghiệp cho thấy có sự hiện diện của các yếu tố Phyto khác nhau làm các tác nhân khép kín

3.2.8 Phép thử kết hợp protein huyết tương

Hóa học bề mặt của vật liệu nano có ảnh hưởng lớn đến quá trình hấp phụ protein Một số yếu tố như tương tác k hydro nước, tương tác tĩnh điện và cáctương tác hóa học cụ thể giữa protein và chất hấp phụ đóng vai trò quan trọng Việc gắn protein vào các NPN của Ag được trình bày trong Hình 9 Kếtquả của chúng tôi hỗ trợ NPs có thể liên kết với các protein huyết tương khác nhau Kiến thức về hấp thụ albumin vào NP rất quan trọng bởi vì một khi trong

cơ thể, các protein của máu sẽ hấp thụ các hạt và các tế bào sẽ phản ứng vớicác protein hấp phụ trên các hạt mà cuối cùng sẽ ảnh hưởng đến sự hấp thu của tế bào và có thể làm thay đổi hoạt tính sinh hóa

1. Tải xuống hình ảnh có độ phân giải cao (141KB)

2. Tải về hình ảnh kích thước đầy đủ

Hình 9 Xét nghiệm gắn kết protein Plasma với các NPN của Nông

nghiệp Biểu đồ thể hiện phần trăm protein binging và giảm hàm lượng proteinsau khi kết dính Các giá trị được biểu diễn bằng giá trị ± SEM của ba thí

nghiệm; các chỉ số trên cho thấy sự khác biệt đáng kể ( p < 0,05) so với

nhóm đối chứng

3.3 Hoạt tính kháng khuẩn của NPN Nông nghiệp

3.3.1 Xác định MIC và MBC

Hoạt tính kháng khuẩn của vi khuẩn E coli Gram âm và vi khuẩn S

aureus gram dương ở các nồng độ khác nhau cho thấy chúng có hoạt tính

kháng khuẩn phụ thuộc mạnh vào cả hai vi sinh vật thử nghiệm ( Bảng

1 ) Hoạt tính kháng khuẩn (MIC và MBC) của chiết xuất thực vật đã vắng mặtđến 1024 μg / mL đối với cả hai chủng vi khuẩn Nó đã được tìm thấy, khi nồng độ các hạt nano sinh tổng hợp tăng lên, sự tăng trưởng của vi sinh vật giảm trong cả hai trường hợp Các vi sinh vật tổng hợp sinh học đã được quan sát thấy có hoạt tính kháng khuẩn nhiều hơn đối với vi sinh vật gram âmlớn hơn gram dương Nồng độ thuốc đặc biệt được ghi nhận khi không có sự

tăng trưởng rõ rệt xuất hiện trong gram dươngS aureus và vi khuẩn gram

âm E coli âm tính trong trường hợp điều trị NPP của Ag Trong trường hợp chủng gram dương E aureus , giá trị MIC là 8 μg / ml, trong khi trường hợp tiêu cực E coli gram , giá trị MIC là 4 μg / mL ( Bảng 1 và tệp bổ sung

S1 ) MIC của mẫu thấp hơn khi xét nghiệm so với E coli so với khi so sánh với S aureus Để tránh khả năng giải thích sai do độ đục của các hợp chất

không hòa tan vào ống pha loãng, MBC được xác định bằng cách nuôi cấy các độ pha loãng MIC trên đĩa thạch Muller Hinton vô trùng Nồng độ thuốc được ghi nhận khi không có sự tăng trưởng rõ rệt nào xuất hiện trên đĩa thạch

trong trường hợp điều trị NPP của Ag Các giá trị của MBC là 16 μg / mL và

8 μg / mL ở S aureus và E coli khi nạp vào các nồng độ Ag NP ( Bảng

thành phần hóa học của màng ngoài trong E colitế bào đã được nghiên cứu

rộng rãi Lipid bilayer của màng ngoài không đối xứng: tờ rơi bên trong hầu hết chứa chuỗi phospholipid đóng gói, trong khi tờ ngoài bao gồm các phân

tử lipopolysaccharide (LPS) Bằng chứng từ các thí nghiệm di truyền và hóa học đã chứng minh rằng lớp LPS của màng ngoài đóng một vai trò thiết yếu

trong việc cung cấp một rào cản thấm lọc cho E coli và các vi khuẩn Gram

âm khác ( Amro và cộng sự, 2000 ) Ở đây một lần nữa màng tế bào bên ngoài đóng một vai trò quan trọng trong những kết quả đó

3.3.2 Xác định dung sai

Mức độ khoan dung của mỗi chủng đối với NPN của nông dân được tính toán

từ các giá trị MIC và MBC tương ứng Trong trường hợp của chủng S

aureus , mức độ khoan dung là 2, trong khi chủng E coli , mức độ khoan

dung cũng là 2 khi tính vào các NPN của Nông nghiệp Ngụ ý là các chất diệt khuẩn diệt vi khuẩn, trong khi các chất ức chế vi khuẩn đơn giản ức chế sự phát triển của vi khuẩn Khi tỷ lệ MBC / MIC lớn hơn hoặc bằng 16 đối với vi khuẩn, tác nhân kháng khuẩn được coi là vi khuẩn và khi tỷ lệ này nhỏ hơn

hoặc bằng 4 thì tác nhân được coi là diệt khuẩn ( Woods và Washington,

1995) Ủy ban Tiêu chuẩn Phòng thí nghiệm Lâm sàng Quốc gia (NCCLS) cho biết thêm rằng một tác nhân có tính diệt khuẩn khi nó làm giảm hơn 3-log (99,9%) trong các đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) / mL sau 18-24 giờ nuôicấy trong chất lỏng truyền thông ( Woods và Washington, 1995 ) Để đảm bảoước tính chính xác về giết chết khoảng 99,9%, chất gây bệnh được sử dụng

để thực hiện phân tích MBC phải ít nhất là 5 x 10 5 CFU / mL được sử dụng trong thử nghiệm của MBC trong nghiên cứu của chúng tôi MBC thường trùng với hoặc trong vòng 1 hoặc 2 pha loãng của MIC; nếu MBC vượt MIC từ

32 lần trở lên, vi khuẩn được định nghĩa là khoan dung ( Woods và

Washington, 1995) Tỷ lệ MBC / MIC là một tham số phản ánh khả năng diệt khuẩn của hợp chất được phân tích Trong nghiên cứu của chúng tôi, Ag NPs

có tác dụng diệt khuẩn đối với hai dòng vi khuẩn vì tỷ lệ giữa tỷ lệ MBC / MIC

là 2 Như đã thấy trong Bảng 1 , không có sự khác biệt có ý nghĩa giữa tác động diệt khuẩn của các vi khuẩn kháng thuốc

3.3.3 Phun đĩa thạch (DAD)

Điều này được chứng minh qua các giá trị đường kính của vùng ức chế thu được trong quá trình đánh giá hoạt tính kháng khuẩn ( Bảng 1 ) Các vùng ức

chế E coli và S aureus chống lại NPN của Ag, Nitrat bạc và nước cất như

kiểm soát được thể hiện trong Tệp bổ sung S3 Đối với cả hai chủng vi

khuẩn, không có khu vực ức chế đã được quan sát thấy trong kiểm soát cũngnhư dung dịch bạc nitrat Hạn chế các vi khuẩn gây bệnh cho thấy sự suy giảm tăng trưởng đáng kể của hai loài vi khuẩn gây bệnh nổi tiếng Các vùng

có diện tích 8 ± 0,5 mm và 12 ± 0,6 mm được quan sát thấy ở chủng E coli trên 4 μg (MIC cons.) Và 8 μg (MBC cons) của các NPN của Nông

nghiệp Các vùng có mật độ 10 ± 0,5 mm và 16 ± 1 mm được quan sát

thấy đối với chủng S aureus tương ứng với 8 μg (MIC conc) và 32 μg (MBC

conc) của Ag NP Sự kết hợp của tài sản cố hữu của chiết xuất Tulsi với sự kết hợp của Ag NPs thực sự đã chứng minh là có lợi cho việc giảm thiểu liều cần thiết cho sự ức chế sự tăng trưởng của vi khuẩn

3.3.4 Giết chết động học

Phương pháp động học giết chết đã được sử dụng để phân tích khả năng sống sau khi xử lý sau khi xử lý và xác định thời gian tối thiểu cần thiết để đạt được tác dụng ức chế hoặc diệt khuẩn, vì không có sự khác biệt đáng kể giữa các tác động diệt khuẩn của Ag NP trên các vi khuẩn khác nhau Đường

cong giết thời gian của các NPN nông nghiệp chống lại E coli và S

aureus được trình bày trong Hình 10 Hoạt tính diệt khuẩn đã dần dần tăng lên đến 8 giờ tiếp xúc của vi khuẩn chống lại NPN của Ag ở nồng độ MBC tương ứng cho cả hai chủng và toàn bộ vi khuẩn đã bị giết trong giai đoạn này Ag NPS cho thấy một hoạt tính diệt khuẩn và phụ thuộc vào thời gian đối