Khi E.coli được nuôi cấy trong môi trường EMB thì xảy ra các phản ứng sinh hóa (sản phẩm trao đổi chất giữa E.coli phản ứng với thuốc thử Eorin), tiêu thụ các nguồn cơ chất để sinh trưở[r]
Trang 1Thực hành VSV
Câu 1 Vì sao ở từng môi trường phải thay đổi nhiệt độ khi đem đi ủ?
Nuôi cấy trong môi trường LB ở 370C để kích thích cho các tế bào mọc lên
và phát triển, gồm có 4 nhóm coliform (tổng số và chịu nhiệt) Sau đó cấy sang môi trường BGBL ở 420C mục đích để tuyển chọn các VSV chịu nhiệt trong đó có E.coli đồng thời loại bỏ coliform tổng số (vì BGBL là môi trường tăng sinh chọn lọc ức chế Gr (+) tạo điều kiện cho Gr(-) phát triển mà trong Gr (-) có nhiều vi khuẩn trong đó có chứa E.coli) Sau đó ta test vào môi trường EMB ở 370C để E.coli sinh trưởng và phát triển tốt => dễ dàng quan sát nhận diện (xuất hiện ánh kim màu tím)
Câu 2 Trong tất cả các môi trường thì môi trường nào đặc biệt nhất? Vì sao?
Môi trường Ashby đặc biệt nhất vì nó là môi trường duy nhất không có nguồn Nitơ nhưng vẫn cố định được đạm, còn tất cả nhũng môi trường khác đều có nguồn Nitơ
Câu 3 Nếu lấy mẫu đất ở vùng khác (không phải là chỗ cây bộ đậu) thì có phân lập được VSV cố định đạm hay không?
Có vì ở những vùng đất khác có chứa tới 3 nhóm VSV tham gia vào quá trình
cố định đạm:
- Azobacter
- Clostridium
- Anabaena azollae và bèo hoa dâu
Trang 2Câu 4 Tại sao dung dich chuyển màu khi đem ủ?
Điển hình: BGBL (PH =7,2): Khi nuôi cấy sẽ xảy ra quá trình lên men lactose -> axit hóa môi trường ->hạ PH -> chuyển màu dung dịch (xanh ->xanh tím)
Câu 5 PH ảnh hưởng đến môi trường nuôi cấy như thế nào?
PH ảnh hưởng đến trạng thái lỏng rắn của agar Nếu PH thấp -> agar lỏng gây khó khăn cho việc nuôi cấy sau này Ngoài ra, PH còn ảnh hưởng đến khả năng sinh trưởng của VSV trong môi trường
Mỗi loài VSV thích nghi với độ PH khác nhau:
- Vi khuẩn và vi nấm là nhóm VSV ưa axit nên khi phân lập trong môi trường Cz, As được điều chỉnh PH thấp (6-6.5)
- Xạ khuẩn được cấy trong môi trường trung tính hoặc kiềm ( Gause có
PH = 7.4)
Vì vậy, cần phải điều chỉnh PH chính xác để xác suất có VSV xuất hiện là cao nhất
Câu 6 Tại sao không dùng đĩa peptri nhựa mà dùng peptri thủy tinh?
Vì peptri nhựa không khử trùng được ở nhiệt độ cao
Câu 7 Tại sao khuẩn lạc có nhiều hình dạng khác nhau?
Vì chúng có các tiêm mao có khả năng di chuyển để tìm thức ăn
Vi khuẩn có 2 đặc tính:
- Dính bám: nhờ các dung mao
- Di động: nhờ các tiêm mao
Trang 3Câu 8 Khi nào thích hợp để đọc kết quả trong môi trường EMB?
Nên đọc sau 6h, nếu để lâu sẽ mất màu -> không thấy được ánh kim
Câu 9 Tại sao để lâu ánh kim sẽ phai dần?
Khi E.coli được nuôi cấy trong môi trường EMB thì xảy ra các phản ứng sinh hóa (sản phẩm trao đổi chất giữa E.coli phản ứng với thuốc thử Eorin), tiêu thụ các nguồn cơ chất để sinh trưởng và phát triển -> xuất hiện ánh kim Sau đó một thời gian, nguồn cơ chất ít dần, phản ứng sinh hóa kết thúc thì màu ánh kim sẽ nhạt dần (sau 2 ngày)
Câu 10 Thành phần và số lượng VSV nói lên điều gi?
Điển hình: phân lập EMB xác định E.coli.
Vì E.coli lf sinh vật chỉ thị môi trường nên khi phân lập ta thấy càng nhiều E.coli thì chứng tỏ môi trường càng bị ô nhiễm bởi chất thải hữu cơ từ động vật máu nóng Các VSV đường ruột này (E.coli) gây ảnh hưởng đến sức khỏe: beebhj dịch tả…
Vì vậy số lượng E.coli dự báo môi trường đó ô nhiễm như thế nào từ đó cảnh báo cho người dân phải đề phòng nguồn nước thải ô nhiễm và có biện pháp xử lý thích hợp
Câu 11 Phương pháp IMVIC phân lập E.coli?
- Sinh indol
- Tạo ra nhiều axit -> PH giảm -> chuyển màu dung dịch
- Không dùng citrat làm nguồn carbon duy nhất
- Không có phản ứng sinh hóa(không sinh aceoin)
Trang 4Nguyên tắc: E.coli được phát hiện do khả năng lên men lactose.
Một số câu hỏi:
1 Tại sao phải pha loãng mẫu trước khi đem cấy?
2 Tai sao kết tủa CaPO4 tan?
3 Vì sao trong ống dương tính xuất hiện dung dịch huyền phù ?
4 Thành phần và số lượng VSV nói lên điều gi ? (G, Cz, As, P)
5 Phân biệt hình thái của : vi nấm, vi khuẩn, xạ khuẩn trên kính hiển
vi ?
6 Vì sao ở môi trường này thì VSV này chiếm ưu thế, môi trường khác thi VSV khác chiếm ưu thế ?
7 Vì sao các loài VSV có màu sắc khác nhau ?