Thư viên cDNA cDNA là DNA bổ sung được phiên mã từ mRNA bằng enzyme phiên mã ngược. cDNA ko chứa intron, chỉ gồm exon so với DNA trong hệ gen. Thư viện cDNA là tập hơp các dòng cDNA từ mRNA của các mô cụ thể. Xây dựng thư viện: gồm 5 bước B1: tinh sạch mRNA từ RNA tổng số của một bộ phận cơ thể sinh vật. B2: Tổng số sợi cDNA thứ nhất từ khuôn mẫu mRNA từ enzyme phiên mã ngược B3: gây biến tính bằng cách đun sôi thể lai mRNAcDNA để phá hủy mRNA bằng RWASE H của E.coli. Tổng hợp sợi cDNA thứ hai từ khuôn mẫu sợi cDNA thứ nhất nhờ enzyme DNA polymerase với primer là vòng cặp tóc của nó để thu được phân tử cDNA sợi đôi. B4: cắt vòng cặp tóc bằng enzyme nuclease S1 và enzyme Klenow sửa chữa hai đầu của sợi đôi cDNA để tạo ra đầu bằng. B5: Gắn các đoạn nối (linker) vào hai đầu của cDNA của sợi đôi trước khi tạo dòng và trong vector thích hợp để xây dựng cDNA. Hoạt động: từ một tế bào của một loài chứa hệ gen mang nhiều đoạn gen quy định nhiều tính trạng ròi được phân cắt thành nhiều đoạn DNA nhỏ hơn mà mooic đoạn mang mỗi tính trạng tương ứng. Ưu điểm: dễ thao tác Có thể tổng hợp protein mong muốn với số lượng lớn. Ứng dụng: Phát hiện gen mới. Giải thíchnghiên cứu chức năng gen. Nghiên cứu cách cắt ghép khác của RNA. Tạo các sản phẩm sinh học thương phẩm.
Trang 1Thư viên cDNA cDNA là DNA bổ sung được phiên mã từ mRNA bằng enzyme phiên mã ngược cDNA ko chứa intron, chỉ gồm exon so với DNA trong hệ gen
Thư viện cDNA là tập hơp các dòng cDNA từ mRNA của các mô cụ thể Xây dựng thư viện: gồm 5 bước
B1: tinh sạch mRNA từ RNA tổng số của một bộ phận cơ thể sinh vật B2: Tổng số sợi cDNA thứ nhất từ khuôn mẫu mRNA từ enzyme phiên mã ngược
B3: gây biến tính bằng cách đun sôi thể lai mRNA-cDNA để phá hủy mRNA bằng RWASE H của E.coli Tổng hợp sợi cDNA thứ hai từ khuôn mẫu sợi cDNA thứ nhất nhờ enzyme DNA polymerase với primer là vòng cặp tóc của nó để thu được phân tử cDNA sợi đôi
B4: cắt vòng cặp tóc bằng enzyme nuclease S1 và enzyme Klenow sửa chữa hai đầu của sợi đôi cDNA để tạo ra đầu bằng
B5: Gắn các đoạn nối (linker) vào hai đầu của cDNA của sợi đôi trước khi tạo dòng và trong vector thích hợp để xây dựng cDNA
Hoạt động: từ một tế bào của một loài chứa hệ gen mang nhiều đoạn gen quy định nhiều tính trạng ròi được phân cắt thành nhiều đoạn DNA nhỏ hơn mà mooic đoạn mang mỗi tính trạng tương ứng
Ưu điểm: - dễ thao tác
- Có thể tổng hợp protein mong muốn với số lượng lớn
Ứng dụng: - Phát hiện gen mới
- Giải thích/nghiên cứu chức năng gen
- Nghiên cứu cách cắt ghép khác của RNA
- Tạo các sản phẩm sinh học thương phẩm