máy và thiết bị sinh học trong công nghệ thực phẩm

CẤU TRÚC CỦA MÁY ĐIỆN DI 4.. 1.Điện di là gì? Là hiện tượng dịch chuyển của các vật thể mang điện tích dưới tác động của điện trường Điện di hay điện di gel áp dụng trong sinh học phân

QUÁ TRÌNH VÀ THIẾT BỊ SINH HỌC TRONG CNTP

GVHD: ThS NGUYỄN THỊ VÂN ANH SVTH: NGUYỄN THỊ THÙY DƯƠNG

NGUYỄN THỊ HOA

ĐỀ TÀI

TÌM HIỂU VỀ MÁY ĐIỆN DI

NỘI DUNG

1 ĐIỆN DI LÀ GÌ?

2 AXIT DEOXYRIBONUCLEIC (AND) VÀ NGUYÊN TẮC XÁC ĐỊNH

3 CẤU TRÚC CỦA MÁY ĐIỆN DI

4 CẤU TRÚC VẬN HÀNH

1.Điện di là gì?

 Là hiện tượng dịch chuyển của các vật thể mang điện tích dưới tác động của điện trường

Điện di hay điện di gel áp dụng trong sinh học phân tử là một kĩ thuật trong phân tích các phân tích các phân tử AND, ARN hay protein dựa trên các đặc điểm vật lý của chúng như kích thước, hình dạng hay điểm đẳng điên tích

2 AXIT DEOXYRIBONUCLEIC (AND) VÀ NGUYÊN TẮC XÁC ĐỊNH

2.1 Định nghĩa

- Acid Deoxyribo Nucleic (viết tắt ADN theo tiếng pháp

hay DNA theo tiếng Anh ) là một phân tử acid nucleic mang thông tin di truyền mã hóa cho hoạt động sinh trưởng và phát triển của các dạng sống bao gồm cả một số virus

- ADN thường được coi là vật liệu di truyền ở cấp độ phân tử tham gia quyết định các tính trạng Trong quá trình sinh sản, phân tử ADN được nhân đôi và truyền cho thế hệ sau

2.2 Cấu trúc không gian của ADN

2.3 Nguyên tắc xác định

• Công nghệ ADN tái tổ hợp – hiện là nền tảng cho sự phát triển như vũ bão của ngành công nghệ sinh học hiện đại

• Các phương pháp phân tích, tổng hợp hiện đại là tách ADN, xác định thứ tự, tổng hợp…

• Một dò tìm đơn giản chỉ là một khúc ADN (ARN) có thể tìm khúc bổ sung bằng cách lai

3 Cấu trúc của máy điện di

en

Khay vận hành

• Khuôn đúc gel

• Khay di động trong suốt

• Miếng bọt đệm

• Khuôn đúc gel

• Khay di động trong suốt

• Miếng bọt đệm

Nắp có điện áp cao • Nắp thiết bị

• Mã màu đầu ra nối với điện cực trên đế máy với nguồn điện

• Nắp thiết bị

• Mã màu đầu ra nối với điện cực trên đế máy với nguồn điện

Buồng giảm sốc

• Ôngs nối điện cực

• Bục di chuyển

• Nơi nạp 50/50 etylen glycol/ nước vào

• Ôngs nối điện cực

• Bục di chuyển

• Nơi nạp 50/50 etylen glycol/ nước vào

4 Cấu trúc vận hành

4.1 Chuẩn bị dung dịch

 Chuẩn bị 250ml dung dịch đệm.Hai dung dịch đệm được sử dụng phổ biến cho điện di AND đượcchuẩn bị theo công thức pha chế sau:

1 10X tris-borate-EDTA.nguồn cung cấp chất đệm

2 10X tris-acetate-EDTA.cung cấp cho chất đệm

3 Dung dịch ETDA(etylen diamin tetraacetic axid)

4.2 Đúc gel

- Thiết bị đặt khay di động

- Chuẩn bị lược

- Di chuyển lược

- Đổ dung dịch agaroza vào khuôn đúc

- Tiến hành tháo lược

- Tháo khay di động và gel

4.3 Vận hành điện di

- Làm lạnh trước khi điện di

- Đổ dung dịch vào các khoang sao cho đến khi đệm cao hơn gel khoảng 1mm(khoảng 220ml)

- Nạp mẫu

- Đặt nắp để catot(-,dây đen)ở đoạn

cuối gần mẫu nhất.(Mẫu acid nucleic di chuyển về phía cuối anot,+,dây đỏ.Nối các dây màu tới các nguồn điện.Đặt mức điện áp và thiết bị để bấm giờ theo mức phân ly

4.4 Tính kết quả

Hiện tượng điện di chất gel có thể sử dụng những mảnh nhỏ ADN khoảng 0.1kb hay nhỏ hơn loại gel

polyacrylamit thường sử dụng những mảnh nhỏ hơn 1kb

• Tính điện di của ADN:

-Nồng độ agaroza quy định cho quá trình phân ly thành những mảnh vỡ với những kích thước khác nhau

- Nhân tố ảnh hưởng :chất đệm, điện áp đặt vào, nhiệt độ, sự cố của etydi brommua, các agaroza đặc biệt có sẵn

• Tính điện di của ARN

ARN có thể phân chia dưạ theo kích thước cơ bản

4.5 Sự phát hiện ADN

-AND được phát hiện nhờ sự phát huỳnh quangcuar liên kết etydi brommua hay nhờ phương pháp chụp ảnh bằng tia Xcuar đồng vị phóng xạ AND

-Để chụp ảnh gel,dùng phương pháp chiếu tai cực tím trên bề mặt mỗi đĩa vận hành hoặc di chuyển nhẹ bản gel trên bề mặt sẽ quan sát được tối đa

.Một số ứng dụng:

- Trong nghành công nghệ thực phẩm hiện nay:

Dùng để phân tách ADN (ARN)

♦

Tinh sạch các đại phân tử protein

♦

Tinh sạch các nucleic acid-trên cơ sở kích thước/khối lượng, điện tch

♦

và cấu hình của chúng

13

- Ứng dụng điện di trong nông nghiệp

o Cải thiện phẩm chất những giống đặc sản

o Chọn tạo các giống triển vọng