Kỹ thuật phân tích vi sinh SHIGELLA

Trang 1

GVHD: Văn Hồng Thiện

Nhóm 5 Lớp DHPT7

Kỹ thuật phân tích Vi sinh:

SHIGELLA

Kỹ thuật phân tích Vi sinh:

SHIGELLA

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP HỒ CHÍ MINH

KHOA CÔNG NGHỆ HÓA

BỘ MÔN HÓA PHÂN TÍCH

Trang 3

1 Tổng quan về Shigella

−Bệnh lỵ trực khuẩn đã có từ rất lâu

−Nhưng phải tới năm 1896 trong một vụ dịch lỵ trực khuẩn ở Nhật, tác giả Shiga

đã phát hiện mầm bệnh là Shigella shiga

−Năm 1900 Flexneri và Strong đã tìm ra Shigella flexneri

−Sau này Boyd, Lentz và nhiều tác giả khác đã tìm ra các chủng lỵ khác gây bệnh

ở người

1.1 Lịch sử hình thành

Trang 4

1.1 Định nghĩa về Shigella

+ Là Trực khuẩn Gram âm

+ Hiếu khí và kị khí tùy ý

+ Lên men glucose không sinh hơi

+ Hầu hết các loài không lên men và tạo axit từ lactose, dulcitol

+ Không sinh H2S

+ Không có enzym lysine decarboxylase

Trang 5

1.3 Phân loại Shigella

− Shigella có kháng nguyên thân O, không có kháng nguyên H Dựa vào kháng nguyên O và tính chất sinh hoá, Shigella được chia thành 4 nhóm với nhiều typ huyết thanh:

+ Nhóm A: S.dysenteriae: có 15 typ huyết thanh, đáng chú ý là S.dysenteriae typ 1 (Sh.shiga).+ Nhóm B: S.flexneri (có 8 typ huyết thanh)

+ Nhóm C: S.boydii (có 19 typ huyết thanh)

+ Nhóm D: S.sonnei (có 1 typ huyết thanh)

Trang 6

Nhóm A: Shigella dysenteriae

−Không lên men được Mannitol

−Trong các chủng Shigella cần chú ý đến Sh dysenteriae typ 1 (Shigella Shiga) Shigella shiga khác với những Shigella khác về 3 điểm quan trọng:

+Thường gây nên những vụ dịch lớn và kéo dài

+Kháng kháng sinh xảy ra phổ biến hơn các chủng khác

+Thường gây bệnh lỵ nặng hơn, kéo dài hơn và gây tử vong nhiều hơn chủng khác

Trang 7

Nhóm C: Shigella boydii Nhóm D: Shigella sonnei

− Có khả năng lên men Mannitol và sinh axit

Trang 8

1.4 Nguồn ô nhiễm Shigella vào thực phẩm

−Nguồn nước

−Nguồn nguyên liệu

−Công nhân chế biến

Các thực phẩm dễ nhiễm Shigella:

Trang 9

1.5 con đường lấy nhiễm

http://cse.duytan.edu.vn

Trang 10

2 Nguyên tắc xác định Shigella

Trang 11

3 Môi trường và hóa chất

 Canh Tryptose soya

 Môi trường Tergitol – 7 Agar (T7A)

 Canh Gram Negative (GN)

 Thạch macConkey (MAC)

 Thạch Xylose Lysine Desoxycholate (XLD)

 Lysine Decarboxylase Broth (LD)

 Thạch Hektoen Enteric (HE)

 Thạch Deoxycholate Citrit Agar

Trang 12

3 Môi trường và hóa chất

 Mannitol Phenol red Broth (MPR)

 Ducitol Phenol Red Broth (DPR)

 Thuốc thử oxidase

 Thuốc thử catalase

 Thạch Triple Sugar Iron (TSI)

 Môi trường thử nghiệm tính di động

 Kháng huyết thanh: bốn loại kháng huyết thanh đa giá polyvalent A, B, C, D

Trang 13

Đồng nhất 25g mẫu trong 225 mL TSB, pH=7,2, ủ 37oC, 16

Phân lập khuẩn lạc đơn trên ít nhất 2 môi trường chọn lọc

phân biệt (T7A, MAC, XLD,HE, DC,…), ủ 37oC, 16 - 20h

Phân lập khuẩn lạc đơn trên ít nhất 2 môi trường chọn lọc

phân biệt (T7A, MAC, XLD,HE, DC,…), ủ 37oC, 16 - 20h

Chọn khuẩn lạc đặc trưng cho Shigella, cấy sang BHI hay

TSA, ủ qua đêm ở 37oC

Chọn khuẩn lạc đặc trưng cho Shigella, cấy sang BHI hay

TSA, ủ qua đêm ở 37oC Thử nghiệm sinh hóa chuyên biệt và thực hiện ngưng kết

huyết thanh để phân loại

Thử nghiệm sinh hóa chuyên biệt và thực hiện ngưng kết huyết thanh để phân loại

Kết luận: Shigella dương tính/âm tính trong 25g mẫu Kết luận: Shigella dương tính/âm tính trong 25g mẫu

Thử nghiệm sinh hóa khẳng định Thử nghiệm sinh hóa khẳng định

Thử nghiệm sinh hóa cho kết quả:

- KIA hoặc TSI:

đỏ/vàng/H2S(-)/gas(-)

- Di động trong thạch mềm, không di động

- Oxydase

Thử nghiệm sinh hóa cho kết quả:

- KIA hoặc TSI:

Trang 14

4.1 Tăng sinh

−Có thể pha loãng mẫu trong bình tam giác,

sau khi chỉnh pH, ủ các bình này ở điều kiện kỵ khí ở

nhiệt độ và thời gian như trên

−Sau đó chuyển sang tăng sinh chọn lọc:

Chuyển 0.1mL canh tăng sinh GN, ủ ở 37oC trong

Trang 15

4.2 Phân lập

Khuẩn lạc Shigella trong các môi trường

• T7A: màu ban đầu có màu đục như sữa màu xanh hơi vàng sau đó chuyển màu xanh nhat

• MAC: có màu đỏ, trong suốt

Trang 16

4.2 Phân lập

• XLD: có màu đỏ, trong suốt

Trang 17

4.2 Phân lập

• Deoxycholate Citrat Agar: môi trường có màu đỏ cam hơi đục sau đó chuyển sang màu

đỏ nhạt

• HE: có màu xanh nhạt

Trang 18

4.3 Thử nghiệm sinh hóa và huyết thanh

 Từ khuẩn lạc nghi ngờ, lấy ít nhất 5 khuẩn lạc cấy vào môi

trường không chọn lọc TSA, ủ 37 0C trong 20 -24 giờ

 Thử nghiệm sàng lọc:cấy vào môi trường TSI, ủ 37 0C trong

24 giờ

Trang 19

 Thử nghiệm khẳng định:

Thử nghiệm hóa sinh Kết quả Thử nghiệm hóa sinh Kết quả

Trang 20

- Thực hiện phản ứng sinh hóa đặc trưng:

Đặc trưng sinh hóa S.dysenteriae S.flexneri S.boydii S.sonnei

Trang 21

-4.4 Khẳng định bằng thử nghiệm kháng huyết thanh

− Các huyết thanh đa giá được nuôi từ môi trường không chọn lọc, tiến hành các đối chứng (-) với nước muối sinh lý

− Lưu ý: một số Shigella tạo thành kháng nguyên bề mặt (K) che đi kháng nguyên O làm phản ứng ngưng kết không diễn ra, vì thế cần đun sôi dịch vi khuẩn trong khoảng 30 phút để loại bỏ kháng nguyên bề mặt Sau đó tiến hành thử nghiệm ngưng kết

Trang 22

Khuẩn lạc Shigella

Trang 23

5 Báo cáo kết quả

Kết quả được báo cáo dưới dạng phát hiện hay không phát hiện Shigella trong 25 g mẫu.

Shigella là nhóm chứa dòng gây

bệnh nguy hiểm có thể gây triệu

Trang 24

Tài liệu tham khảo

 Bải giảng lỵ trực khuẩn (shigellosis) http://

www.dieutri.vn/bgtruyennhiem/2-11-2012/S2971/Bai-giang-ly-tr uc-khuan-shigellosis.htm

Trang 25

Thank You !

Định dạng
Số trang	25
Dung lượng	4,3 MB