Chuyen gen chua benh vao lua

• Nhóm thực hiệnHuỳnh Lâm Châu Duyên Nguyễn Ngọc Quỳnh Giao Nguyễn Thành Lê Lê Hồng Phúc Nguyễn Cao Phúc Nguyễn Thị Kim Phúc... Một số khái niệm cơ bản- Chuyển gene

VACCINE NGỪA DỊCH TẢ

TỪ CÂY LÚA

• Nhóm thực hiện

Huỳnh Lâm Châu Duyên Nguyễn Ngọc Quỳnh Giao Nguyễn Thành Lê

Lê Hồng Phúc

Nguyễn Cao Phúc

Nguyễn Thị Kim Phúc

I Một số khái niệm cơ bản

- Chuyển gene là gì?

- Mục đích chuyển gene: thêm một thông tin di truyền ngoại lai vào genome, cũng như để ức chế một gen nội sinh

- Nguyên tắc cơ bản: đưa một hoặc vài gen ngoại lai vào động, thực vật

Chuyển gene trực tiếp Chuyển gene gián tiếp

- Qui trình thực hiện:

- Một số phương pháp chuyển gene:

- Nhờ virus và phage

- Nhờ Agrobacterium tumefaciens

• Vaccine truyền thống

II Sản xuất Vaccine từ gạo

• Vaccine đường miệng

II.1 Cơ sở khoa học của vaccine ăn được

- Đã có nhiều kháng nguyên vaccine được sản xuất ở nhiều hệ thống sinh vật.

- Thực vật có thể là phương tiện hữu hiệu nhất để sản xuất vaccine với nhiều ưu điểm:

 Dễ tăng quy mô sản xuất

 Tính ổn định cao, dễ bảo quản, sử dụng

 Ăn được

 An toàn, hiệu quả

 Chi phí thấp

Chọn gene CTB từ vi khuẩn tả Vibrio Choleterae

II.2 Nguyên lý thực hiện

II.2.a Cấu trúc DNA và sự chuyển gene

(A) Gene CTB được biến đổi cho phù hợp

=> Chèn vào binary vector (pGPTV-35S-HPT)

- Chuyển gene bằng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens

• (B) Chọn giống lúa

Kitaake và Hosetsu để

biểu hiện gene CTB

(C) Dùng kĩ thuật PCR để xác nhận sự sát nhập

gene CTB vào DNA -WT: Wild-type lúa không chuyển gene

-Tg: lúa chuyển gene CTB

(D) Dùng phương pháp Northern blot để xác nhận sự biểu hiện của mRNA đoạn mã CTB

II.2.b Phân tích DNA và RNA

(E) Dùng phương pháp Western blot với gel SDS/PAGE cho thấy nồng độ cao protein CTB được biểu hiện (12 – 15 kDa)

II.2.c Phân tích Protein

The CTB protein,composed of two fragments, forms a 55 to 65 kDa pentamer structure under nonreducing conditions Arrows indicate monomeric (under reducing condition) and pentamer (under nonreducing condition) forms of CTB (F).

(A) CTB được lưu trữ trên bề mặt PB-I (arrowheads) and PB-II (arrows)

II.2.d Xử lý với Pepsin

(B) 90% glutelins bị tiêu hoá bởi pepsin trong khi 13k prolamins không bị thay

đổi lớn in vitro, 75% CTB trong gạo không bị ảnh hưởng bởi pepsin

II.2.e Các tế bào tiếp nhận

(A) CTB trong gạo được chuyển vào màng ruột Ba mươi phút sau,CTBs được nhận bởi các tế bào UEA-1-positive M (arrow), chứ không phải là các biểu mô hình trụ

II.2.f Sự miễn dịch qua đường tiêu hoá

II.2.g Thí nghiệm kiểm chứng

(A) Dùng phương pháp GM1 – ELISA đo OD ở bước sóng 450nm cho các loại huyết thanh của chuột:

được cho ăn gạo chuyển gene sử dụng rCTB tinh chế

được cho ăn gạo bình thường được cho ăn PBS

(C) Ngược với chuột thử nghiệm với gạo bình thường hoặcPBS, chuột được miễn dịch với vaccine qua đường tiêu hoá với gene CTB cho thấy không có triệu chứng bị dịch tả và có lượng thấp nước trong ruột.

- Là loại vaccine mới hiệu quả cao

- Chi phí sản xuất thấp, dễ bảo quản

- Giúp ngăn ngừa bệnh dịch tả ở các nước đang phát triển

III Kết luận

Tài liệu tham khảo

- Phạm Thành Hổ, Nhập môn Công nghệ sinh

học NXB Giáo dục

- Hồ Huỳnh Thuỳ Dương, Sinh học phân tử

NXB Giáo Dục.1999

- Ðặng Hữu Lanh, Trần Ðình Miên, Trần Ðình

Trọng Cơ sở di truyền chọn giống động vật

NXB Giáo dục, Hà Nội 1999