Phân tích đánh gias chất lượng thực phẩm (6)

CÔNG NGH NUÔI CẤY T BÀO TR N Khái niệm tế bào trần Tế bào trần Protoplast = tế bào đơn – vách ng dụng tế bào trần • Có khả năng tiếp nhận vật liệu “ngoại lai”: nhân, ti thể, lục lạp

CH NG V

CÔNG NGH NUÔI CẤY

T BÀO TR N

Khái niệm tế bào trần

Tế bào trần (Protoplast) = tế bào

đơn – vách

ng dụng tế bào trần

• Có khả năng tiếp nhận vật liệu “ngoại lai”: nhân, ti thể, lục lạp, plasmids, vi khuẩn và virus

• Có khả năng tái sinh vách tế bào

 Đ i tượng lai tạo gi ng: lai cùng loài, lai khác loài, lai khác giới sinh vật

ng dụng tế bào trần

• Nghiên c u sự

tổng hợp và phân

h y vách tế bào

• Nghiên c u hệ

Nuôi cấy tế bào trần 1) Chọn lựa và khử trùng mẫu cấy;

2) Xử lý enzyme tạo tế bào trần;

3) Tách tế bào trần;

4) Xác định mật độ tế bào trần;

5) (Dung hợp tế bào trần)

1) Chọn và khử trùng mẫu cấy

Khử trùng

Xử lý thẩm thấu bằng manitol hay sorbitol

2) Xử lý enzyme

• Xử lý cơ học

2) Xử lý enzyme

• Xử lý enzyme cellulase, hemi-cellulase,

pectinase, lignase

3) Tách

tế bào trần

3) Tách

tế bào

4) Xác định mật độ

• Nhuộm bằng phẩm nhuộm fluorescein diacetate để đánh giá khả năng s ng sót c a protoplast

4) Xác định mật độ

• Đếm trên buồng đếm hồng cầu để xác định mật độ

5) Dung hợp tế bào trần 6) Nuôi cấy và tái sinh

tế bào trần

• Môi trường nuôi cấy thường ch a 13%

manitol, auxin, cytokinin,…

• Tái tạo vách tế bào

• Phân chia tạo cụm tế bào

Dung hợp t bào tr n và

sự lai vô tính

Các tế bào trần có thể dung hợp

một cách tự nhiên trong quá trình cô

lập

Dung hợp t bào tr n và

sự lai vô tính

Nếu như những tế bào trần được cô lập

từ các nguồn tế bào khác nhau mà được xử

lý để dung hợp thì gọi là lai vô tính

Ph ng pháp dung hợp t

bào tr n

1) Phương pháp xử lý cơ học

2) Phương pháp xử lý bằng nitrate sodium

3) Phương pháp xử lý bằng ion Ca2+ (pH

cao)

4) Phương pháp xử lý bằng Polyethylene

Glycol (PEG)

5) Phương pháp dung hợp bằng xung điện

• Tế bào trần cô lập được gom lại cho nằm gần với nhau nhờ một dụng cụ cầm tay cực

nh và một micropipette

• Một phần c a đầu micropipette được chận lại vì vậy các tế bào trần được giữ lại và được đẩy đi theo dòng chất l ng

• S lượng tế bào dung hợp nhờ phương pháp này rất thấp và vì vậy phương pháp này không thông dụng

nitrate sodium

• Tế bào trần cô lập được đặt trong hỗn hợp

NaNO 3 5,5% trong dung dịch sucrose 10% Giữ

ổn định trong nước ở 35ºC và sau đó đem đi ly

tâm 200 vòng trong 5 phút

• Loại b phần nổi và cho các cụm tế bào vào nước

trong 30 phút Trong su t quá trình này, hầu

hết các tế bào trần sẽ tiến hành dung hợp Các

cụm tế bào được gạn ra sẽ được đưa vào trong

môi trường nuôi cấy có bổ sung 0,1% NaNO 3

ion Ca2+ (pH cao)

• Tế bào trần được ly tâm trong 3 phút ở

t c độ 50 vòng/phút trong môi trường cảm ng sự dung hợp gồm có 0,5M manitol, 0,05M CaCl2.2H2O ở pH 10,5

• Các ng ly tâm có ch a tế bào trần được ngâm trong nước ở 37ºC trong 40-50 phút Sau khi xử lý xong có khoảng 20-50% tế bào trần được dung hợp

Polyethylene Glycol (PEG)

• Dung dịch PEG làm tăng sự kết dính c a tế bào

trần và cảm ng sự dung hợp tế bào trần c a

một s loài thực vật

• Hút 1 ml dung dịch môi trường có ch a tế bào

bằng xung đi n