Cơ sở lý thuyết sắc ký

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ PHÂN LOẠI LƯU GiỮ PHA TĨNH SẮC KÝ CỘT Column chromato-graphy SẮC KÝ PHẲNG planar chromato-graphy BẢN CHẤT VẬT LÝ PHA ĐỘNG SẮC KÝ KHÍ gas chromato-graphy SẮC

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM

NGUYỄN NGỌC HÒA

NỘI DUNG

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

SẮC KÝ LỎNG HiỆU NĂNG CAO -HPLC

SẮC KÝ KHÍ - GC

GIỚI THIỆU CHUNG

VỀ CÁC PHƯƠNG PHÁP

PHÂN TÍCH

CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH

I Phương pháp phân

tích cổ điển

1.Chuẩn độ axit-bazơ

2.Chuẩn độ oxi hóa – khử

3.Chuẩn độ tạo phức

4.Chuẩn độ kết tủa

III Imunoassay (miễn dịch)

1.Phân tích miễn dịch phóng xạ

2.Phân tích miễn dịch enzym

II Phân tích dụng cụ

(Instrumental Analysis

1.Quang phổ

2.Sắc ký

IV Phân tích enzyme

V Phân tích hợp chất sinh học

• Phổ hấp thu

Phổ Hồng ngoại

Phổ UV-VIS

Phổ hấp thu nguyên tử

• Phổ huỳnh quang

• Phổ ghép cặp cảm ứng cao tần

(ICP)

QUANG PHỔ

Tách sóng

Nguồn

bức xạ

Cell đo mẫu

Đầu đò

Xử lý

dữ liệu

Phổ hấp thu

Tách sóng

Nguồn

bức xạ

Cell đo mẫu

Đầu đò

Xử lý

dữ liệu

Phổ phát xạ

Tách sóng

bức xạ phát ra

đò

Xử lý

dữ liệu

Phổ huỳnh quang

Một số thiết bị phân tích

GC-ECD/FP

D

Sắc

ký

khí

Sắc

ký

lỏng

GC-QQQ GC- Q TOF

LC-UV/FLD

LC/Q LC/QQQMRM

TOF Q-TOF

Routine Analysis

Định tính

ICP-OES ICP-MS

Nước mắm

Slide 12

Speciation in

HollyHood

Cr (III) and Cr (VI)

Essential

Toxic



Julia Roberts – Oscar 2001

Chương I CƠ SỞ

LÝ THUYẾT SẮC KÝ

1.1 Khái niệm

1.2 Các tương tác trong quá trình sắc ký

1.3 Các thông số đặc trưng cho quá trình

rửa giải

1.4 Lý thuyết sắc ký 1.5 Độ phân giải RS

1.6 Hệ số không đối xứng

CHƯƠNG 1 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

SẮC KÝ – KỸ THUẬT TÁCH

Mobile phase

Stationary phase

Mobile phase

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

Khái niệm

16

24:00 + 20:00 18:00

Bợm nhậu

Ít nhậu

Không nhậu Tương tác

17:00

Công sở

• Sau giờ làm việc

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

PHÂN LOẠI

LƯU GiỮ PHA TĨNH

SẮC KÝ CỘT

Column

chromato-graphy

SẮC KÝ PHẲNG (planar chromato-graphy

BẢN CHẤT VẬT LÝ PHA ĐỘNG

SẮC KÝ KHÍ (gas chromato-graphy )

SẮC KÝ LỎNG (Liquid chromato-graphy)

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

PHA ĐỘNG

Sắc ký phân bố (Partition Chromatography: PC)

Sắc ký pha thuận (Normal phase: NP-HPLC)

Sắc ký pha đảo (Reverse phase: RP- HPLC),

Sắc ký trao đổi ion (Ion exchange IE-HPLC),

Sắc ký ghép cặp ion ( IP-HPLC);

Mikhail Tsvet

1872 -1919

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

Sắc ký rửa giải trên cột

1903

Đầu dò (Detector) khác nhau

→ ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG

Các chất

Color writing

Sắc ký đồ

Peak sắc ký

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

Sắc ký rửa giải trên cột

Chromatography Chroma & Graphy

Thin Layer Chromatography

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

TƯƠNG TÁC TĨNH ĐiỆN

Lực phân tán London (London Dispersion force)

(non-polar compounds, e.g hydrocarbons)

Lực phân cực

(dipole

Lực phân cực ( Polar force )

(dipole-dipole/dipole-induced dipole)

Lực ion (Ionic force)

CÁC TƯƠNG TÁC TRONG QUÁ TRÌNH SẮC KÝ

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

Lực phân tán

dispersion force

Lực tương tác giữa các hợp chất không phân cực : HC mạch thẳng hoặc nhân thơm

2 molecules interacting and held together

by dispersion force

Interacting plane

Charge fluctuation

Cách thức tương tác

Lực tương tác tăng theo

kích thước phân tử

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

Lực phân cực lực tương tác giữa hai chất bị phân cực

-Tương tác lưỡng cực – lưỡng cực

+

+ Tương tác lưỡng cực cảm ứng:

HO-CH2– CH2– OH phân cực, nếu có benzen vào thì có tương tác lưỡng cực – lưỡng cực cảm ứng

Tương tác lưỡng cực và lưỡng cực

cảm ứng

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

Lực ion Lực tương tác giữa hai tiểu phân mang điện

tích trái dấu nhau

Hai phân tử tương tác với nhau bằng lực ion và lực

phân tán

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

Quy luật cơ bản trong việc chọn lựa pha tĩnh

“ Những chất giống nhau thì có ái lực với nhau”

Tương tác trong quá trình sắc ký

SiO 2 : polar stationary phase

: non-polar stationary phase SiO 2

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

Nguyên tắc cơ bản của quá trình tách các chất

Differential affinities (strength of adhesion) of the

various components of the analyte towards the

stationary and mobile phase results in the differential

separation of the components

Affinity, in turn, is dictated by two properties of the

molecule: ‘Adsorption’ and ‘Solubility’

CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ

Nguyên tắc cơ bản của quá trình tách các chất

• Higher the adsorption to the stationary phase,

the slower the molecule will move through the

column.

• Higher the solubility in the mobile phase, the

faster the molecule will move through the

column.

Affinity

MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ

Technique Stationary phase Mobile phase separation Basis of Notes

Paper

chromatography

solid (cellulose) liquid

polarity of molecules

compound spotted directly on a cellulose paper

Thin layer

chromatography

(TLC)

solid (silica

or alumina) liquid

polarity of molecules

glass is coated with thin layer of silica

on which is spotted the compound

MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ

Technique Stationary phase Mobile phase Basis of separation Notes

Liquid

column

chromatogra

-phy

solid (silica

or alumina) liquid polarity of molecules

glass column

is packed with slurry of silica

MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ

Technique Stationary phase Mobile phase Basis of separation Notes

Size

exclusion

chromatogra

-phy

solid (microporous beads of silica)

liquid size of molecules

there isn’t any interaction, physical or chemical, between the analyte and the

stationary phase

MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ

Technique Stationary phase Mobile phase Basis of separation Notes

Ion-exchange

chromatogra

phy

solid (cationic or anionic resin) liquid

ionic charge

of the molecules

molecules possessing the opposite charge as the resin will bind tightly

to the resin, and

molecules having the same charge

as the resin will flow through the column and elute out first

MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ

Technique Stationary phase Mobile phase Basis of separation Notes

Gas

chromatogra

-phy

liquid or solid support

gas Argon

or Helium

boiling point

of the molecules

Samples are volatilized and the molecule with lowest boiling point comes out of the column first