sơ đồ sản xuất papain

Nhựa đu đủ 180g

Nghiền

Trích ly

6.3g cysteine hydrochloride, 1l NaOH 0.054M Hòa tan

200-300 ml dung dịch

Nhiệt độ phòng

Khi nhựa tạo huyền phù gạn bỏ lớp nổi ở trên

Lọc 300ml dung dịch

Nước lọc

Phần bã

100g celite 150g cát sạch

SƠ ĐỒ THÍ NGHIỆM

Nước lọc

Chỉnh pH

• Khuấy đều

• pH=9.0

Lọc

Có thể thay bằng ly tâm 2600v/phút, t=1h, loại bỏ tủa xám

Kết tủa

(NH4)2SO4 • Thêm (NH4)2SO4 đến

40% độ bão hòa

• T= 1-2h

Ly tâm

Rửa

• 2500v/phút

• Bỏ dịch lỏng, thu lấy tủa

400-500ml (NH4)2SO4

Kết tủa

Ly tâm Kết tinh

Ly tâm

Phần tủa

• Thêm chậm NaCl

• T=1h

• 2500v/phút

• T=1h

• Bỏ dịch lỏng thu tủa 400ml cysteine 0.002M

• pH 6.5

• Giữ ở nhiệt độ phòng

30 phút

• Giữ qua đêm ở 40oC

• 2500v/phút

• T=4-5h

• Thu tủa bỏ dịch lỏng Tinh thể

Tinh thể

Kết tinh lại

C%=1%

• Dd NaCl:dd Protein

= 1:30

• Giữ ở 40oC qua đêm

Dd NaCl bão hòa

Ly tâm

• 2500v/phút

• T=4-5h

• Thu lấy kết tinh

Sấy chân không • Nhiệt độ 40oC

Papain

Hòa tan

Lọc

Dd đệm phosphate chứa cysteine

Màng lọc 4000A0 Dung dịch sau lọc

Quy trình tăng hoạt tính enzyme (có thể thực hiện hoặc không)

Quy trình sản xuất enzyme papain