THỰC HÀNH kỹ THUẬT đổ đĩa

BÀI 3:THỰC HÀNH KỸ THUẬT ĐỔ MÔI TRƯỜNG THẠCH ĐĨA VÀ KỸTHUẬT CẤY THẠCH NGHIÊN, THẠCH ĐỨNG I.. Chuẩn bị, dụng cụ -Đĩa petri đã được thanh trùng -Nước muối sinh lý 0,85%NaCl -Cá -Môi trường

BÀI 3:THỰC HÀNH KỸ THUẬT ĐỔ MÔI TRƯỜNG THẠCH ĐĨA VÀ KỸ

THUẬT CẤY THẠCH NGHIÊN, THẠCH ĐỨNG

I Chuẩn bị, dụng cụ

-Đĩa petri đã được thanh trùng

-Nước muối sinh lý (0,85%NaCl)

-Cá

-Môi trường lỏng: PCA

-Ống nghiệm chứa thạch nghiêng (2 ống), thạch đứng (2 ống)

-Que cấy thẳng, que cấy vòng

-Nguồn vi sinh vật (xanh lá)

-Dụng cụ: đèn cồn, ống nghiệm, pipette, dao, thớt, cân kỹ thuật, đầu coin,

II Phương pháp tiến hành, kết quả, đánh giá kết quả

1 Kỹ thuật đỗ môi trường vào đĩa petri.

 Cách tiến hành:

-Vô trùng các dụng cụ

-Dùng dao cắt và cân 1g thịt cá cho vào 9ml dung dịch nước muối sinh lí, dùng máy lắc đảo đều dung dich, thu được dung dịch có nồng độ là 10-1

-Tiếp tục dùng pipet hút 1ml dung dich có nồng độ 10-1 cho vào ống nghiệm chứa 9ml dung dịch nước muối sinh lí, dùng máy lắc đảo đều dung dịch, thu được dung dịch có nồng độ là 10-2

-Tiến hành đổ đĩa:

 Hút 1ml dung dịch có nồng độ 10-1 cho vào giữa đĩa, sau đó đổ khoảng 15 – 20 ml môi trường PCA vào đĩa, đậy nắp, xoay đĩa theo vòng số 8 khoảng 5 vòng, đợi cho đĩa khô rồi lặt úp đĩa lại

 Hút 1ml dung dịch có nồng độ 10-2 cho vào giữa đĩa, sau đó đổ khoảng 15 – 20 ml môi trường PCA vào đĩa, đậy nắp, xoay đĩa theo vòng số 8 khoảng 5 vòng, đợi cho đĩa khô rồi lặt úp đĩa lại

-Đổ lần lượt cho đến khi hết môi trường, tiến hành đặt đĩa vào tủ ấm để ủ Sau 24h đem ra quan sát

 Kết quả:

Nồng độ 10 -1 :

Nồng độ 10 -2 :

 Đánh giá kết quả:

 Với nồng độ 10-1vi sinh vật rất dày đặc, chúng xếp chồng lên nhau, khó có thể đếm được

 Với nồng độ 10-2 vi sinh vật thưa dần, hiện tượng xếp chồng lên nhau của vi sinh vật được hạn chế, nhưng vẫn chưa đếm chính xác được

 Nên pha loãng thịt cá đến nồng độ 10-4 để đếm chính xác số vi sinh vật trên đĩa

 Một số đĩa bị nhiễm vi sinh vật từ không khí do thao tác sai

2 Kỹ thuật cấy thạch nghiêng, thạch đứng.

 Cách tiến hành:

 Đối với thạch nghiêng: Đốt 2/3 que cấy vòng, đợi cho que cấy nguội, sau

đó chấm que cấy vào nguồn vi sinh vật, cấy nguồn vi sinh vật lên bề mặt thạch (cấy hình chữ Z, từ trong ra ngoài) Ảnh minh họa:

 Đối với thạch đứng: Đốt 2/3 que cấy thẳng, đợi cho que cấy

đứng que cấy vào phần thạch (sâu khoảng ½ độ dày thạch ), đâm

 Kết quả:

Đối với thạch nghiêng:

 Đánh giá kết quả: có thể đếm được số lượng vi sinh vật, một số ống môi trường không nhìn rõ vi sinh vật do bị nhiễm vi sinh vật từ môi trường không khí, thao tác vô trùng chưa chính xác