Bài giảng QUANG PHỔ HẤP THỤ UV-VIS

Ph H p Th UV-VIS ổ ấ ụ Là phương pháp phân tích dùng phổ biến nhất trong các PTN  Ví dụ ứng dụng: PT nước, các màu thực phẩm, acid amin, kháng sinh, kim loại.... Ph H p Th UV-VIS ổ ấ

ĐHKT Y HD - TT KN ATTP

QUANG PHỔ HẤP THỤ UV-VIS

PGS Phạm gia Huệ

Hà Nội 24-11-2010

Ph H p Th UV-VIS ổ ấ ụ

 Là phương pháp phân tích dùng phổ biến nhất trong các PTN

 Ví dụ ứng dụng: PT nước, các màu thực phẩm, acid amin,

kháng sinh, kim loại

Ph H p Th UV-VIS ổ ấ ụ

 Các đại lượng đặc trưng cho bức xạ ánh sáng

 Sự hấp thụ ánh sáng và màu sắc

 Các yếu tố ảnh hưởng lên độ hấp thụ

 Các ứng dụng của phương pháp phổ hấp thụ UV-Vis

 Máy quang phổ UV-VIS

Bức xạ ánh sáng UV-V IS

Các yếu tố ảnh hưởng lên độ hấp thụ.

Định tính b ằ ng ph UV-VIS ổ

Max 1

Max 2

Max 3

Đ nh l ị ượ ng b ằ ng ph UV-VIS ổ

 Định lượng ngay (đo A, tính C)

 Chuẩn bị, xử lý mẫu (chiết, làm phản ứng ) trước khi đo A

 Tách bằng sắc ký hay điện di rồi phát hiện và đo bằng phổ hấp thụ (phổ VIS dùng làm detector cho máy sắc ký, điện di)

UV- Nguyên tắc: dựa vào định luật Lambert-Beer

nh lu t Lambert-Beer

A = kλ L C

Hệ số hấp thụ kλ

kλ=ε = hệ số hấp thụ mol nếu C = Cmol/L

kλ=E1%1cm=hệ số hấp thụ riêng nếu C = C%

Các kỹ thuật định lượng

 Đo phổ trực tiếp

 Phương pháp so sánh:

 Phương pháp thêm

 Phương pháp đường chuẩn

 Phương pháp đường chuẩn thêm

Các kỹ thuật định lượng

Phương pháp đo trực tiếp :

Đo A của dung dịch, tính C

dựa vào A = kλ L C

(biết L= 1 cm và biết kλ: VÍ DỤ với vitamin B12, đo ở 361 nm thì E11=207, t ính C%)

Cần kiểm tra độ chính xác của A và λ

Các kỹ thuật định lượng

Phương pháp so sánh:

 Đo AC của dd chuẩn có nồng độ đã biết CC

 Đo AX của dd thử có nồng độ chưa biết CX

 Tính được CX

Các kỹ thuật định lượng

Phương pháp đường chuẩn

Các kỹ thuật định lượng

Phương pháp đường chuẩn thêm

Máy quang phổ UV-VIS

 Detector: nhân quang

 Cốc đo (cuvet): thuỷ tinh, nhựa, quartz

Máy quang phổ UV-VIS

Máy quang phổ UV-VIS

1 chùm tia (detector DAD)

Nguồn sáng

Cuvet

Mảng diod

Máy quang phổ UV-VIS

Điều cần chú ý !!!

 Máy cần được thường xuyên bảo dưỡng

định kỳ hiệu chuẩn (KT A và bước sóng)

 Dung dịch đo phải trong suốt, đủ loãng A trong khoảng thích hợp

 Cuvet

 Dung môi tinh khiết, pH, thời gian đo

 Mẫu trắng