QUY TRÌNH NUÔI TẢO 1. Trang thiết bị. Đĩa petri ống nghiệm, bình tam giác, chai thủy tinh 2 lít, đá bọt, đá sứ, đèn cồn, bình xịt cồn, cồn 70o, 90o, thùng 20 lít, ống dẫn, máy bơm, máy khí, van khí, dây sục khí. 2. Môi trường nuôi cấy. Sử dụng môi trường Walne Dung dịch 1 NaNO3 216 gr H3BO3 33.6 gr NaH2PO4 20 gr Na2EDTA 45 gr FeCl3 . 6 H2O 1.3 gr MnCl2 . 4 H2O 0.36 gr CuSO4. 5 H2O 0.5 gr ZnCl2 0.5 gr CoCl2 . 6 H2O 1 gr Dung dịch 2 Thiamin (B1) 0.2 gr Riboflavin (B12) 0.1 gr Dung dịch 3 Na2SiO3.9H2O 20 gr Mỗi dung dịch pha trong 1lít nước ngọt. Sử dụng với tỷ lệ 11000 (1mL dung dịch mỗi loại cho 1 lít nước) trong phòng thí nghiệm. Sử dụng với tỷ lệ 110000 khi nuôi sinh khối.
Trang 1QUY TRÌNH NUÔI TẢO
1 Trang thiết bị.
- Đĩa petri ống nghiệm, bình tam giác, chai thủy tinh 2 lít, đá bọt, đá sứ, đèn cồn, bình xịt cồn, cồn 70o, 90o, thùng 20 lít, ống dẫn, máy bơm, máy khí, van khí, dây sục khí
2 Môi trường nuôi cấy.
Sử dụng môi trường Walne
Dung dịch 1
Dung dịch 2
Trang 2
Dung dịch 3
Mỗi dung dịch pha trong 1lít nước ngọt Sử dụng với tỷ lệ 1/1000 (1mL dung dịch mỗi loại cho 1 lít nước) trong phòng thí nghiệm Sử dụng với tỷ lệ 1/10000 khi nuôi sinh khối
3 Kỹ thuật nuôi cấy.
3.1 Nguồn nước:
Nước biển độ mặn :28-30 ‰ pH 7,5 - 8.5
Nước biển được lọc cơ học qua bể lọc cát, sau đó được xử lý chlorine nồng
độ 30 ppm, có sục khí mạnh liên tục 24 giờ sau đó tiến hành xử lý thuốc tím với nồng độ 1ppm sau 48g trung hoà bằng Natrithiosunphat (Na2S203) từ từ cho đến hết Chlorine, có thể xử lý Iodin nồng độ 0.5ppm trong khoảng 24 - 28 giờ, tắt sục khí để lắng12 giờ sau đó cấp vào bể chứa qua túi siêu lọc
3.2 Vệ sinh:
Ống nghiệm, bình tam giác, chai 2 lít, đá sứ, dây khí được ngâm trong axit HNO3 loãng, sau đó rửa sạch bằng nước ngọt (đã xử lý), để ráo nước Dụng cụ được vô trùng bằng nhiệt (autoclave) trước khi sử dụng
Thùng 20l, thùng 220l, bể 600l rửa bằng xà phòng, rửa sạch bằng nước ngọt (đã xử lý), trước khi sử dụng rửa lại bằng nước mặn (đã xử lý)
Trước khi làm việc thì phải vệ sinh tay, dụng cụ, bàn làm việc bằng cồn
Trang 33.3 Kỹ thuật nuôi cấy:
Nuôi trong phòng thí nghiệm.
Tảo giống Thalassiothrix và Chaetoceros thuần chủng được cung cấp từ
phòng vi tảo của trường ĐH Nha Trang
Tảo được nuôi trong ống nghiệm, bình tam giác, chai 2 lít, thùng 20 lít
Tảo gốc được bảo trong môi trường bán lỏng, môi trường thạch ở nhiệt độ
và cường độ ánh sáng thấp
- Cách làm:
Lấy 8000ml nước biển độ mặn : 28-30 ‰ pH 7,5 - 8.5, sau đó cho môi trường vào 8ml mỗi loại/ 8000ml nước, lắc kỹ cho môi trường được hòa tan đều Chú ý dung dịch 3 phải pha loãng với nước ngọt trước khi cho vào nước mặn để tránh bị kết tủa
+ Nuôi ống nghiệm:
Mở nắp ống nghiệm (đã tiệt trùng) hơ trên ngọn đèn cồn
Cho 10mL nước biển đã có môi trường vào ống nghiệm, hơ trên ngọt đèn cồn, đậy nắp hơ que cấy trên ngọn đèn cồn, để nguội sau đó lấy tảo trong đĩa cho vào ống nghiệm, hơ trên ngọt đèn cồn, đậy nắp, ghi nhãn: tên loại tảo, ngày tháng sản xuất, lắc đều rồi cho vào giá đựng ống nghiệm
Cho 10mL nước biển đã có môi trường với 2mL tảo giống vào ống nghiệm, hơ trên ngọt đèn cồn, đậy nắp, lắc đều, ghi nhãn: tên loại tảo, ngày tháng sản xuất rồi cho vào giá đựng ống nghiệm
Ánh sáng 24/24H
Trong quá trình nuôi thường xuyên lắc đều các ống nghiệm, theo dõi sự phát triển của tảo, quan sát hình dạng, màu sắc của tảo…
Thời gian nuôi từ 2- 3 ngày thì ta có thể cấy chuyền sang bình tam giác + Nuôi tảo trong bình tam giác 250mL
Chọn những ống nghiệm đẹp để làm tảo giống nuôi trong bình tam giác
Mở nắp giấy bạc hơ bình tam giác (đã tiệt trùng) trên ngọn đèn cồn
Trang 4Cho khoảng 160mL nước biển ( đã cho môi trường) vào bình tam giác sau
đó cho 2 ống nghiệm tảo vào, hơ trên ngọn đèn cồn, đậy nắp giấy bạc vào, lắc đều ghi nhãn: tên loại tảo, ngày tháng sản xuất rồi để trên dàn cấy
Tất cả các thao tác phải thực hiện nhanh và hơ trên ngọn đèn cồn tránh hiện tượng nhiễm khuẩn từ bên ngoài không khí
Trong quá trình nuôi thường xuyên lắc đều các bình tam giác, theo dõi sự phát triển của tảo, quan sát hình dạng, màu sắc của tảo…
Ánh sáng 24/24H
Thời gian nuôi từ 2- 3 ngày thì ta có thể cấy chuyền sang chai 2l
+ Nuôi tảo trong chai 2 lít:
Cho 1600mL nước biển vào chai 2 lít, gắn dây sục khí, cho 2ml môi trường mỗi loại, sau đó cho 2 bình tam giác tảo vào, ghi nhãn: tên loại tảo, ngày tháng sản xuất rồi để trên dàn cấy
Trong quá trình nuôi thường xuyên kiểm tra sự phát triền của tảo, theo dõi các chỉ tiêu như: nhiệt độ, ph… , quan sát hình dạng, màu sắc của tảo
Ánh sáng 24/24H
Thời gian nuôi từ 2- 3 ngày thì ta có thể cấy chuyền sang thùng 20l + Nuôi tảo trong thùng 20 lít:
Cho 16 lít nước biển vào thùng 20 lít, gắn dây sục khí, cho 20ml môi trường mỗi loại, sau đó cho 1 chai tảo 2 lít vào, ghi nhãn: tên loại tảo, ngày tháng sản xuất
Ánh sáng 24/24H
Trong quá trình nuôi thường xuyên kiểm tra sự phát triền của tảo, theo dõi các chỉ tiêu như: nhiệt độ, ph… , quan sát hình dạng, màu sắc của tảo
Thời gian nuôi từ 2- 3 ngày thì ta có thể cấy chuyền sang thùng 20l
Nuôi sinh khối:
+Thùng 220l
Cho 160 lít nước biển vào thùng 220 lít đã được rửa sạch , phơi nắng kỹ, gắn dây sục khí, cho 20ml môi trường mỗi loại, sau đó cho 2 thùng tảo 20 lít
Trang 5(tảo đẹp về hình dạng, màu sắc…)vào thùng 220 lít, ghi nhãn: tên loại tảo, ngày tháng sản xuất
Ánh sáng 24/24H
Trong quá trình nuôi thường xuyên kiểm tra sự phát triền của tảo, theo dõi các chỉ tiêu như: nhiệt độ, ph… , quan sát hình dạng, màu sắc của tảo
Thời gian nuôi từ 2- 3 ngày thì ta có thể cấy chuyền sang bể 600l hoặc bể 1,5m3
+ Bể 600l và 1,5m3
Cho 400 lít nước biển vào bể 600 lít, gắn dây sục khí, cho 50ml môi trường mỗi loại, sau đó cho 100 lít tảo từ thùng 220 lít (tảo đẹp về hình dạng, màu sắc…) vào bể 600 lít, ghi nhãn: tên loại tảo, ngày tháng sản xuất
Cho1,0m3 nước biển vào bể 1,5m3 lít, gắn dây sục khí, cho 140ml môi trường mỗi loại, sau đó cho 200 lít tảo từ thùng 220 lít vào bể 600 lít, ghi nhãn: tên loại tảo, ngày tháng sản xuất
Trong quá trình nuôi thường xuyên kiểm tra sự phát triền của tảo, theo dõi các chỉ tiêu như: nhiệt độ, ph… , quan sát hình dạng, màu sắc của tảo
Thời gian nuôi từ 2- 3 ngày khi tảo trong bể nuôi sinh khối đạt mật độ khoảng 350.000 – 4500.000tb/mL hoặc bằng mắt thường ta thấy tảo có màu nâu đậm là có thể thu cho ấu trùng tôm ăn được Kiểm tra tảo trước khi cho tôm ăn , những bể tảo nào không đẹp thì xả bỏ