bao cao shpt docx

TR ƯỜ NG Đ I H C CÔNG NGHI P TP HÔỒ CHÍ MINH Ạ Ọ Ệ

VI N CÔNG NGH SINH H C – TH C PH M Ệ Ệ Ọ Ự Ẩ

B MÔN SINH H C PHÂN T Ộ Ọ Ử

ĐềỒ tài: Tách chiềết DNA th c v t ự ậ

NHÓM 7

GVHD: TrầỒn HồỒng B o Quyền ả

1 LÝ DO CH N ĐỀỒ TÀIỌ

 Tách chiềết DNA là rầết cầỒn thiềết b i trong cồng ngh di truyềỒn : kĩ thu t DNA tái t h p, ở ệ ậ ổ ợ

chuy n gen, k thu t phần tích acid nucleic đềỒu s d ng đềến DNA ể ỹ ậ ử ụ

 Tách chiềết DNA th c v t l i càng có vai trò l n trong vi c t o ra nh ng giồếng cầy ự ậ ạ ớ ệ ạ ữ trồỒng chuy n gen có năng suầết, giá tr dinh d ể ị ữơ ng và d ựợ c tính cao…

Phần lo i và xác đ nh đ ạ ị ựơ c m c đ đa d ng c a quầỒn th th c v t… ứ ộ ạ ủ ể ự ậ

2 Nguyền tăếc k thu t chung:ỹ ậ

2.1.Quy trình tách DNA

• Phá v thành xenlulose, gi i phóng các tp bền trong tềế bào.ỡ ả

• Phá v màng nhần gi i phóng DNA đồỒng th i dùng hóa chầết đ b o v DNA ỡ ả ờ ể ả ệ

• Lo i b protềin và các t p chầết ra kh i DNA ạ ỏ ạ ỏ

• Thu hồỒi DNA.

• Hòa tan DNA

3 ng d ng: Trích ly và khuềếch đ i DNA t b t nghỨ ụ ạ ừ ộ ệ.

3.1 Vai trò c a cầy ngh trong cu c sồếng ủ ệ ộ

Ngh là m t gia v tồết ệ ộ ị

Là m t cầy có nhiềỒu chầết dinh d ộ ữơ ng nh protein, chầết béo, chầết s … ư ơ

 nhiềỒu d ựơ c tính khác nh kháng viềm, kháng sinh Đ c bi t là curcumin có tác d ng chồếng ung th ư ặ ệ ụ ư

3.2 VAI TRÒ TÁCH DNA TRONG NGHIỀN C U Ứ

Tách và cồ l p DNA dùng trong ph n ng khuềếch đ i nh n d ng loài ngh t đó xác đ nh đ tinh ậ ả ứ ạ ậ ạ ệ ừ ị ộ

khiềết và ồ nhi m c a b t ngh vì: ễ ủ ộ ệ

B t ngh gi có hàm l ộ ệ ả ựơ ng curcumin thầếp.

L n nhiềỒu t p chầết đ c có h i cho s c kh e con ng ẫ ạ ộ ạ ứ ỏ ừơ i

3.2 V T LI U - QUY TRÌNH Ậ Ệ

3.2.1 V T LI U Ậ Ệ

B t m u Curcuma longa( ngh vàng) ộ ẫ ệ

 B t m u Curcuma zedoaria(ngh đen) ộ ẫ ệ

B t ngh mua t th tr ộ ệ ừ ị ừơ ng

3.2 Quy trình tách DNA t b t ngh ừ ộ ệ

(Quá trình tách chiềết DNA t b t ngh đ ừ ộ ệ ựơ ặ ạ c l p l i 2 lầỒn)

Cần n ng m i m u 2gặ ỗ ẫ

3.2.1.QUÁ TRÌNH CHIỀếT TÁCH DNA LÂỒN 1 Ớ

3.2.1.1 Phá v màng nhần gi i phóng DNA đồỒng th i dùng hóa chầết đ b o v DNA ỡ ả ờ ể ả ệ :

Hòa tan b t v i 10ml đ m CTAB 3% có ch a β- mercaptoethanol 0,3% ộ ớ ệ ứ

3.2.1.2 Lo i b protềin và các t p chầết ra kh i DNA ạ ỏ ạ ỏ :

Ủ trong 2h 60 đ sau đó lăếc đềỒu ở ộ

 Thềm 3ml dung d ch gồỒm phenol: cloroform: isoamylalcohol (25:24:1) và 7ml dung d ch ị ị cloroform : isoamylalcohol (24:1).

 Kềết h p v i ngh ch đ o trong 15 phút.ợ ớ ị ả

 Ly tầm 8,000.g trong 15 phut 4ở 0C

 Chuy n phầỒn d ch trền sang ồếng oakridge s ch sau đó thềm isopropanol l nh v i th tích ể ị ạ ạ ớ ể

băỒng 2/3 th tích m uể ẫ

3.1.2.3.Thu hồỒi DNA và RNA

 m u -20Ủ ẫ ở 0C trong 2h đ t a DNA.ể ủ

 R a t a DNA băỒng ethanol 70%.ử ủ

 Làm khồ kềết t a và hòa tan trong nủ ứơc cầết vồ trùng 2 lầỒn

3.2.2.QUÁ TRÌNH LO I B RNA VÀ CHIỀếT TÁCHẠ Ỏ

DNA LÂỒN 2Ớ

Thềm 10µ/ml RNAase và 37ủ ở 0C trong 1h

 Thềmphenol:cloroform:isoamylalcohol (25:24:1) trong 15 phút,tiềếp theo đem ly tầm ủ 1,000.g trong 15 phút 4ở 0C g n DNA và l p l i tách chiềết DNA m t lầỒn n a.ạ ặ ạ ộ ữ

3.2.2.1 Lo i b t p chầết lầỒn 2ạ ỏ ạ

 Lầếy phầỒn d ch ch a DNA và thềm cloroform : isoamylalcohol (24:1).ị ứ

Ly tầm 10,000.g 4ở 0C.

 lầếy phầỒn d ch nị ước và thềm ethanol 100% và gi -20ữ ở 0C trong 2h đ t a DNA.ể ủ

 R a t a băỒng cồỒn 70% đ lo i b muồếi rồỒi hòa tan trong nử ủ ể ạ ỏ ước cầết vồ trùng 2 lầỒn

 Thềm 200µl- 500µl PEG 8000 30% vào DNA m u và gi nhi t đ phòng trong 30 ẫ ữ ở ệ ộ phút

 Ly tầm 14,000.g trong 15 phút

3.2.2.2 Thu hồỒi và b o qu n DNA ả ả

 L c lầếy t a rồỒi r a băỒng cồỒn 80%,làm khồ t a và hòa tan trong đ m Tris – EDTA ọ ủ ử ủ ệ (10:1)

 b o qu n m u -20ả ả ẫ ở 0C

3.3 Kềết qu tách DNAả

 Đo quang ph c a các m u DNA t i 260 và 280 nm cho m t t l hầếp th (A260 ổ ủ ẫ ạ ộ ỷ ệ ụ

\ A280) c a 1,82 -1,91 ch đ tinh khiềết cao.ủ ỉ ộ

 The DNA c a t ng DNA đủ ổ ược phần l p t b t ngh sầếy khồ cũng đậ ừ ộ ệ ược ki m tra ể băỒng đi n di gel agarose Agarose gel đi n c a m u DNA cho thầếy băng DNA rõ ệ ệ ủ ẫ nét ,d thầếy , tr ng lễ ọ ượng phần t kho ng 22.000 bp ử ả

: Lane 1-Curcuma longa Lane 2-cầt ngh zedoaria, ệ Lane3-th trị ường m u 1, ẫ Lan 4-Th trị ường m u 2, ẫ ngõ 5 - m u th trẫ ị ường

Hình đi n di m u nghiền c u ệ ẫ ứ

 : M u 1 - Th trẫ ị ường Eco RI Hind III tăng gầếp đồi tiều hóa

 M u 2-Curcuma longa Lane.ẫ

 M u 3-cầt ngh zedoaria ngõ ẫ ệ

 M u 4-Th trẫ ị ường m u 1 ẫ

 M u 5-th trẫ ị ường m u 2, ẫ

 M u 6-th trẫ ị ường m u 3ẫ

Hình đi n di m u nghiền c u ệ ẫ ứ

: M - Marker sinh thái R 1 Hind III tăng gầếp đồi tiều hóa.

M u 1-Curcuma longa, ngõ M u 2-Curcuma ẫ ẫ zedoaria, M u 3-th tr ẫ ị ườ ng m u 1, ẫ

M u 4-Th tr ẫ ị ườ ng m u 2 M u 5-th tr ẫ ẫ ị ườ ng

m u 3 ẫ Các mũi tền cho biềết C zedoaria băng c th ụ ể

Hình đi n di m u nghiền c u ệ ẫ ứ

4 KỀếT LU NẬ

Tách chiềết DNA thành cồng có đ tinh khiềết và đ tinh s ch cao s ộ ộ ạ ẽ quyềết đ nh thành cồng trong các bị ứơc tiềếp theo c a cồng ngh di ủ ệ truyềỒn

 Đ c bi t tách chiềết DNA th c v t thành cồng đã t o đặ ệ ự ậ ạ ựơc nh ng ữ giồếng cầy mà cồng ngh di truyềỒn truyềỒn thồếng khồng làm đệ ựơc

The end