Kỹ Thuật Nuôi Cấy Sơ Cấp Tế Bào Động Vật.pdf

Kỹ thuật nuôi cấy sơ cấp tế bào động vật Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên Khái niệm Nuôi cấy sơ cấp (primary culture) là quá trình nuôi tế bào trực tiếp từ mô trước lần cấy chuyền đầu tiên (subculture[.]

Kỹ thuật nuôi cấy sơ cấp

tế bào động vật

Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên

Khái niệm

Nuôi cấy sơ cấp (primary culture) là quá trình nuôi tế bào trực tiếp từ mô trước lần cấy chuyền đầu tiên (subculture) Sau đó, việc nuôi cấy được gọi là thứ cấp (secondary culture)

Hai kiểu nuôi cấy sơ cấp

KIỂU 1: NUÔI CẤY MẢNH

MÔ SƠ CẤP

Là việc nuôi cấy các mảnh

mô in vitro Trong quá trình

nuôi cấy, các tế bào từ mảnh

mô sẽ phát triển lan ra từ

vùng mô trung tâm

KIỂU 2: NUÔI CẤY SƠ CẤP HUYỀN PHÙ TẾ BÀO ĐƠN

Là việc nuôi cấy các tế bào đơn được tách ra từ mảnh mô Trong quá trình nuôi, từng mỗi

tế bào sẽ phát triển tăng sinh thành nhiều tế bào mới

NUÔI CẤY MẢNH MÔ SƠ CẤP (mảnh mô ung thư vú)

Thu nhận tế bào đơn nhân tủy xương chuột

NUÔI CẤY SƠ CẤP HUYỀN PHÙ

TẾ BÀO ĐƠN (thu từ máu cuống rốn)

Nuôi cấy

Xử

lí m

ẫu

Nuôi cấy tế bào đơn:

Tách mô thành tế bào đơn Nuôi cấy mảnh mô:Cố định mảnh mô

Thu nhận mẫu

Quy trình nuôi cấy sơ cấp

Thu nhận mẫu

• Các mẫu thu nhận có thể bao gồm bất kì mô sống nào của cơ thể.

• Trước hết phải làm sạch mô tại vị trí lấy mẫu bằng cồn, cho mô vào dung dịch PBS, nhanh chóng chuyển về phòng thí nghiệm.

• Tùy loại mẫu mô cũng như thời gian cần thiết vận chuyển về phòng thí nghiệm: có kế hoạch vận chuyển chúng trong điều kiện thích hợp.

Xử lí mẫu đối với nuôi cấy huyền phù

tế bào đơn

Các tế bào động vật trong khối mô liên kết chặt chẽ với nhau nhờ các cầu nối hình thành giữa các tế bào với nhau

Biện pháp:

– (1) tác dụng một lực cơ học để bẻ gãy những cầu nối

– (2) dùng enzym để phân hủy các cầu nối nói trên

Cắt nhuyễn

Ép nhuyễn

Tách bằng màng lọc

Biện pháp

cơ học

Phương pháp cắt nhuyễn

Sử dụng lục sơ học bẻ gãy các cầu nối liên bào: dùng kéo, dao cắt nhuyễn các mảnh mô

Huyền phù vào dịch PBS, để lắng, thu dịch trong

Phương pháp ép nhuyễn

Ép nhuyễn mô: dùng 2 phiến lame

ép chặt mảnh mô để thu tế bào đơn đối với những mô có liên kết yếu.

Phương pháp tách bằng màng lọc

Tách bằng màng lọc tế bào (Cell

strainer): kích thước lỗ trên màng

từ 70–100 µm, chỉ cho những tế

bào đơn có kích thước tương ứng

qua màng.

Tải bản FULL (32 trang): https://bit.ly/3z5lEJx

Dự phòng: fb.com/TaiHo123doc.net

Tách mô thành tế bào đơn bằng enzym

Tải bản FULL (32 trang): https://bit.ly/3z5lEJx

Dự phòng: fb.com/TaiHo123doc.net

Quy trình trypsin ấm

4030972