TT HÓA SINH ĐẠI CƯƠNG

Trong mt kiềm, các chất chứa từ hai liên kết peptide trở lên sẽ tạo phức chất màu tím hồng với Cu ++ (muối.. đồng).[r]

BÀI 1: THỰC NGHIỆM VỀ PROTEIN

I CÁC PHẢN ỨNG MÀU

1 Phản ứng biure

Trong mt kiềm, các chất chứa từ hai liên kết peptide trở lên sẽ tạo phức chất màu tím hồng với Cu++ (muối đồng)

Cơ chế phản ứng:

a Nguyên lý:

Protein tạo phức chất màu tím với đồng trong mt kiềm

b Ứng dụng

màu tím So màu: màu càng đậm, càng nhiều protein

c Cỏch làm

+ ố 1: cho kho ng 0,1g ure un trên ngọn lửa đèn ả Đ

cồn đế n khi ure nóng ch y; để nguội s đ ợc ả ẽ

2 Phản ứng xantoprotein

a Nguyên lý:

m«i tr êng kiÒm m¹nh thì dÉn xuÊt nµy sÏ t¹o thµnh muèi cã

Cho ti p vào mỗi ống 1 ml HNO ế 3 đặc , đun trên

đèn cồn, đến khi xuất hiện màu vàng Sau khi ể đ

nguội, cho từ từ từng giọt NaOH 20% (kho ng 1-2 ả ml) cho đến khi xuất hiện màu vàng da cam.

Nhận xét và gi i thích kết qu ả ả

c Ứng dụng

- Ph¸t hiÖn protein trong vËt phÈm

- KiÓm tra chÊt l îng protein

Lµm mÊt ®iÖn tÝch cña protein b»ng c¸ch :

sè c¸c protein ë d¹ng l ìng cùc, kh«ng mang ®iÖn tÝch

cña protein

Lµm mÊt líp vë thñy hãa b»ng c¸ch :

Thªm c¸c chÊt háo n íc nh r îu etylic, tanin…

Hai loại biến tớnh:

+ Thuận nghịch: dd dịch keo có thể trở lại trạng thái ban

đầu sau khi khử tác nhân đi Thuộc loại biến đổi này gồm

có các ph/ứng: ph/ứng diêm tích, tác dụng nhẹ của cồn,

axeton ở nhiệt độ thấp

+ Không thuận nghịch: protein bị biến đổi hoàn toàn, bị hủy hoại, mất tính hòa tan trong n ớc Thuộc loại biến đổi này gồm: ph/ứng gây sa lắng bởi các muối kim loại nặng,

ph/ứng của các alkaloit, acid hoặc kiềm mạnh, đun sôi

1 Phản ứng diờm tớch

a Nguyên lý

- Diêm tích là ph ơng pháp dùng các muối nh : NaCl,

Nguyên nhân kết tủa là do các tiểu phần protein bị trung hòa

nồng độ muối khác nhau Vỡ vậy có thể tách riêng các protein

ra khỏi hỗn hợp

- VD globulin có KLPT lớn hơn albumin, trong n ớc globulin tích

điện (-) ít hơn albumin, globulin bị kết tủa ở nồng độ amoni

sulfat bán bão hòa, còn albumin kết tủa ở nồng độ bão hòa

b Tiến hành

đ ợc dd bán bão hòa, globulin bị sa lắng, để 5 phút, lọc

sang ố.2

c ứng dụng

Kết tủa bằng cách này các protein không bị biến tính

Dùng ph ơng pháp này để chiết suất các protein hoạt tính

2 Sa l¾ng b»ng cån

a Nguyªn lý

- Protein bÞ kÕt tña b«ng hoÆc vÈn trong dung m«i h/c¬ nh  : cån, aceton, eter, Do protein bÞ mÊt líp vá thñy hãa

- Tña cµng dÔ nÕu cã thªm NaCl

- KÕt tña b»ng cån cã thÓ lµ kÕt tña thuËn nghÞch nÕu tiÕn

cån mét c¸ch nhanh chãng

b TiÕn hµnh

Cho vµo mçi èng 1 ml dd lßng tr¾ng trøng

3 Sa lắng bởi nhiệt độ cao

a Nguyên lý

phân tử, mất lớp vỏ thủy hóa nên mất tính hòa tan và bị

ờng kiềm mạnh, hoặc acid mạnh), protein vẫn ở trạng thái tích điện nên không bị đông vón mà ở dạng dung dịch

b Tiến hành

Lấy 5 ống, cho vào mỗi ống 2 ml dd lòng trắng trứng

+ ống 1: đun sôi, theo dõi sự kết tủa

+ ống 2: thêm 1 giọt a acid 1% để tạo điểm đẳng điện, đun sôi.+ ống 3: thêm 0,5 ml a acid 10%, đun sôi

+ ống 4: thêm 0,5 ml NaOH 10%, đun sôi

+ ống 5: thêm 0,5 ml a.acid 10%, 3-4 giọt NaCl bão hòa, đun sôi

c ứng dụng

Bài 2: THỰC NGHIỆM VỀ ENZYME

1 Thuû ph©n tinh bét bëi amylase

a Nguyªn lý

bëi lk  - 1,4 glycoside vµ -1,6 glycoside TB kh«ng cã nhãm

aldehyde tù do , nên không cho phản ứng tromer dương tính

Nước bọt có amylase, maltase thủy phân TB cho ra các đường

đơn glucose cho phản ứng tromer dương tính

b Tiến hành

phút, khẽ cử động l ỡi để trộn đều n ớc bọt với n ớc cất, rồi cho

- Lấy 2 ống nghiệm

+ ống A: cho 3 ml TB 1%, 2 ml dd amylase (ống TN)

quả

2 nh h ởng của nhiệt độ Ả

a Nguyên lý

Phần lớn các enzyme có hoạt lực mạnh ở thân nhiệt Nếu nhiệt độ quá thấp thỡ enzym sẽ hoạt động rất yếu, ngựơc lại nếu nhiệt độ cao thỡ enzyme sẽ bị tê liệt và bị huỷ hoại

b Tiến hành

Lấy 3 ống nghiệm

+ ống 1: cho 1 ml ddamylase, ngâm vào chậu n ớc đá 15 ’

+ ống 2: cho 1 ml dd amylase, đun sôi , để nguội

+ ống 3: cho 1 ml ddamylase

Sau đó cho mỗi ống 1 ml dd tinh bột 1% lắc đều, để yên

3 Tác dụng đặc hiệu

a Nguyên lý

Amylase và sucrase là 2 enzyme th/phân lk glycoside, nh ng amylase chỉ th/phân lk , 1-4 glycoside của tinh bột, còn sucrase chỉ th/phân lk , 1-2 glycoside của sucrose

b Tiến hành

Lấy 4 ống nghiệm

+ ống 1: cho 1 ml dd tinh bột 1%, 1 ml dd amylase

+ ống 2: cho 1 ml dd sucrose 1%, 1 ml dd amylase

+ ống 3: cho 1 ml dd sucrose 1%, 1 ml dd sucrase (men bia)+ ống 4: cho 1 ml dd tinh bột 1%, 1 ml dd sucrase

4 nh h ởng của pH Ả

a Nguyên lý

Mỗi loại enzyme có một pH tối u trong hđộng, VD pepsin có hoạt

đến trạng thái ion hóa của enzyme

b Cách tiến hành

Lấy thật chính xác vào các ống nghiệm đánh số

từ 1- 8 theo chỉ dẫn d ới đây:

Lắc đều, để 10 rồi thử bằng ph/ứng Tromer, cho biết kết quả và nhận xét.’

Phản ứng Tromer Nguyên lý

-

Đun sôi, quan sát thấy màu sắc biến đổi

Chú ý: Không cho nhiều sulffat đồng