MICROARRAY NHOM8 (1)

Trừ một vài ngoại lệ thì mọi tế bào sống trong cơ thể chưa hệ gen đồng nhất và bộ nhiễm sắc thể đầy đủ. Chỉ một phần nhỏ những gen này được bật, tuy nhiên nó biểu thị tính đặc trưng của mỗi loại tế bào. Sự biểu hiện gen là một quá trình chặt chẽ và phưc tạp cho phép tế bào trả lời những kích thích của môi trường và những nhu cầu thay đổi của chính mình.

HOC VI N NÔNG NGHI P VI T NAM Ê Ê Ê

KHOA CÔNG NGH THƯC PHÂM Ê

ĐỀ TÀI: MICRO-ARRAYS

GVHD: Nguyễn Thị Lâm Đoàn

MICROARRAYS (BẢN MẪU DÒ)

DANH SÁCH THÀNH VIÊN NHÓM: 08

6 Nguyễn Thị Thu Thảo K62CNTPC 621007

7 Nguyễn Thị Thu Thảo K63CNTPB 636275

8 Trần Thị Thanh Thảo K63CNTPA 636174

10 Đoàn Thị Thu Thủy K62CNTPA 620871

GIƠI THI U LICH SƯ RA ĐƠI Ê

KHÁI NI M Ê

CẤU TẠO VÀ PHÂN LOẠI

NGUYÊN LY

QUÁ TRINH THƯC HI N Ê

ỨNG DỤNG VÀ TRIỂN VONG

MICROARRAY (BẢN MẪU DÒ)

GIƠI THI U LICH SƯ RA ĐƠI Ê

- Ra đời năm 1990, phát triển mạnh mẽ từ năm 1995 và bùng nổ trong thời gian gần đây.

- Ky thu t này là sư kêt hơp của các phát minh vê: DNA, FISH, blot, blot ngươc, đánh dâu huỳnh quang đa â màu, giá thể không thâm, tổng hơp mẫu dò insitu, robot

GIƠI THI U LICH SƯ RA ĐƠI Ê

Quá trinh phát triển của ky thu t di truyên â

KHÁI NI M Ê

- Microarrays là m t giá thể răn, ơ trên găn các mẫu dò (ô vi có thể găn tới hàng chục ngàn mẫu dò trên vài cm vuông nên gọi là micro), sau đó người ta lai các trinh tư đích đã đánh dâu với mảng này (giá thể + mẫu dò) và xác định tn hi u lai.ê

- Cho phep xác định đươc trinh tư nhiêu gen trong m t thí nghi m đơn giản, hi u quả.ô ê ê

Microarrays

CẤU TẠO VÀ PHÂN LOẠI

CẤU TẠO ( DNA Microarray )

- DNA Microarray hay DNA chip, đươc chê tạo trên m t thủy tnh ho c silicone băng ky thu t tư đ ng cao, gôm ă ă â ô

vô số các probe (đoạn dò) đã biêt trước trinh tư

- Probe găn trên mảng cần đươc lưa chọn theo mục đích sử dụng, có thể là oligonucleotde ngăn,

oligonucleotde dài ho c cDNA.ă

DNA Microarray

NGUYÊN LY

- Dưa trên phep lai giưa DNA-DNA/DNA-RNA, giưa các mẫu DNA đã đươc đánh dâu găn trên bê m t ă

cứng qua các liên kêt hóa học

- Phương pháp này cho kêt quả định tnh (sư biểu hi n của gen) hay định lương mức đ biểu hi n và có ê ô ê

thể thưc hi n m t lần với hàng nghin gen.ê ô

QUÁ TRINH THƯC HI N MICROARRAY Ê

Sơ đô thưc hi n ky thu t microarray ê â

QUÁ TRINH THƯC HI N MICROARRAY Ê

Cơ chât

• Găn ổn định với mẫu dò

• Tín hi u nên gây nhiễu thâp ê

• Tính chât hóa học bê m t đông nhât và chât ă

lương dư li u cao ê

=> M t sô chât đap ưng đươc điêu ki n này và ô ê

thường đươc sử dụng: thủy tinh, polypropylene,

silicon.

Mẫu dò

• Mẫu dò để găn trên mảng cần đươc lưa chọn theo mục đích sử dụng

• Oligonucleotde ngăn, oligonucleotde dài, cDNA

• Sau khi chọn mẫu dò, găn chúng lên bê m t ă mảng băng 2 cách:

- cDNA

- Tổng hơp in situ

Chê tạo mảng

CHUÂN BI MẪU

TIẾN HÀNH LAI

XÁC ĐINH TIN HI U VÀ CHUÂN HÓA DƯ LI U Ê Ê

Tiên hành thí nghi m ê

a) Chuẩn bị mâu

-) Hi u quả phân tch băng microarray phụ thu c đáng kể vào khâu chuân bị mẫu.ê ô

-) Mẫu để lai là DNA ho c RNA đươc đánh dâu nhăm phát hi n trưc têp sau khi lai.ă ê

-) Các phương pháp đánh dâu:

° Găn trưc têp chât đánh dâu vào đích băng phản ứng

của các nhóm hoạt đ ng hóa học, PCR với môi đánh dâu.ô

° Dùng enzyme biên đổi trưc têp trinh tư đích

- Các chât chi thị phát hi n có thể là chât phát huỳnh quang (Cy3/Cy5), chât phóng xạ (ê 32P, 33P, 35S) Trong đó Cy3/Cy5 đươc sử dụng r ng rãi nhât.ô

Tiên hành thí nghi m ê

Sơ đồ đánh dấu màu do dùng Cy3/CY5

b) Tiến hành lai

- Tiên hành lai trên mảng sau khi đánh dâu

- Phương pháp microarray dễ tên hành hơn các phương pháp blot do sử dụng chât mảng răn

- Trong quá trinh lai, cho dung dịch đã đánh dâu đi qua màng Ơ đó, mẫu dò băt c p bổ sung (nêu có) với đích.ă

- Các điêu ki n lai (như nông đ mẫu, lưc ion, nhi t đ ) phụ thu c lớn vào kích thước mẫu dò trên mảng và ê ô ê ô ôphải xác định cho từng thí nghi m.ê

- Hi u quả lai có thể tăng lên nêu dung dịch lai luôn ơ trạng thái đ ng so với bê m t mảng.ê ô ă

Tiên hành thí nghi m ê

c ) Xac định và phân tch tn hi u lai ê

- Sau khi lai, tên hành rửa => loại bo đích không băt c p ho c băt c p không đ c hi u với dò.ă ă ă ă ê

- Xác định tn hi u lai do chât đánh dâu trên đích phát ra băng thiêt bị ảnh Cường đ tn hi u cho phep đánh ê ô êgiá tương đối hi u quả băt c p giưa đích và dò.ê ă

- Lương dư li u cần phân tch trong thí nghi m microarray rât lớn, tương ứng với nó là hàng chục ngàn tn hi u, ê ê êtrong đó có nhưng tn hi u nhiễu.ê

=> Sử dụng phân mêm chuyên dụng đê chuẩn hoa dư li u, đơn gian hoa qua trinh phân tch nhăm đưa ra kết ê

lu n nhanh và chinh xac â

Tiên hành thí nghi m ê

Quản lý môi trường

Y khoa

Công ngh sinh học ê Công ngh sinh học ê

Nông nghi p ê Nông nghi p ê

Công ngh thưc phâm ê Công ngh thưc phâm ê

ỨNG DỤNG VÀ TRIỂN VONG

Ưn g d

ung

ỨNG DỤNG VÀ TRIỂN VONG

- Quan lý môi trường

° xác định vi sinh v tâ

° đánh giá phân bố chức năng gen trong môi trường tư nhiên

° chân đoán b nhê

° khám phá gen

- Công ngh sinh hoc ê

° xác định xem gen có biểu hi n ơ trong m t mẫu mô nào đó không ê ô

° Xac định trinh tư gen ho c đ t biến ă ô

- Nông nghi p ê

° phát hi n b nh, theo doi sức khoe cá, tômê ê

- Công nghi p thưc phẩm ê

° phát hi n vi khuân gây đ c khi bảo quảnê ô

° Tim kiêm loại thuốc trị b nh.ê

° Xác định sư hoạt đ ng của gen.ô

° Tim vi trùng gây hại

° Chuân đoán ung thư vú

ỨNG DỤNG VÀ TRIỂN VONG

Triê n vọ

ng

Tài li u tham khao ê

- Giao trinh Công ngh sinh hoc thưc phẩm ê

- https://text.123doc.org/document/3084098-ky-thuat-di-truyen-ky-thuat-microarray.htm