TÀI LIỆU THỰC TẬP SINH HỌC PHÂN TỬ

ỨNG DUNG CỦA ENZYME CẮT GIỚI HẠNRFLP 8... ỨNG DUNG CỦA ENZYME CẮT GIỚI HẠN• TẠO PHÂN TỬ DNA TÁI TỒ HỢP 9... THIẾT LẬP PHẢN ỨNG ENZYME+ Enzyme là thành phần cho sau cùng.. + Tổng thể tích

GIỚI THIỆU MỘT SỐ ENZYME THÔNG DỤNG TRONG SINH HỌC

PHÂN TỬ

Phạm Trần Đăng Thứcptdthuc@hcmus.edu.vn

4

NUCLEASE – ENZYME CẮT GIỚI HẠN

ENZYME CẮT GIỚI HẠN (TT)

6

Derivation of the EcoRI name

Abbreviation Meaning Description

ỨNG DUNG CỦA ENZYME CẮT GIỚI HẠN

RFLP

8

ỨNG DUNG CỦA ENZYME CẮT GIỚI HẠN

• TẠO PHÂN TỬ DNA TÁI TỒ HỢP

9

10

Taq polymerase – PCR thông thường

Pfu polymerase – PCR thu nhận gene

11

THIẾT LẬP PHẢN ỨNG ENZYME

+ Enzyme là thành phần cho sau cùng

+ Tổng thể tích enzyme ≤ 1/10 tổng thể tích phản ứng

+ dd mẹ nX cần được pha lõang thành 1X

+ Phản ứng phải được ủ ở nhiệt độ và thời gian phù hợp

+ Rnase họat động không cần đệm

+ Độ tinh sạch của DNA quyết định hiệu quả phản ứng cắt giới hạn

12

THIẾT LẬP PHẢN ỨNG ENZYME

13

BÀI TẬP

Thiết lập phản ứng thủy giải 5 ng DNA plasmid bằng 2 enzyme

BamHI, HindIII Biết:

PHÂN TÍCH KẾT QUẢ ĐIỆN DI PLASMID

15

Xác định kích thước plasmid => cắt mở vòng plasmid

PHÂN TÍCH KẾT QUẢ ĐIỆN DI PLASMID

16

17

PHÂN TÍCH KẾT QUẢ PHẢN ỨNG

CẮT GIỚI HẠN

18

PHÂN TÍCH KẾT QUẢ PHẢN ỨNG NỐI

19

PHÂN TÍCH KẾT QUẢ PHẢN ỨNG THỦY

GIẢI NUCLEIC ACID

Rnase+

Rnase-20

THỰC HÀNH

1 Chuẩn bị dụng cụ hóa chất

2 Bổ sung đủ và đúng thứ tự các thành phần vào EPPENDORF 0.5 ML

1 LY TÂM NGẮN để kéo các thành phần xuống đáy ống

2 Đặt phản ứng vào NHIỆT ĐỘ thích hợp

3 Bổ sung dung dịch nạp mẫu dừng phản ứng

4 Điện di phân tích kết quả

bufferplasmid

Nhóm 7-8: Đặt phản ứng nối thang lamda HindIII với DNA T4 ligase

-DNA lamda HindIII 1 ul

-DD đệm (buffer) 10X 1 ul

-DNA T4 ligase 1 ul (THÀNH PHẦN CHO VÀO SAU CÙNG)

Ủ 1h ở 16oC (ĐẶT TRÊN KHAY NƯỚC ĐÁ ĐANG TAN)

Nhóm 9-10: Đặt phản ứng thủy giải RNA bằng RNAse cho hỗn hợp