Standard TCVN 8275 2 2010 japanese

国家規格 TCVN 8275 2：2010 ISO 21527 2：2008 食品および動物の飼料の微生物学 男性のキノコの方法およびキノコの方法 パート 2： 小規模および水活動を伴う製品のカウンターを清掃するための技術 0 95 Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the enumeration of yeasts and moulds – Part 2 Colony count technique in products with water activity less than or equal to 0,95 序文 TCVN 8275 2：2010 と TCVN 8275 1：2010 が TCVN 4993：1989、TCVN 6554： 1999 および TCVN 7137.

国家規格

TCVN 8275-2：2010 ISO 21527-2：2008

食品および動物の飼料の微生物学-男性のキノコの方法およびキノコの方法-パート 2：

小規模および水活動を伴う製品のカウンターを清掃するための技術 0.95

Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the enumeration

of yeasts and moulds – Part 2: Colony count technique in products with water activity

less than or equal to 0,95

ISO 21527 には次の規格が含まれています。

-TCVN 8275-1：2010（ISO 21527-1：2008）、食品および動物の飼料の微生物学-酵母 およびカビの定量法-パート 1：製品のコロニー数測定手法 0.95 より大きい水分活性を 持っている。

-TCVN 8275-2：2010（ISO 21527-2：2008）、食品および動物の飼料の微生物学-酵母 およびカビの定量的方法-パート 2：製品のコロニー数測定手法水分活性が 0.95 以下で ある。

す。

1.適用範囲

この国際規格は、水分活性が 0,95 以下の食品または動物飼料中の生きている浸透圧酵母および乾燥カビの測定方法を規定していま

す[ドライフルーツ、ケーキなど）。 、レベル、乾燥肉、塩漬け魚、シリアル、豆類、豆類製品、小麦粉、ナッツ、スパイスなど

（付録 A）] 25°C ± 1°C でのコロニーカウントテクニック 3]。 この基準は、水分活性が 0.60 以下の乾燥製品には適用されません

（乾燥豆、油性豆製品、スパイス、豆類、ナッツ、種子、インス

タント飲料、粉末、乾燥飼料 ）で、カビの胞子の定量化はできません[3]。毒素に対する食品のマイコトキシンの同定と検査は、この基準ではカバーされていません。この国際規格で指定されて

いる方法は、乾燥した魚に見られる塩分を好む塩生きのこ（すな

わち、Polypaecilum pisce、Basipitospora halophila）の測定には適していません。

2.規範的な参照

ISO / TS 11133（すべての部品）、食品および動物の飼料の微生

物学-培地の調製および生産に関するガイドライン

ISO 21527-1：2000、食品および動物の飼料の微生物学-酵母およ

びカビの定量的方法-パート 1：を含む製品のコロニー数計測技術水分活性は 0.95 より大きい。

3.用語と定義

このドキュメントでは、ISO 21527-1 で定義されている用語と定義、および以下の定義用語が適用されます。

追加のプレートは、テストサンプルまたは最初の懸濁液の 10 進希釈を使用して、同じ条件下で準備できます。

4.2。好気性条件下で調製したプレートを 25°C±1°C で 5〜7 日間

インキュベートします。寒天プレートは、必要に応じて、1〜2 日間、拡散光に放置することができます。

れます。

5.希釈剤と培地

実施された実践テストについては、ISO / TS 11133（すべてのパーツ）を参照してください。

させ、できれば乾燥させます[1]、[3]。

注ポリ（オキシエチレン）ソルバチタンモノオレイン酸ナトリウ

ム 1）（0.05％（質量濃度））などの界面活性剤を希釈剤に添加して、真菌胞子と粘着性胞子を減らすことができます[3 ]。

特定の試験サンプルを準備しない限り、希釈液として 0.1％ペプトン水培養液（質量濃度）の使用をお勧めします。

必要に応じて加熱しながら、コンポーネントを水に溶解します。

必要に応じて pH を調整し、滅菌後の pH が 25°C で 7,0±0.2 になるようにします。 5.2。 培地

5.2.1。 ジクロラングリセロール寒天 18％（質量濃度）（DG 18）[4]、[5]、[6]

5.2.1.1。 原材料

酵素を含むカゼイン加水分解生成物 5,0 g

D-Glucoza (C 6 H 12 O 6 ) 10,0 g Kali dihydro phosphat (KH 2 PO 4 ) 1,0 g

Magie sulfat (MgSO 4 H 2 O) 0,5 g

Dichloran (2,6-dicloro-4-nitroanilin) 0,002 g

Glycerol 220 g

ゼリー 12 g - 15 g a

Chloramphenicol 0,1 g 蒸留水または脱イオン 水 1 000 ml

1％クロラムフェニコール溶液（質量濃度）10 ml をエタノールに加えて混合します。 培地を適切な容量（6.5）の容器に分注します。 121°C でオートクレーブして 15 分間 滅菌します。

44°C と 47°C の間に維持されたウォーターバス（6.3）で培地をすぐに冷却します。 50°C 以下に冷却し、滅菌ペトリ皿（6.6）に 15 ml を分注します。

必要に応じて、培地を ISO 7218 および ISO / TS 11133（すべてのパーツ）に従って寒 天表面を固化および乾燥させます。

すぐに使用するか、使用するまで ISO / TS 11133（すべての部品）に従って暗所で保 管してください。

警告-光にさらすと定量的な結果に影響を与える可能性のある毒性のある製品が生成さ れる可能性があるため、環境を光にさらさないでください。

5.2.1.2.2。クロルテトラサイクリンクロハイドリックの代替計画

細菌の繁殖が問題になる可能性があるため、クロラムフェニコール（50 mg / l）とクロ ルテトラサイクリン（50 mg / l）の使用をお勧めします。この場合、上記の基本培地を 準備しますが、50 mg のクロラムフェニコールのみを使用し、100 ml の量を分注して 滅菌します。溶液が不安定であるため、消毒のために、新鮮な 0.1％（質量分率）のク ロルテトラサイクリン塩酸（水）溶液とろ過を準備する必要があります。使用直前に、 この溶液 5 ml を基本培地 100 ml に無菌的に加え、皿に注ぎます。ゲンタマイシンの使 用は一部の酵母を阻害することが示されているため、ゲンタマイシンの使用は推奨され ません[3]。

5.2.1.2.3。微量の要素を追加するオプション

カビがその完全な形態、つまりその色素を示すためには、DG18 に存在しない可能性の ある要素を追跡する必要があります。この培地上のカビを特定するには、以下の微量の 元素溶液を、事前にオートクレーブ処理した基本培地 1 L あたり 1 ml で加えます。1g

の ZnSO4.7H2O。 CuSO4.5H2O 0.5 g; 100 ml の蒸留水または脱イオン水[2]。

5.2.1.3。培地の品質を保証する性能試験

5.2.1.3.1。一般的な要件

DG18 は固体培地です。培地の収量と選択性は、ISO / TS 11133（すべてのパーツ）に 従って、次の要件に従ってテストする必要があります。

試験方法：定量的

特徴的な反応：各種の特徴的なコロニー/シュート/細菌

ISO 6887（すべての部品）、ISO 7218、ISO 8261、および製品に

関連する特定の規格に従ってテストサンプルを準備します。製品

に関連する特定の基準がない場合、関係者はこれに同意します。 9.進め方

9.1。テスト部分、最初の懸濁液および希釈剤

ISO 6887（すべてのパーツ）、ISO 7218、ISO 7218、ISO 7218 に

従って、テスト部分、初期懸濁液（初期希釈）、およびその後の

希釈を準備します 8261）と製品に関する特定の基準。

特定の試験サンプルの調製を除いて、希釈液としてペプトン水培

養液（5.1.3）の 0.1％を使用することをお勧めします。ペリスタルティックブレンダーを使用して、サンプルを混合したり、振っ

たりすることをお勧めします。

胞子はピペット内で素早く沈殿するため、適切な量の懸濁液また

は希釈液を満たしたとき、ピペット（6.2）を水平位置（立っていない）のままにします。

微生物を含む粒子が沈殿するのを防ぐために、最初の懸濁液と希

釈液を振ってください。

9.2。接種とインキュベーション

9.2.1。滅菌ピペットを使用して、0.1 ml の液体テストサンプルま

たは 0.1 ml の別の形の製品の最初の懸濁液（条項 8）を DG18 寒天プレート（5.2.1）に移します。

滅菌ピペットを使用して、0.1 ml の最初の 10 倍希釈（10-1）（液体製品）または 0.1 ml の 10-2 の 10 倍希釈（その他の製品）を 2番目の DG18 寒天プレート（5.2.1）に。

少量の酵母やカビの定量を容易にするために、サンプルまたは液

体テストサンプルの 10-1 希釈液を最大 0.3 ml まで、3 つの皿に均等に広げます。

希釈ごとに新しい滅菌ピペットを使用して、後続の希釈でこれら

の操作を繰り返します。

ナッツやシリアルなどの粒状または固形食品の場合は、直接料理

をお勧めします。これらの製品のサンプルは、0.35％次亜塩素酸ナトリウム溶液（1000 µg / g）で 2 分間、表面滅菌され、滅菌蒸

注 1 酵母、特にカビは、菌糸体と無性胞子および有性胞子の混合物であるため、定量法は不正確です。コロニー形成単位の数は、

菌糸の菌糸の程度と、注ぐ培地で成長することができる胞子の割

合に依存します。

注 2 希釈プレート皿からのカウントの非直線性がしばしば現れる。これは、サンプルを 10 倍に希釈しても、通常、ディッシュで得られたコロニー数の 10 分の 1 の結果にならないことを意味します。これは、プレート上に多数のコロニーが存在する場合に、菌

酵母コロニーを数え、必要に応じてコロニー/芽を分離します。

e）得られた試験結果;

≥ 0,60

ドライフルーツの含水率は 15％〜20％、キャラメル、タフィーミルク、蜂蜜、豆、ドッグフード、ナッツ、豆、豆

≥ 0,03 全乳粉は 2％から 3％の水分、スープ粉、インスタントコ

ーヒーを持っています。

参考文献

[1] ANDREWS, S., PITT, J.I Selective medium for isolation of Fusarium species and

dematiaceous hyphomycetes from cereals App Environ Microbiol 1986, 51, pp

1235-1238

[2] BELL, C, NEAVES, P., WILLIAMS, A.P Food microbiology and laboratory practice

Blackwell, Oxford, 2005 324 p.

[3] BEUCHAT, L.R Media for detecting and enumerating yeasts and moulds In:

CORRY, J.E.L., CURTIS, G.D.W., BAIRD, R.M., editors Handbook of culture media for

food microbiology, pp 369-386 Elsevier, Amsterdam, 2003 (Progress in industrial microbiology, Vol 37)

[4] BEUCHAT, LP,., FRANDBERG, E., DEAK, T., ALZAMORA, S.M., CHEN, J.,

GUERRERO, A.S., LOPEZ-MALO, A., OHLSSON, I., OLSEN, M., PEINADO, J.M., SCHNURER, J., DE SILONIZ, M.I., TORNAI-L.EHOCZKI, J (2001) Performance of mycological media in enumerating desiccated food spoilage yeasts: An interiaboratory

study Int J Food Microbiol 2001, 70, pp 89-96

[5] DEAK, T., CHEN, J., GOLDEN, D.A., TAPIA, M.S., TORNAI-LEHOCZKI, J.,

VILJOEN, B.C., WYDER, M.T., BEUCHAT, L.R Comparison of dichloran 18 % glycerol (DG18) agar with general purpose mycological media for enumerating food spoilage

yeasts Int J Food Microbiol 2001, 67, pp 49-53

[6] HOCKING, A.D., PITT, J.I Dichloran-glycerol medium for enumeration of xerophilic

fungi from low moisture foods Appl Environ Microbiol 1980, 39, pp 488-492