Thu mẫu và ly trích tuyến trùng từ thực vật

Phương pháp trích tuyến trùng từ đất và thực vật • Tùy thuộc loại tuyến trùng - Cách gây hại (nội, bán nội, ngoại, di động, bất động) - Kích thước cơ thể - Di chuyển: nhanh, chậm, ít, … * Mỗi p

_ @e

se, i 21: Thu mau va ly

A tuyén tring tu thuc

vat

Objectives of sampling and

extracting nematodes

O Identify the nematode

O Population estimation

O Diagnose a nematode disease

CO Make management decisions

- Regulatory purposes

- Research and surveys

Hinh 48 Mot s6 dung cu dé gap và xử lý tuyến trùng.

Place jars in tray

Hand: never uproot plants or take soil samples

SoIl sampling tuhe (15-20 cm)

SoIil auger (more than 20 cmn)

Spade or garden trowel (in rocky soil)

Screwdrtver (to scrape the soil from the sampling tule)

Phuong phap thu mau

Fig1

«Sampling pattern :

- Systematic at equally-spaced point according

to the grid pattern (Fig1)

- At equally-spaced points along a Ìine running

- Sampple free crops in the drip line,

on alternate sides of the trunks and include

feeder roots (Fig3)

For annual crops, collect samples at 10-20 cm trom

the stem, in the root zone

Collect samples of weeds and volunteer crop plants

Collect sample from: soil, roots, leaves, stems,

buds, flowers, seeds

Number of samples: 10 for 5m? in size or less

fields, 20 for 5m?-100m? fields, 30 for larger fields

« Sampling depth: 20 cm tor most crops, 20-100

cm for perennial crops according to type and age

of crops, 30-45 cm in regions with hot and dry

sumimers

Timing: prior to planting (relation of population

density with yield), between mid season, at

harvesting

Sampling pattern for damaged area or

infected patch in a crop

Sampling pattern for individual tree or

Soil sampling pattern for row crops

Thu mẫu đất ngoài đồng

° ĐỒ sâu

* 20 cm cho hầu hết các loại cây trồng

* 20-100 cm cho cây đa niên, tùy tuổi cây, loại cây,

* 30-45 cm Ở nhỮng vùng nóng và mùa hè khô

hạn

S6 luong mau can thu

* 10 mẫu cho 5m2

* 20 cho 5m2-100m2

* 30 for larger fields

Thời gian lấy mẫu

° Trước khi trồng

¢ GiUa mua VU

¢ Khi thu hoach

Dé phan tich cho chinh xac

Lấy mẫu đất + rễ: để cùng vào 1 túi

Nếu đất thu khô, cần cho một ít nước để tạo

Phương pháp trích tuyển trùng từ đất và

thực vật

° Tùy thuộc loại tuyến trùng

- Cách gây hại (nội, bán nội, ngoại, di động,

Kỹ thuật trích tuyến trùng từ đất

và thực vật

Đất và thực vật

°_ Baermann Eunnel (Quặng Baermamn)

- _ Phương pháp lắng cặn và lọc của Cobb

° _ Phương pháp lọc và ly tâm

Riêng cho thực vật

° Phương pháp Ủ (trong nước) và lọc

°Ò Phương pháp xay và lọc

Baermann Funnel (Quang Baermann)

Nguyên tắc

*° - Dựa trên sự di chuyển tích cực của tuyến trùng

Baermann Funnel set up

The Baermann techniques (for soil and plant

Cut root pieces (1-0.5-1cm)

Advantages: sunple material,

can be practiced everywhere

Disadvantage: not suitable for

inactive or large nematodes

Time: 48h nematode

Incubate for 48 hours and collect the

nematodes

Kỹ thuật trích tuyên trùng từ đất

và thực vật

° _ Phương pháp lắng cặn và lọc của Cobb

* Cobb's decanting and sieving method (for soil and plant material)

Advantages: does nof require mm |

sophisticated material, active and

sluggish nematodes are extracted

)

ma

wor,

Naat cou sa caau nắng, /

có nhiều hữu cơ Đất có sa cấu

nhei, cou it houd co

rây 45IIm trùng ^

Kỹ thuật trích tuyên trùng từ đất

và thực vật

° Phương pháp lọc và ly tam

*«_ Sieving — cenfrifugafion — flotation (for soil and

plant material)

Sieve soil samples + nematodes

Cenfrifuge the suspension for 7 and then 3 mịn af 1750 rpm

NB: for plant material blend 1 cm pieces in a food blender

before sieving

Advantages: fast, active and sluggish species are extracted,

small and large nematodes are extracted

Disadvantages: the equipment Is expensive and expertise Is required

Kỹ thuật trích tuyên trùng từ đất

và thực vật

¢ Seinhorst cyst-elutriator

Best method tor extracting heteroderid cyst nematodes

The cysts are kept in suspension by a controlled upward

CurrenÍ of wafer

Cysts (except larvae) can not go through sieves, the

Baermann techniques are not suitable

Ky thuat ly trich tuyén tring don

Jar incubation and sieving

Blending and sieving

¢ Foliar samples

Punching and incubating

Scissors technique

Add the soil sample to the coffee filter

or tissue paper

Place the sample on the funnel

Cover the tissue over the soil

Collect nematodes in a beaker

Ưu và giới hạn của phương pháp

Baermann

Uu

°_ Tuyến trùng không bị tổn thương

° _ Mẩu sạch, dễ quan sát

° _ Không cần phải lược qua rây

° ĐƠn giản, rễ tiền

Hạn chế

° _ Không phát hiện được nhỮng loài ít hoặc không di động

Phương pháp Baermann

cải tiên

Chuan bi ray

Để đất trên tờ giấy lọc

Dé giay loc + dat vao trong ray

Cho nước vào rây

¬— «

Để ở nhiệt độ trong phòng trong 3

ngày

Sau 3 ngay, lay ray ra va giữ lại phần

nƯỚc

Cho nước qua rây

Lay tuyén tring trén ray

Ưu điểm và giới hạn của Quặng

Baermann

Ưu

* Tuyén tring không bị tổn thương

° Mu sạch, dễ quan sát

¢ Khong can phải lược qua ray

¢ Don gian, ré tién

Gidi han

° Thiéu oxygene

¢ Khong phat hién duoc nhUng loai it hoac kh6éng di động

Ưu điểm và giới hạn của phương pháp

Phương pháp ủ (trong nước) và lọc

(Dựa trên nguyên tắc: Tuyến trùng có

khuynh hướng di chuyển ra khõi rề

và thực vật khi Ở trong nước)

Sample ready for processin

ee EEE

Wash the roots

Damp dry the roots

Weigh the damp-dried roots

Place roots in jars, add water

en Se SA =

=

Place jars in tray

Store in the dark for 72 hours

Following incubation, remove from

storage and add water

Collect nematodes on siev

Rinse nematodes from sieve

Nematode samples ready for

observation

Advantages and Limitations

Advantages

Extracts migratory endoparasitic nematodes

© Few materials needed

© Simple procedure to follow

Limitations

O Not useful for ectoparasitic nematodes

O Lack of aeration can be a problem

O Sieves are needed to concentrate nematodes

Phương pháp xay và lỌc

Wash roots well

—

Cut roots

Damp dry the roots

Place roots into blender, cover

roots with water

5iend at low speed for 10-20

seconds

| er re -=ẽ.=ane

Pour the roots into 325 or finer mesh sieve

Set up a Baermann tray

Place filter paper on the Baermann

tray

ee ee

Add water to Baermann tray

Transfer the blended roots into the

filter paper

Incubate for 24 hours

Remove roots from the pan

Concentrate nematodes for observation

Advantages and Limitations

Advantages

O) Fast method to extract nematodes from roots

© Foliar nematodes can also be easily extracted

Preserving nematodes

Nematodes are preserved as:

slide mounts (Cobb double-coverslip aluminium slide), unmounted in

tixatives in vials, frozen and stored in liquid nitrogen, in a greenhouse as

live collections

Killing and fixing: nematodes are killed and fixed in hot fixatives

FA 4:1 = Formalin (10ml), Acetic acid (Imi), Glycerol (3ml), H2O (100ml)

FAA = Formalin (6ml), Acetic acid (Imlj, Ethanol 96% (20ml), H20 (40 ml)

TAF = Formalin (7ml)), Triethanolamine (Zml), H20 (91ml)

lactophenol = Liquid phenol (20ml), Lactic acid (20ml), Glycerol (40ml)

H2O (20ml)