Môi trường (MT) dinh dưỡng 500 ml
- Đường sucrose: 10 g
- MS1: 10 ml
- MS2, MS3, MS4, MS5: 5 ml
- 2,4 – D: 750 µl = 0,75 ml
Agar: 4 g + 250 ml nước cất 2 lần
Đo pH = 5,8 trên máy khuấy từ
Nấu bằng lò vi sóng (≈5 phút khuấy agar 1 lần để agar tan đều)
Đo pH = 5,8 trên máy khuấy
từ
Chiết rót vào bình nước biển 500 ml Bề dày MT: 2-2,5 cm
Đậy nắp bằng giấy nilon , buộc kín
Hấp khử trùng
1210C, 1 atm, 20
Để nguội
Khử trùng kèm 3 bình nước cất (đậy kín như bình chứa MT)
→ phục vụ thao tác vào mẫu
CHUẨN BỊ VÀO MẪU
CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG
Khử trùng tủ cấy: sử dụng cồn 700 ( lau từ trên xuống duới, từ trong ra ngoài)
Chuẩn bị
- Bình đựng MT, nước cất → lau
qua thành bình bằng cồn 700
- Ống nghiệm đựng cồn 900 để trong
bình tam giác
- Đèn cồn
Chuẩn bị
- Bộ dao, kéo, kẹp: cắt mẫu
- Bình tam giác: đựng mẫu trong quá trình xử lý mẫu
- Đĩa petri: đựng mẫu trong quá trình cắt
Bật UV Tránh ra vào trong khu vực khi đang bật đèn
15 phút
Lá đồng tiền Rửa dưới vòi
nước
Khử trùng cồn 700/30 Tráng lại bằng nước Khử trùng HgCl2 0,1%/5 phút
Rửa bằng nước cất: 1’ → 3’ → 3’
→ 5’
Gạn nước vào → lắc → đổ nước
ra theo thứ tự: 1 phút, 2 phút…
Cắt mẫu (5 ¿ 5 cm) trên đĩa petri
Khử trùng dao, kéo, kẹp: nhúng vào cồn và đốt trên ngọn lửa đèn cồn
Rửa tay bằng xà phòng Rửa cồn 700
VÀO MẪU
Cắt viền xung quanh lá: tăng
bề mặt tiếp xúc mẫu và môi
trường -Bề mặt dưới của lá tiếp xúc với môi trường -Khoảng cách giữa các mẫu đều nhau: 4
mẫu/bình Nuôi mẫu
Hình thành Phôi vô Cây hoàn chỉnh Trồng hàng loạt
Định mức 250 ml bằng nước cất 2 lần
Cồn 700:
- Lâu bay hơi hơn cồn 900 → khử trùng tốt hơn
- Làm sạch, diệt 1 số vi khuẩn, không diệt được nấm
- Tăng sức căng bề mặt của tế bào, giúp mẫu tiếp xúc với chất khử trùng chính
-Cường độ ánh sáng: 2000-3000 lux -Thời gian: 8-10 giờ/ ngày
-Nhiệt độ: 25 ± 20C
Mẫu lá cây đồng tiền
Cây phát triển sau đem trồng hàng loạt
Chất khử trùng chính, độc nên thao tác cẩn thận, thời gian khử trùng tính từ lúc đổ HgCl2
vào đến lúc đổ HgCl2 ra
Lắc đều
SVTH: Đoàn Ngọc Sinh, Lớp: 10SH
