Báo Cáo Đề Cương Đồ Án Tốt Nghiêp.pptx

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ KỸ THUẬT MÔI TRƯỜNG BÁO CÁO ĐỀ CƯƠNG ĐỒ ÁN TỐT NGHIÊP ĐẶT VẤN ĐỀ • Cá tra một trong loại thủy sản có kim ngạch xuất khẩu cao • Tă[.]

BÁO CÁO ĐỀ CƯƠNG ĐỒ ÁN TỐT

NGHIÊP

ĐẶT VẤN ĐỀ

• Cá tra- một trong loại thủy sản có kim ngạch xuất khẩu cao

• Tăng dần qua các năm và đem về nhiều nguồn lợi kinh tế

Biểu đồ Thống kê xuất khẩu cá tra 6 tháng đầu năm từ 2009-2013

• Nuôi cá số lượng lớn,mật độ cao, nuôi thâm canh dẫn đến ô nhiễm nguồn nước, dịch bệnh tràn lan

• Sử dụng kháng sinh tự phát, tùy tiện

ĐẶT VẤN ĐỀ

Đặc biệt là bênh gây xuất huyết ở cá tra

với tác nhân gây bệnh là Aermonas

hydrophyla.

PHÂN LẬP VI KHUẨN Aeromonas hydrophila CÓ ĐỘC LỰC CAO GÂY BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ TRA

(pangasius hypophthalmus) Ở CÁC TỈNH ĐỒNG BẰNG

SÔNG CỬU LONG BẰNG PHƯƠNG PHÁP PCR

GVHD: Trần Hoàng Ngâu SVTH: Châu Thanh Xuân

Tổng quan Vật liệu-Phương pháp

Kết quả-Biện luận Kết luận-kiến nghị Tài liệu tham khảo

Tổng quan

1 Vài nét về Aeromonas hydrophila

Hình 1.1 Vi khuẩn Aeromonas hydrophila có một tiên mao.

Ảnh kính hiển vi điện tử (Bùi Quang Tề, 1998)

• Tác nhân chính gây bệnh nhiễm trùng huyết

(motile aeromonad septicaemia: MAS)

• Xâm nhiễm các cơ quan nội tạng, gây xuất huyết.

• Aeromonas hydrophila sản sinh ra nhiều độc tố haemolysin (aerolysin), cytotoxin, enterotoxin,

lipase cholinesterases,… góp phần quan trọng vào quá trình phát triển của bệnh

2 Khả năng lây bệnh

Tổng quan

• Các thiết bị chuyên dụng trong phòng thí nghiệm

• Các hóa chất cần thiết cho đề tài.

Vật liệu-Phương pháp

1 Vật liệu

Thí nghiệm 1: Phân lập vi khuẩn từ 4 tỉnh Đồng bằng

sông Cửu Long ( Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang, Đồng Nai)

2 Phương pháp

1.1 Phương pháp kiểm tra và mổ khám bệnh tích 1.2 Phương pháp phân lập và giữ giống 1.3 Phương pháp nhuộm gram và quan sát hình thái

Sơ đồ 2.3 Quy trình nhuộm gram

Vật liệu-Phương pháp

Thí nghiệm 2: Định danh vi khuẩn bằng phương pháp PCR

2.1 Thiết kế đoạn mồi

• Dựa trên trình tự đoan gene gây độc

Thermostable hemolysine( AHA_3217)

Hình 2.1 Vị trị gene Thermostable hemolysine trong genom của A hydrophila

2.2 Thành phần phản ứng PCR

Vật liệu-Phương pháp

Thành phần Nồng độ cuối Thể tích cho 1 phản ứng

(V = 25l)

Taq buffer 10X

dNTPs 25mM

Dream Taq polymerase 5U/ l

Forward primer 10mM 0.2 mM 0.5 l

Reverse primer 10mM 0.2 mM 0.5 l

DNA template 1.0 l

2.3 Chu trình luân nhiệt

Vật liệu-Phương pháp

Giải trình tự sản phẩm PCR

• Xây dựng mối tương quan hồi quy giữa OD và mật độ tế bào cũng như thời gian phát triển của một thế hệ làm cơ sở cho việc thử nghiệm

độc lực chủng A.hydrophila hoang dại.

• Tăng sinh vi khuẩn trong canh trường LB

• Cứ mỗi một tiếng lấy mẫu ra đo OD và trải

đếm vi khuẩn Theo dõi trong vòng 9 giờ

Vật liệu-Phương pháp

Thí nghiệm 3: Xây dựng đường cong tăng trưởng

Thí nghiệm 4: Thử nghiệm độc lực các chủng

A.hydrophila hoang dại bằng phương pháp tiêm

Vật liệu-Phương pháp

Thí nghiệm 5: Xác định độ nhạy của cặp mồi phát

hiện A.hydrophila bằng phương pháp Realtime PCR

và xác định độ đặc hiệu của phương pháp

Vật liệu-Phương pháp

5.1 Xác định độ nhạy của cặp mồi

a Xây dựng đường chuẩn

- Dựa vào đường chuẩn để xác định được số bản

coppy có trong mẫu cần phân tích, từ đó xác định

chính xác hàm lượng DNA thấp nhất mà cặp mồi có

thể bắt cặp được.

b Thành phần phản ứng Realtime PCR

Vật liệu-Phương pháp

Thành phần Nồng độ cuối Thể tích cho 1 phản ứng

(V = 20l)

Master mix (10X) 10 l

Forward primer 10mM 0.2 mM 0.5 l

Reverse primer 10mM 0.2 mM 0.5 l

DNA template 1.0 l

5.2 Xác định độ đặc hiệu của cặp mồi

Vật liệu-Phương pháp

- Xác định độ đặc hiệu của căp mồi bằng cách thực hiện phản ứng PCR với 5 mẫu vi khuẩn

thường gây bệnh cho cá.

• Dự kiến phân lập được một vài dòng

A.hydrophila có độc lực cao để phục vụ cho

việc nghiên cứu vaccine

• Xác định được hàm lượng DNA vi khuẩn thấp nhất có thể phát hiện được

• Xác định được độ đặc hiệu của phương pháp

Kết quả-Biện luận

• Sử dụng phương pháp PCR với cặp mồi thiết

kế đặc hiệu để phân lập thêm các chủng

A.hydrophila hoang dại mới.

• Tạo chủng A.hydrophila đột biến từ những dòng A.hydrophila có độc lực cao vừa được phân lập

Kết luận-kiến nghị

• Tiếng Việt

Kết quả thực hiện kế hoạch 5 tháng đầu năm 2014 Ngành nông nghiệp và phát triển

nông thôn Báo cáo của Bộ nông nghiệp và phát triển nông thôn.

Phạm Thanh Hương, Từ Thanh Dung Điểm bệnh học cá tra Chi cục thủy sản thành

phố Cần Thơ

Bùi Quang Tề, 2001 Ký sinh trùng của một số loài cá nước ngọt ở Đồng bằng Sông Cửu

Long và các biện pháp phòng trị chúng Luận án tiến sỹ sinh học Hà Nội

• Tiếng Anh

Austin B, Austin D A Bacterial fish pathogens 2nd ed Chichester, United Kingdom:

Ellis Horwood; 1993.

Roberts R.J (1993) Motile Aeromonad Septicaemia In: Bacterial diseases of fish (Ed

by Inglis V., Roberts R.J and Bromage N.R.), Blackwell scientific publications,

Oxford, 143-155 (RJ, 1993)

Plumb J.A., Grizzle J.M and Defigueiredo J (1976) Necrosis and bacterial

infection in channel catfish (Ictalurus punctatus) following hypoxia Journal of Wildlife

Diseases12, 247-253.

Tài liệu tham khảo