PCR NHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢN pptx

NGUYÊN TẮC CỦA PCRThử nghiệm nhân bản một đoạn DNA trong ống nghiệm dựa vào...  Sản phẩm khuếch đại có T bị thay thế bởi U Sản phẩn khuếch đại nếu ngoại nhiễm vào PCR mix sẽ bị men UNG

NHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢN

NGUYÊN TẮC CỦA PCR

Thử nghiệm nhân bản

một đoạn DNA trong

ống nghiệm dựa vào

Mồi Taq polymerase dNTP

PCR buffer + MgCl 2

PCR MIX DNA đích (Template)

PHẢN ỨNG PCR

PCR mix

94 o C/15s-1min 55-65 o C/15s-1min

72 o C/30s-3min

PHẢN ỨNG PCR

Máy luân nhiệt

 Tạo chu kỳ nhiệt

PHẢN ỨNG PCR

Men polymerase chịu nhiệt

 Tách chiết từ VK Thermus aquaticus

(Taq polymerase)

 Tái tổ hợp từ VK E coli / VK không chịu nhiệt

 Sản phẩm khuếch đại có T bị thay thế bởi U

 Sản phẩn khuếch đại nếu ngoại nhiễm vào PCR mix sẽ bị men UNG phá hủy trước khi thực hiện PCR

RT (reverse transcription)

RT with specific primers

RNA

RT (reverse transcription

)

RT with random primers

Real-time PCR

Nguyên tắc

Real-time PCR

Biểu đồ khuếch đại

Real-time PCR

Biểu đồ chuẩn

Laser

or UV

Came ra

Real-time PCR

Máy real time PCR

Primers Taq polymerase dNTP

Real-time PCR MIX Target DNA (Template)

Hóa chất: Real-time PCR mix phát quang được khi có

sản phẩm PCR

Fluorescent agent

Real-time PCR

Hóa chất và thuốc thử

Real-time PCR

Ứng dụng

 Định lượng tác nhân đích có trong mẫu thử

 Xác định tỉ lệ biến đổi gen

PCR CHẨN ĐOÁN TÁC NHÂN VSV

Áp dụng

 Chẩn đoán

Định tínhĐịnh lượng

 Theo dõi diễn tiến bệnh và hiệu quả điều trị

Định lượng

PCR CHẨN ĐOÁN TÁC NHÂN VSV

Ưu điểm

 Độ nhạy cao

 Độ đặc hiệu cao

 Cho kết quả nhanh hơn so với nuôi cấy

 Giúp chẩn đoán tác nhân VSV không nuôi cấy được

PCR CHẨN ĐOÁN TÁC NHÂN VSV

Nhược điểm

 Trang thiết bị đắc tiền

 Người làm XN phải được đào tạo

 Giá thành tương đối cao

PCR CHẨN ĐOÁN TÁC NHÂN VSV

Lấy và vận chuyển mẫu bệnh phẩm

PCR CHẨN ĐOÁN TÁC NHÂN VSV

Nhận định kết quả

Kết quả PCR (+) :

 Xác định bệnh nhân bị nhiễm tác nhân gây bệnh

 Chưa khẳng định được bệnh nhân bị bệnh

 Cần kết hợp LS và CLS khác

XIN CÁM ƠN

SỰ CHÚ Ý LẮNG NGHE