Tài liệu Đề tài: Phân lập và tuyển chọn chủng thuần khiết, khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ, pH và nguồn cacbon đối với chủng Pseudozyma aphidis ppt

Báo cáo thực tậpĐề tài: Phân lập và tuyển chọn chủng thuần khiết, khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ, pH và nguồn cacbon đối với chủng Pseudozyma aphidis Cán bộ hướng dẫn : TS... Đối tượng ng

Báo cáo thực tập

Đề tài: Phân lập và tuyển chọn chủng thuần khiết, khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ, pH và nguồn cacbon

đối với chủng Pseudozyma aphidis

Cán bộ hướng dẫn : TS Quản Lê Hà Sinh viên thực hiện : Đoàn Văn Lâm Lớp: CNSHB - K50

I Mở đầu

1 Giới thiệu về nấm men

Nấm men có cấu tạo đơn bào và thường sinh sản bằng cách nảy chồi và phân cắt Tế bào nấm men có hình elip, hình cầu, hình gậy Kích thước của tế bào nấm men vào khoảng 8 - 15 μm Tế bào nấm men gồm có m Tế bào nấm men gồm có

Vỏ (thành), màng, tế bào chất, nhân, một hoặc

2 không bào Nấm men có thể sinh sản bằng bào tử (1 – 12 bào tử)

2 Đối tượng nghiên cứu

Nấm men Pseudozyma aphidis thuộc lớp

Nấm đảm dị hình, sinh sản bằng cách nảy chồi Loại nấm men này được phân lập chủ yếu từ thực vật Trong lần thực tập này vì thời gian có hạn nên em khảo sát định tính khả năng sinh trưởng, sinh bào tử của chủng nấm men này ở một số điều kiện (t0, pH) và các yếu tố dinh dưỡng như: nguồn xellulose, tinh bột, cacbua hydro…Từ nghiên cứu định tính này chúng ta biết được những ứng dụng mới của chủng nấm

men Pseudozyma aphidis trong thực tiễn

II Vật liệu và phương pháp nghiên

cứu

1 Vật liệu

1.1 Chủng vi sinh vật nghiên cứu

Chủng nấm men Pseudozyma aphidis từ bộ

sưu tập giống của Viện công nghệ sinh học – Công nghệ thực phẩm, trường Đại học Bách Khoa Hà Nội được đặt tên là: L35

1.2 Hóa chất

• KH2PO4 - Agar

• MgSO4.7H2O - Pepton

• FeSO4.7H2O - Tinh bột

• MnSO4.H2O - Cao nấm men

• NH4NO3 - Glucose

• Na2HPO4

1.3 Máy và thiết bị

- Nồi hấp tiệt trùng (Liên Xô cũ)

- Tủ sấy (Đức)

- Tủ cấy vô trùng (Trung Quốc)

- Lò vi sóng

- Máy so màu quang phổ UV

- Máy lắc ổn nhiệt

- Máy đo pH

- Cân điện tử

- Máy lắc vortex

- Máy khuấy từ

2 Phương pháp nghiên cứu

2.1 Phương pháp cấy chuyển và bảo

quản giống

2.2 Phân lập, chọn khuẩn lạc sạch, tiêu

biểu

Môi trường cao nấm men-thạch YEA:

- 4g cao nấm men

- 20g glucoza

- 1 lít nước

2.3 Phương pháp xác định hoạt độ thuỷ

phân enzim bằng cách quan sát vòng thủy phân của khuẩn lạc

- Môi trường xác định hoạt tính amilase:

- Pepton: 0.05%

- KCl : 0.01%

- MgSO4 7H2O : 0.05%

- (NH4)2SO4 : 0.01%

- NaH2PO4 : 0.01%

- Tinh bột : 2%

- Agar : 0.8- 1%

Môi trường xác định hoạt tính xellulose :

– MgSO4 7H2O : 0.5g

– NaCl : 0.5g

– FeSO4.7H2O : 0.01g

– MnSO4.H2O : 0.01g

– NH4NO3 : 0.3g

– CMC : 10g

– Agar : 12g

2.4 Phương pháp nghiên cứu sự sinh

trưởng của nấm men Pseudozyma

aphidis L35

Khảo sát môi trường cacbua hydro khi:

Có agar:

- Na2HPO4 : 2g

- K2SO4 : 0.17g

- NH4NO3 : 4g

- KH2PO4 : 0.53g

- MgSO4.7H2O : 0.1g

Agar : 5g

Không có agar:

- KH2PO4 : 0.3g

- MgSO4.7H2O : 0.4g

- Na2HPO4 : 0.7g

- Nước cất : 1lít

2.5 Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy đến sự sinh trưởng và phát

triển của nấm men Pseudozyma

aphidis

2.6 Nghiên cứu ảnh hưởng của pH ban đầu đến sự sinh trưởng và phát triển của nấm men Pseudozyma aphidis

III Kết quả và thảo luận

3.1 Phân lập, chọn khuẩn lạc sạch tiêu

biểu

Hình ảnh khuẩn lạc nấm men P aphidis khi quan sát ngày đầu tiên

Hình ảnh khuẩn lạc nấm men P aphidis khi quan sát ngày thứ 3

3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy và pH ban đầu đến sự sinh

trưởng và phát triển của nấm men

Pseudozyma aphidis L35

Nhiệt độ nuôi,

pH

Sự sinh trưởng (OD

600nm) Ngày

thú 2 Ngày thứ 4 Ngày thứ 6

30 o C pH=6 1.048 1.040 0.830

pH=7 1.280 1.258 1.207

35 o C pH=6 0.949 0.941 0.912

pH=7 0.871 0.863 0.851

3.3 Khả năng thủy phân các nguồn

cácbon khác nhau của chủng nấm men

Pseudozyma aphidis

3.2.1 Khả năng thủy phân xellulose

Hình ảnh vòng thủy phân CMC của chủng nấm men P aphidis L35

3.2.2 Khả năng thủy phân tinh bột sắn

Hình ảnh vòng thủy phân tinh bột sắn của chủng nấm men P aphidis L35

3.3 Nghiên cứu khả năng phân hủy

nguồn cacbua hydro của chủng nấm

men Pseudozyma aphidis L35

Khả năng phân hủy nguồn cacbua hydro của chủng nấm men

Pseudozyma aphidis L35 khi có agar

stt

Tên môi trường Sự sinh trưởng(OD 600nm)

Ngày đầu Ngày thứ 5 Ngày thứ 10

2 Không Oil + L35 0.033 0.034 0.036

4 Có Oil + L35 0.420 0.438 0.440

Khả năng phân hủy nguồn cacbua hydro của chủng nấm men

Pseudozyma aphidis L35 khi có agar

stt

Tên môi trường Ngày đầu Ngày thứ 5 Ngày thứ 10Sự sinh trưởng(OD 600nm)

1 Không Oil + L35 0.091 0.006 0.001

2 Có Oil + L35 0.107 0.062 0.034

• TÀI LIỆU THAM KHẢO

• Lê Thanh Mai, Nguyễn Thị Hiền, Phạm Thu Thủy, Nguyễn Thị Hằng, Lê Thị

Lan Chi, 2005 Các phương pháp phân tích ngành công nghệ lên men NXB

Khoa học và kỹ thuật, Hà Nội

• Nguyễn Văn Mùi, 2001 Thực hành hoá sinh học., NXB Khoa học và kỹ

thuật Hà Nội

• PGS.TS Lương Đức Phẩm, 1997 Công nghệ Vi sinh vật, NXB Nông

nghiệp, Hà Nội

• Đặng Thị Thu, Nguyễn Thị Xuân Sâm, Tô Kim Anh, 1997 Thí nghiệm hoá

sinh công nghiệp Bộ môn hoá sinh, Viện công nghệ sinh học và công nghệ

thực phẩm, trường ĐHBKHN

• Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, 2003 Vi sinh vật học, NXB Giáo

dục

• Tangarone, B., Royer, J.C and Nakas, J.P (1989) Purification of an endo- (1,3)-D-glucanase from Trichoderma longibrachiatum Appl Environ

Microbiol 55: 177-184

• Abdullah, N (2004) Strategies for expanded bed purification of recombinant protein PhD Thesis, University of Cambridge, United Kingdom

• Saha, B.C (2003) production, purification and properties of endoglucanase from a newly isolated strain of Murcor circinelloides Process Biochemistry, 39:1871-1876

• Wang, N.S (2003) Glucose assay by dinitrosalicylic colorimetric method

• Central venous catheter infection associated with Pseudozyma aphidis in a child with short gut syndrome Shau-Shau Lin,1 Thomas Pranikoff, Shani F Smith, Mary E Brandt, Kemery Gilbert, Elizabeth L Palavecino and Avinash

K Shetty Journal of Medical Microbiology (2008), 57, 516–518.