Công nghệ tế bào thực vật GVHD: Huỳnh Văn Kiệt Bài 1: LÀM QUEN PHỊNG THÍ NGHIỆM NI CẤY MƠ TẾ BÀO THỰC VẬT VÀ PHA CHẾ DUNG DỊCH MẸ I Giới thiệu hệ thống phịng thí nghiệm NCM&TBTV: Phịng thí nghiệm ni cấy mơ tế bào thực vật đại thiết kế phù hợp với tính chất dây chuyền loại cơng việc có sơ đồ tổng quát sau: Phòng rửa, sản xuất nước cất sấy, hấp Phòng chuẩn bị mơi trường Phịng cấy vơ trùng Phịng ni Bên cạnh phịng thí nghiệm phải có hệ thống nhà kính, nhà lưới vườn ươm để trồng lấy nguyên liệu nuôi cấy trồng tái sinh trình chọn lọc in vitro Các thiết bị chủ yếu phòng 1.1 Phòng rửa, sản xuất nước cất sấy, hấp Máy cất nước lần (12-20 lít/giờ) Máy cất nước lần (4 lít/ giờ) Máy sản xuất nước khử ion Tủ sấy 60-6000C Nồi hấp mơi trường (Autoclave) 1.2 Phịng cấy vơ trùng Laminar Quạt thơng gió Bộ dụng cụ cấy gồm dụng cụ cấy khử trùng 1.3 Phòng ni Các giàn đèn huỳnh quang nhiều ngăn, có chỗ chiếu sáng chỗ để bình ni cấy từ 2000-3000 lux Ở ta sử dụng đèn compact 18W có hệ thống cài thời gian tự động, tận dụng tối đa ánh sáng tự nhiên cửa kính Máy điều hoà nhiệt độ, chỉnh t0 =±250C Máy lắc nằm ngang 100-200 vòng/ phút Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Công nghệ tế bào thực vật GVHD: Huỳnh Văn Kiệt 1.4 Phòng chuẩn bị pha môi trường Máy đo pH Máy khuấy từ Cân phân tích 10-4g Cân kỹ thuật 10-2g Bếp điện Microwave II Pha Stock( dung dịch mẹ): 2.1 Chuẩn bị môi trường Murashige- Skoog (MS, 1962) Chia môi trường làm phần: MS1, MS2, MS3, MS4, MS5 (Bảng 2.1) Dung dịch mẹ Nồng độ (mg/l) MS1: KNO3 KH2PO4 NH4NO3 MgSO4 MS2: CaCl2 MS3 : H3BO3 MnSO4.4H2O CoCl2.6H2O CuSO4.7H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O KI MS4: FeSO4 Na2EDTA MS5: Myo-Inositol Thiamine.HCl Pyridoxine.HCl Acid nicotic Glycine 1900 170 1650 370 440 6,2 22,3 0,025 0,025 8,6 0,25 0,83 27,8 37,3 100 0,1 0,5 0,5 Nồng độ dung dịch mẹ (g/200 ml) 19 1,7 (x10) 16,5 3,7 (x 20) { 6,64 0,124 0,338 0,5 mg (x20) 0,5 mg 0,213 mg 16,6 mg 0,556 (x20) 0,746 2 mg (x20) 10 mg 10 mg 40 mg Dung tích dùng cho lít mơi trường {20 ml {10 ml {10 ml {10 ml {10 ml Cách tiến hành pha dung dịch MS trên: - Cân hóa chất bảng với số lượng ghi cụ thể cột pha 200 ml nước cất lần trình tự tiến hành theo thứ tự hóa chất ghi bảng Báo cáo thực hành SVTH: Phan Thị Thảo Hiếu Công nghệ tế bào thực vật GVHD: Huỳnh Văn Kiệt - Với hố chất cân với số lượng có đơn vị g dùng cân kỹ thuật, đơn vị mg phải dùng cân phân tích - Chú ý pha dung dịch mẹ pha với lượng vừa phải (200 ml) tránh tượng kết tủa hoá chất dung dịch MS Mỗi dung dịch MS Nên để lọ đựng dung dịch riêng rẽ bảo quản tủ lạnh ngăn 40C để tránh hỏng hóa chất - Phải đánh tan hoá chất cốc thuỷ tinh nhỏ với lượng nước vừa đủ sau tráng lại kỹ( với tổng cộng lượng nước phải khơng lớn tổng thể tích MS cần thiết,