1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHAN NGUYỄN THANH VÂN ỨNG DỤNG KỸ THUẬT KHUẾCH ĐẠI GIEN KHẢO SÁT CÁC TỔ HỢP GIEN THƯỜNG GẶP TRONG BỆNH LÝ BẠCH CẦU CẤP LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC TP Hồ Chí Minh – Năm 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHAN NGUYỄN THANH VÂN ỨNG DỤNG KỸ THUẬT KHUẾCH ĐẠI GIEN KHẢO SÁT CÁC TỔ HỢP GIEN THƯỜNG GẶP TRONG BỆNH LÝ BẠCH CẦU CẤP Chuyên ngành: Huyết Học Mã số: 62.72.25.01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Tấn Bỉnh PGS Bửu Mật TP Hồ Chí Minh – Năm 2013 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận án PHAN NGUYỄN THANH VÂN MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình, biểu đồ, sơ đồ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Di truyền phân tử ý nghĩa bệnh bạch cầu cấp dòng tủy 1.2 Di truyền phân tử ý nghĩa bệnh bạch cầu cấp dòng lympho 1.3 Nguyên tắc ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thiết kế nghiên cứu 2.2 Đối tượng nghiên cứu 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.4 Phân tích số liệu 2.5 Vấn đề y đức Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Đặc điểm chung quần thể nghiên cứu 3.2 Các tổ hợp gien lúc chẩn đoán 3.3 Theo dõi điều trị kỹ thuật RT-PCR 3.4 Triển khai kỹ thuật PCR định lượng theo dõi điều trị Chương 4: BÀN LUẬN 4.1 Đặc điểm chung quần thể nghiên cứu 4.2 Các tổ hợp gien lúc chẩn đoán 4.3 Theo dõi điều trị kỹ thuật RT-PCR 4.4 Triển khai kỹ thuật PCR định lượng theo dõi điều trị 4.5 Ưu điểm hạn chế nghiên cứu KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Trang i ii iii iv viii xi 4 17 27 35 35 35 36 51 52 53 53 58 71 72 84 84 86 95 98 103 105 106 xii xiii xxviii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT A Adenin (base nitơ) ACD Acid Citrate Dextrose (Chất chống đơng) AL Activation Loop, Vịng hoạt hóa AP2α Activating Protein transcription factor α, Yếu tố phiên mã α APL Acute ProMyelocytic Leukemia, Bệnh bạch cầu cấp dòng tủy, thể M3 (tiền tủy bào) ARF ADP-ribosylation factor ASH American Society of Hematology, Hội Huyết học Hoa kỳ ATRA All Trans Retinoic Acid BCC Bạch cầu cấp BCCDL Bạch cầu cấp dịng lymphơ BCCDL-B Bạch cầu cấp dịng lymphơ B BCCDL-T Bệnh bạch cầu cấp dịng lymphơ T BCCDT Bạch cầu cấp dịng tủy BCMDT Bạch cầu mạn dòng tủy BN Bệnh nhân BV TMHH TP HCM Bệnh viện Truyền máu Huyết học thành phố Hồ Chí Minh C Cytosin (base nitơ) CALGB the Cancer and Leukemia Group B CBF Core Binding Factor, Yếu tố gắn lõi cDNA Complemetary DeoxyriboNucleic Acid CEBPA CCAAT/enhancer binding protein (C/EBP), alpha CGH Comparative Genomic Hybridization, Lai so sánh gien CIR Cumulative Incidence of Relapse, Tồn nguy tái phát CR Complete Remission, Lui bệnh hoàn toàn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ct Threshold Cycle ddNTP dideoxynucleotide triphosphate del Deletion (Mất nhiễm sắc thể hay đoạn NST) der Derivative (Nhiễm sắc thể chuyển vị) DEPC DiEthyl PyroCarbonate DNA DeoxyriboNucleic Acid dNTP deoxynucleotide triphosphate EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid F Fluorophore -F Forward Primer (Mồi xuôi) FAB French – American - British FISH Fluorescence In Situ Hybridization (Lai huỳnh quang chỗ) G Guanin (base nitơ) inv Inversion, Đảo đoạn IPTG Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside ITD Internal Tandem Duplication JM Vùng juxtamembrane LB Lysogeny Broth (Dung dịch nuôi cấy vi khuẩn) MB/ M-BCR Major BCR/ABL mB/ m-BCR Minor BCR/ABL M-FISH Multiplex Fluorescence In Situ Hybridization Lai phức hợp huỳnh quang chỗ MRC United Kingdom Medical Research Council mRNA Messenger RiboNucleic Acid N Bắt đầu protein, gọi đầu N NcoR Nuclear CoRepressor, Chất đồng ức chế nhân DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT NST Nhiễm sắc thể OS Overall Survival , Thời gian sống chung p Cánh ngắn NST P Giá trị có ý nghĩa P thống kê P53 tumor protein 53, Protein ức chế khối u PBS (-) Phosphate Buffered Saline, without potassium PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuếch đại gien) Ph Philadelphia (Nhiễm sắc thể) Ph+ Có diện nhiễm sắc thể Philadelphia pmol Pico mol q Cánh dài NST Q Quencher Q-PCR Quantitative-PCR (PCR Định lượng gien) RQ-PCR Realtime Quantitative-PCR R Reporter RA Retinoic Acid RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism RFS Relapse-Free Survival, Thời gian sống không tái phát rRNA Ribosomal RiboNucleic Acid RNA RiboNucleic Acid RT-PCR Reverse Transcriptase-PCR (Phản ứng khuếch đại gien phiên mã ngược) SCF Stem Cell Factor, Yếu tố tế bào gốc SKY Spectral Karyotyping T Translocation, Chuyển đoạn T Thymin (base nitơ) TBE Tris/Borate/EDTA DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Th hybridization temperature TKD Tyrosine Kinase Domain TL Tiên lượng Tm melting temperature (nhiệt độ nóng chảy) TP HCM Thành phố Hồ Chí Minh tPA Tissue Plasminogen Activator tRNA Transfer RiboNucleic Acid (RNA vận chuyển) U Uracil (base nitơ) UV Ultraviolet (Tia cực tím) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Phân nhóm tiên lượng BCCDT theo kết NST gien Bảng 1.2 Trang Tần suất ý nghĩa dự hậu dấu ấn di truyền học phân tử bệnh nhân BCCDT Bảng 1.3 15 16 Tiên lượng cho BN BCCDT dựa kết hợp đột biến gien di truyền học 17 Bảng 1.4 Tần suất bất thường NST BCCDL 18 Bảng 1.5 Các bất thường NST, tần suất nhóm nguy BCCDL 26 Bảng 1.6 Phân nhóm tiên lượng BCCDL theo kết NST gien 27 Bảng 2.1 Thông tin đoạn mồi khảo sát tổ hợp gien BCCDT Bảng 2.2 41 Thông tin đoạn mồi khảo sát tổ hợp gien BCCDL 44 Bảng 2.3 Danh sách mồi probe tương ứng với tổ hợp gien 50 Bảng 3.1 Phân phối BCCDT theo tuổi 53 Bảng 3.2 Phân phối BCCDT theo giới 54 Bảng 3.3 Phân phối BCCDT theo tủy đồ 54 Bảng 3.4 Phân phối BCCDT theo dấu ấn miễn dịch tế bào 54 Bảng 3.5 Xác định mức độ phù hợp tủy đồ dấu ấn miễn dịch tế bào BCCDT 55 Bảng 3.6 Phân phối BCCDL theo tuổi 56 Bảng 3.7 Phân phối BCCDL theo giới 56 Bảng 3.8 Phân phối BCCDL theo tủy đồ 56 Bảng 3.9 Phân phối BCCDL theo dấu ấn miễn dịch tế bào 57 Bảng 3.10 Phân phối BCCDL theo nhóm tuổi giới 57 Bảng 3.11 Phân phối BCCDL theo tủy đồ giới 58 Bảng 3.12 Phân phối BCCDL theo dấu ấn miễn dịch tế bào giới 58 10 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.13 Kết tổ hợp gien BCCDT lúc chẩn đốn Trang 59 Bảng 3.14 Phân nhóm tiên lượng dựa vào kết tổ hợp gien BCCDT 60 Bảng 3.15 Kết tổ hợp gien BCCDT phát Multiplex PCR lúc chẩn đoán 61 Bảng 3.16 Các tổ hợp gien BCCDT phát RT-PCR Multiplex PCR lúc chẩn đoán 62 Bảng 3.17 Phân nhóm tiên lượng BCCDT dựa vào kết RT-PCR Multiplex PCR 62 Bảng 3.18 Phân phối BCCDT theo tổ hợp gien nhóm tuổi 63 Bảng 3.19 Phân phối BCCDT theo tổ hợp gien giới 63 Bảng 3.20 Phân phối BCCDT theo tổ hợp gien tủy đồ 64 Bảng 3.21 Phân phối BCCDT, thể M2 tổ hợp gien AML1/ETO 64 Bảng 3.22 Phân phối BCCDT, thể M3 tổ hợp gien PML/RARA 64 Bảng 3.23 Phân phối BCCDT theo tổ hợp gien dấu ấn miễn dịch tế bào Bảng 3.24 Kết tổ hợp gien BCCDL lúc chẩn đốn 65 65 Bảng 3.25 Phân nhóm tiên lượng dựa vào kết tổ hợp gien BCCDL 66 Bảng 3.26 Kết tổ hợp gien BCCDL phát Multiplex PCR lúc chẩn đoán 67 Bảng 3.27 Các tổ hợp gien BCCDL phát RT-PCR Multiplex PCR lúc chẩn đoán 68 Bảng 3.28 Phân nhóm tiên lượng BCCDL dựa vào kết RT-PCR Multiplex PCR 68 Bảng 3.29 Phân phối BCCDL theo tổ hợp gien nhóm tuổi 69 Bảng 3.30 Phân phối BCCDL theo nhóm tuổi tổ hợp gien BCR/ABL 69 151 Phụ lục Phiếu đồng ý tham gia nghiên cứu BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC Địa chỉ: 118 Hồng Bàng, Phường 12, Quận 5, TP HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Điện thoại: 84-8-39571842 TP HCM, ngày tháng năm PHIẾU ĐỒNG Ý THAM GIA NGHIÊN CỨU Mục đích nghiên cứu: Ứng dụng kỹ thuật khuếch đại gien khảo sát tổ hợp gien thường gặp bệnh lý bạch cầu cấp, góp phần phân loại nhóm tiên lượng bệnh theo dõi điều trị Qui trình nghiên cứu: - Đối tượng mời tham dự: Bệnh nhân chẩn đoán xác định bạch cầu cấp dòng tủy hay lympho - Loại thơng tin thu thập: Đính kèm Phiếu thu thập thơng tin bệnh nhân - Tồn thơng tin bệnh nhân lưu trữ hồ sơ bệnh án tuân thủ bảo mật, lưu trữ theo Qui chế bệnh viện Trong công bố, kết nghiên cứu, tên bệnh nhân mã hóa cách viết in hoa chữ Quyền lợi tham gia: Bệnh nhân hưởng lợi ích ứng dụng kỹ thuật để góp phần phân nhóm tiên lượng nâng cao hiệu trình điều trị Nguy người tham gia nghiên cứu (trực tiếp gián tiếp): khơng có Nghiên cứu viên: ThS BS PHAN NGUYỄN THANH VÂN Điện thoại: 0919691770 Địa liên lạc cần giải đáp thắc mắc/khiếu nại: PHÒNG KẾ HOẠCH TỔNG HỢP Địa chỉ: 201 Phạm Viết Chánh, Phường Nguyễn Cư Trinh, Quận 1, TP HCM Đồng thuận cam đoan: Sau giải thích cung cấp thơng tin đầy đủ nghiên cứu, tự nguyện đồng ý việc sử dụng mẫu máu/tủy để thực xét nghiệm tham gia vào nghiên cứu (Ký tên, ghi rõ họ tên) 152 Phụ lục Danh sách bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu Bảng 7.1 Danh sách bệnh nhân BCCDT tham gia vào nghiên cứu STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH BÙI MINH H 1057-1 Nam 1962 NGUYỄN THÀNH T 1082-1 Nam 1983 LÝ THU H 1222-1 Nữ 1974 LÊ THỊ KIM L 1355-1 Nữ 1961 ĐÀO TRỌNG N 1399-1 Nam 1994 KÂNG S 1402-1 Nam 1965 PHẠM THÙY T 1409-1 Nữ 1998 NGUYỄN THỊ THANH T 1414-1 Nữ 1984 LƯU XUÂN M 1424-1 Nữ 1966 10 PHẠM TRUNG T 1425-1 Nam 2008 11 LÊ QUANG T 1426-1 Nam 1989 12 LÊ QUANG H 1427-1 Nam 1978 13 TRẦN VĂN T 1428-1 Nam 1984 14 NGUYỄN VĂN T 1429-1 Nam 1965 15 HUỲNH QUỐC T 1433-1 Nam 1984 16 NGUYỄN QUỐC T 1443-1 Nam 1994 17 BIỆN CÔNG P 1447-1 Nam 1992 18 NGUYỄN THỊ PHƯƠNG T 1449-1 Nữ 1968 19 LÊ THANH T 1461-1 Nữ 2003 20 NGUYỄN HỮU N 1465-1 Nam 1965 21 NGUYỄN THỊ BÍCH T 1470-1 Nữ 1975 22 NGUYỄN THỊ Â 1471-1 Nữ 1948 23 LÊ THỊ MINH T 1472-1 Nữ 1948 24 ĐOÀN THỊ TUYẾT T 1477-1 Nữ 1992 25 HUỲNH NGỌC KIM D 1486-1 Nữ 2008 26 PHẠM VĂN Q 1490-1 Nam 1952 27 LÊ THANH S 1501-1 Nam 2009 153 STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH 28 LÊ TRUNG D 1502-1 Nam 1971 29 LÊ TUẤN A 1515-1 Nam 1998 30 TRẦN THỊ THU H 1517-1 Nữ 1966 31 NGUYỄN THỊ MINH C 1520-1 Nữ 2010 32 TRƯƠNG THỊ THANH T 1525-1 Nữ 1971 33 TRẦN KHÁNH T 1534-1 Nam 1979 34 VŨ THỊ N 1540-1 Nữ 1973 35 DƯƠNG THỊ QUỲNH M 1547-1 Nữ 1992 36 ĐẶNG THỊ H 1550-1 Nữ 1987 37 THÁI TÙNG N 1554-1 Nam 2001 38 VÕ ANH T 1556-1 Nữ 2000 39 K' 1559-1 Nam 1966 40 TRẦN THÀNH N 1560-1 Nam 2007 41 NGUYỄN THIÊN Â 1561-1 Nam 1991 42 NGUYỄN HỮU P 1567-1 Nam 1981 43 NGUYỄN MINH M 1568-1 Nam 1966 44 TRẦN MINH H 1570-1 Nam 1967 45 TRƯƠNG VĂN K 1572-1 Nam 1949 46 PHẠM THỊ MINH K 1573-1 Nữ 1992 47 PHẠM PHƯƠNG T 1583-1 Nữ 2008 48 NGUYỄN ANH T 1584-1 Nam 1958 49 ĐỒNG THI NHƯ Q 1591-1 Nữ 2000 50 TRẦN QUANG S 1595-1 Nam 1957 51 PHAN THỊ N 1604-1 Nữ 1956 52 HOÀNG BÁ N 1613-1 Nam 1953 53 VÕ THỊ KIM T 1616-1 Nữ 1951 54 PHAN THỊ TRINH T 1618-1 Nữ 2005 55 TRẦN TRUNG H 1619-1 Nam 1997 56 NGUYỄN QUANG V 1623-1 Nam 1954 57 HOÀNG HỮU P 1633-1 Nam 2008 58 NGUYỄN NGỌC T 1642-1 Nam 1955 154 STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH 59 ĐỖ VĂN C 1650-1 Nam 1971 60 HUỲNH THỊ MỸ L 1657-1 Nữ 1972 61 NGUYỄN THỊ M 1664-1 Nữ 1966 62 LÊ NGỌC H 1667-1 Nam 1985 63 TRẦN THỊ MỸ H 1672-1 Nam 1996 64 LÊ THỊ THU H 1678-1 Nữ 2003 65 NGUYỄN NGỌC YẾN V 1679-1 Nữ 2009 66 NGUYỄN NGỌC H 1680-1 Nam 1973 67 NGUYỄN THỊ KIM L 1684-1 Nữ 1969 68 CHAU THỊ T 1686-1 Nữ 1996 69 CẤN THANH B 1688-1 Nam 1949 70 TRẦN TUẤN A 1689-1 Nam 2010 71 NGUYỄN THỊ MAI T 1711-1 Nữ 1999 72 NGUYỄN THỊ H 1716-1 Nam 1954 73 NGÔ THANH T 1733-1 Nữ 2009 74 TRẦN THỊ THANH T 1735-1 Nữ 1964 75 NGUYỄN SĨ Đ 1737-1 Nam 1946 76 VÕ KHẮC H 1742-1 Nam 1945 77 LÊ HẢI L 1775-1 Nữ 1983 78 TRẦN CÔNG L 1780-1 Nam 1927 79 NGUYỄN THỊ C 1820-1 Nữ 1951 80 ĐINH THỊ H 1821-1 Nữ 1974 81 THÁI QUANG L 1823-1 Nam 2003 82 NGÔ THỊ THÙY D 1831-1 Nữ 1966 83 TRẦN THỊ YẾN N 1841-1 Nữ 2008 84 TRÀ THỊ THIÊN T 1843-1 Nữ 1982 85 NGUYỄN THỊ HỒNG V 1848-1 Nam 1984 86 NGUYỄN THỊ NGỌC T 1849-1 Nam 1959 87 LƯU THỊ G 1852-1 Nam 1958 88 NGUYỄN VĂN D 1856-1 Nam 1968 89 TRẦN T 1863-1 Nam 1968 155 STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH 90 PHẠM THẾ V 1873-1 Nam 1955 91 DƯƠNG LÊ HUYỀN T 1882-1 Nữ 1995 92 LÊ VĂN T 1887-1 Nam 1969 93 LÊ TRUNG H 1889-1 Nam 1976 94 LÊ TẤN C 1891-1 Nam 1972 95 LÊ HUY K 1893-1 Nam 1990 96 NGUYỄN THỊ L 1899-1 Nữ 1989 97 TRẦN THỊ NGỌC N 1901-1 Nữ 1987 98 PHAN TRUNG Đ 1903-1 Nam 2005 99 NGUYỄN VĂN P 1910-1 Nam 1970 100 NGUYỄN THỊ THANH N 1912-1 Nữ 1984 101 PHAN VĂN D 1914-1 Nam 1958 102 ĐẶNG THỊ LIÊN H 1916-1 Nữ 1957 103 NGUYỄN NGUYỄN PHÚ T 1920-1 Nam 1999 104 VÕ DUY N 1922-1 Nữ 2007 105 THẠCH L 1924-1 Nam 1956 106 VÕ THỊ HỒNG L 1928-1 Nữ 1996 107 BÙI NGUYỄN HOÀNG A 1941-1 Nam 2009 108 VÕ THỊ BÍCH L 1943-1 Nữ 1969 109 HÀ BẢO A 1946-1 Nữ 2009 110 NGUYỄN THỊ THU H 1951-1 Nữ 1995 111 TĂNG GIA H 1952-1 Nam 1996 112 TRẦN THỊ KIM T 1955-1 Nữ 1984 113 NGUYỄN VĂN T 1957-1 Nam 1957 114 BÙI ĐỖ MINH T 1958-1 Nam 1997 115 NGUYỄN QUANG T 1959-1 Nam 1972 116 VÕ THỊ THANH L 1975-1 Nữ 1980 117 NGUYỄN VĨNH N 1977-1 Nam 1995 118 NGUYỄN THỊ N 1981-1 Nữ 1975 119 TRIỆU QUỐC D 1986-1 Nam 2008 120 VÕ DUY S 1989-1 Nam 1958 156 STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH 121 NGUYỄN MẠNH B 1991-1 Nam 1950 122 NGUYỄN QUANG U 1992-1 Nam 1955 123 ĐẶNG QUỐC C 1993-1 Nam 1943 124 NGUYỄN VĂN B 2000-1 Nam 1981 125 LÊ THỊ H 2001-1 Nữ 1991 126 DƯƠNG TRÍ T 2003-1 Nam 2010 127 LA HÙNG V 2007-1 Nam 1972 128 ONG THỊ KIM H 2020-1 Nữ 1979 129 TRẦN CAO M 2022-1 Nam 1997 130 PHẠM DOÃN M 2032-1 Nam 2007 131 TRẦN THỊ LAN T 2043-1 Nữ 1968 132 NGUYỄN THỊ NGỌC T 2054-1 Nữ 1958 133 PHAN THANH N 2070-1 Nữ 1985 134 NGUYỄN THỊ THU H 2073-1 Nữ 1989 135 ĐỔNG VĂN A 2076-1 Nam 1952 136 PHAN THỊ THÔNG H 2093-1 Nữ 1954 137 TRƯƠNG THỊ C 2096-1 Nữ 1980 138 NGUYỄN THỊ CẨM H 2121-1 Nữ 1965 139 ĐÀM PHƯƠNG N 2136-1 Nữ 2004 140 TRẦN THỊ T 2138-1 Nữ 1967 141 NGUYỄN NGỌC T 2142-1 Nữ 1974 142 ĐINH VĂN K 2177-1 Nam 1961 143 HUỲNH THỊ KIM L 2200-1 Nữ 1973 144 NGUYỄN THỊ ANH L 2205-1 Nữ 1949 145 PHẠM NGUYỄN HOÀNG L 2226-1 Nữ 2004 146 LÝ KHÁNH B 2247-1 Nam 1965 147 ĐẬU THẾ C 2250-1 Nam 1952 148 NGUYỄN THỊ THÚY L 2267-1 Nữ 1975 149 TRẦN MINH N 2268-1 Nam 1982 150 NGUYỄN NGỌC PHƯƠNG A 2271-1 Nữ 2006 151 NGUYỄN THỊ TRANG NG 2279-1 Nữ 1975 157 STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH 152 NGUYỄN THỊ T 2283-1 Nữ 1986 153 BÙI THỊ B 2285-1 Nữ 1970 154 NGUYỄN TRUNG 2287-1 Nam 1958 155 NGUYỄN HỮU N 312-1 Nam 1965 156 ĐINH THỊ TUYẾT N 372-1 Nữ 1977 157 LÊ NGUYỄN HOÀNG A 547-1 Nam 2000 158 NGUYỄN THỊ T 672-1 Nữ 1960 159 NGUYỄN THỊ H 803-1 Nữ 1966 160 NGUYỄN ĐÌNH H 874-1 Nam 1989 161 TRẦN HỒNG T 895-1 Nữ 1978 162 ĐỖ THỊ H 927-1 Nữ 1971 158 Bảng 7.2 Danh sách bệnh nhân BCCDL tham gia vào nghiên cứu STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH VŨ ĐÌNH LÂM BẢO H 1012-1 Nữ 2003 LÊ THỊ THẢO T 1276-1 Nữ 2002 PHẠM NGỌC PHƯƠNG V 1400-1 Nữ 2007 NGUYỄN LOAN A 1405-1 Nữ 2005 PHẠM DUY K 1413-1 Nam 1997 PHẠM PHI N 1416-1 Nữ 2004 NGUYỄN THỊ KIM C 1419-1 Nữ 2006 PHẠM HỮU C 1422-1 Nam 1976 NGUYỄN LÊ B 1434-1 Nam 1998 10 NGUYỄN NGỌC MINH T 1436-1 Nam 1995 11 NGUYỄN TRỌNG N 1442-1 Nam 1998 12 TRẦN LƯU QUANG T 1445-1 Nam 2003 13 PHẠM THỊ A 1450-1 Nữ 1954 14 HUỲNH QUỐC Đ 1451-1 Nữ 1988 15 NGUYỄN THANH T 1453-1 Nữ 1999 16 LÊ TRÂM A 1454-1 Nữ 2009 17 ĐÀO NGUYỄN TRẦN H 1456-1 Nam 2005 18 TRẦN THỊ M 1459-1 Nữ 2004 19 TRẦN NGỌC N 1460-1 Nữ 2005 20 PHẠM BÙI UYÊN T 1462-1 Nữ 2007 21 NGUYỄN VĂN H 1463-1 Nam 1972 22 NGUYỄN TRẦN MINH L 1464-1 Nam 1997 23 LÊ THÚY M 1473-1 Nữ 1968 24 PHAN HUỲNH THẾ V 1479-1 Nam 2003 25 NGUYỄN HOÀI B 1484-1 Nam 2007 26 NGÔ THỊ THIÊN K 1487-1 Nữ 1992 27 TẢ TẤN T 1488-1 Nam 1994 28 HỒ NGUYỄN PHƯƠNG H 1498-1 Nữ 1999 29 NGUYỄN THỊ TRANG H 1504-1 Nữ 2008 159 STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH 30 ĐỖ THỊ TRÚC V 1505-1 Nữ 1981 31 HUỲNH PHÚ Q 1511-1 Nam 2005 32 NGUYỄN DUY B 1516-1 Nam 2008 33 PHẠM THỊ HỒNG P 1518-1 Nữ 1981 34 DƯƠNG THỊ QUỲNH N 1519-1 Nữ 2006 35 VÕ NGỌC BÍCH T 1524-1 Nữ 2005 36 NGUYỄN THỊ H 1526-1 Nữ 2005 37 NGUYỄN QUỐC A 1533-1 Nam 2006 38 TRẦN HOÀI V 1535-1 Nam 2007 39 NGUYỄN HỮU C 1536-1 Nam 2008 40 LÝ BỘI K 1538-1 Nữ 2007 41 NGUYỄN THỊ TRÚC P 1541-1 Nữ 2002 42 NGUYỄN HUỲNH N 1548-1 Nữ 1997 43 TĂNG THỊ TUYẾT T 1552-1 Nữ 2003 44 NGUYỄN NGỌC PHƯƠNG T 1577-1 Nữ 2005 45 HUỲNH THỊ MỸ D 1578-1 Nữ 2005 46 DỊP DIỆU K 1579-1 Nữ 1999 47 NGUYỄN MINH K 1589-1 Nam 2003 48 NGUYỄN KHÁNH L 1590-1 Nam 2010 49 ĐẶNG QUỐC K 1592-1 Nam 2007 50 NGUYỄN THỊ MỘNG L 1598-1 Nữ 1989 51 ĐÀO THẢO N 1599-1 Nữ 2010 52 NGUYỄN THỊ THANH T 1600-1 Nữ 1960 53 CHUNG VĨNH P 1601-1 Nam 2008 54 LÊ NHẬT H 1606-1 Nam 2008 55 NGUYỄN NGỌC H 1607-1 Nam 1990 56 NGUYỄN ĐỖ ANH K 1609-1 Nam 2006 57 CHÂU HOÀNG S 1610-1 Nam 2007 58 NGUYỄN QUỲNH C 1615-1 Nữ 2001 59 CHÂU NGỌC KHÁNH L 1617-1 Nữ 2004 160 STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH 60 ĐỖ QUỐC H 1620-1 Nam 2002 61 PHẠM TẤN K 1625-1 Nam 2006 62 PHAN HỒ KIỀU N 1628-1 Nữ 2005 63 HỒ KIM M 1632-1 Nữ 2008 64 TRẦN VĂN T 1634-1 Nam 2000 65 LÊ THỊ T 1637-1 Nữ 1978 66 NGUYỄN MẬU Đ 1639-1 Nam 1998 67 NGUYỄN THỤY THANH T 1648-1 Nữ 1998 68 TRẦN NGỌC T 1654-1 Nam 2001 69 NGUYỄN NHƯ H 1656-1 Nam 2004 70 PHẠM VĂN Đ 1666-1 Nam 2007 71 LÊ NGỌC H 1667-1 Nam 1985 72 KHẤU THANH C 1669-1 Nam 2004 73 NGUYỄN DƯ T 1673-1 Nam 2007 74 TRỊNH HOÀNG N 1676-1 Nữ 2005 75 NGUYỄN ĐỨC NAM H 1681-1 Nam 1973 76 LÊ TRƯỜNG G 1697-1 Nam 2005 77 PHẠM HOÀNG BẢO L 1705-1 Nam 2007 78 CAO THỊ K 1708-1 Nữ 1979 79 KHIẾU THỊ LIỄU T 1709-1 Nữ 1961 80 NGUYỄN THỊ ÁI N 1719-1 Nữ 2002 81 LÊ THANH S 1720-1 Nam 2008 82 VÕ NGUYỄN HỮU K 1721-1 Nam 2007 83 VĂN THỊ H 1724-1 Nữ 1959 84 NGUYỄN PHƯƠNG Q 1726-1 Nữ 2006 85 NGUYỄN NGỌC T 1745-1 Nam 2005 86 NGUYỄN TIẾN M 1750-1 Nam 1963 87 NGUYỄN THIÊN K 1765-1 Nữ 1998 88 DIỆP THẾ V 1767-1 Nam 2003 89 PHAN NGUYỄN BẢO M 1777-1 Nam 2008 161 STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH 90 HUỲNH NGỌC H 1779-1 Nam 1976 91 LÊ THỊ KIỀU Đ 1782-1 Nữ 2001 92 BÙI THỊ NGỌC T 1789-1 Nữ 2005 93 ĐẶNG THỊ THU H 1794-1 Nữ 1966 94 HUỲNH NGỌ M 1803-1 Nam 1997 95 HOÀNG TRIỆU M 1816-1 Nữ 2001 96 NGUYỄN PHẠM QUANG H 1822-1 Nam 2008 97 PHẠM QUANG K 1826-1 Nam 2009 98 ĐINH TẤN C 1830-1 Nam 2007 99 PHẠM THỊ Q 1851-1 Nam 1987 100 HUỲNH CAO THANH H 1868-1 Nam 2008 101 DƯƠNG MINH Đ 1870-1 Nam 2006 102 PHAN CHÍ U 1874-1 Nam 2000 103 BÙI TRÚC M 1877-1 Nữ 2007 104 TRẦN THỊ ANH T 1879-1 Nữ 2004 105 ĐINH CÔNG O 1881-1 Nam 1960 106 LÊ TẤN T 1884-1 Nam 2005 107 LÊ MỸ K 1900-1 Nữ 2006 108 NGUYỄN NGỌC TÔ H 1904-1 Nữ 1999 109 PHẠM THỊ N 1906-1 Nữ 1963 110 PHẠM GIA K 1909-1 Nam 2009 111 NGUYỄN MINH ANH T 1913-1 Nữ 2001 112 HOÀNG GIA H 1915-1 Nam 2007 113 HUỲNH NHẬT T 1921-1 Nam 2000 114 DƯƠNG THẢO L 1927-1 Nữ 2008 115 HÀ MINH K 1930-1 Nam 2008 116 LÊ THỊ MỸ T 1938-1 Nữ 2008 117 DƯƠNG QUANG T 1939-1 Nam 2007 118 LƯƠNG ĐẶNG QUANG D 1942-1 Nam 1994 119 HỒ N 1943-1 Nam 2008 162 STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH 120 PHAN TRẦN DUY K 1948-1 Nam 2005 121 NGUYỄN NGỌC LAN A 1950-1 Nữ 1986 122 LÊ TRÚC A 1953-1 Nữ 2009 123 ĐẶNG MINH T 1954-1 Nam 1997 124 NGUYỄN TRẦN L 1968-1 Nam 2005 125 NGUYỄN THỊ NGỌC O 1969-1 Nữ 1990 126 NGUYỄN VĂN K 1974-1 Nam 1993 127 HỒNG ĐÌNH P 1976-1 Nam 2007 128 PHẠM CÁT T 1984-1 Nam 2010 129 ĐINH C 1985-1 Nam 1949 130 TRẦN KHÁNH H 1987-1 Nam 2003 131 NGUYỄN THỊ THANH T 1990-1 Nữ 1983 132 PHẠM NGỌC MINH C 2005-1 Nữ 2007 133 LÊ K 2006-1 Nam 1997 134 NGUYỄN CHÍ M 2016-1 Nam 2005 135 NGUYỄN HẢI Đ 2018-1 Nam 2006 136 HỒ Ê 2019-1 Nam 1957 137 ĐẶNG NGỌC S 2023-1 Nam 2006 138 TRẢO THỊ THÚY H 2025-1 Nữ 1970 139 ĐỖ MINH C 2026-1 Nữ 2009 140 BÀNH KHƯƠNG D 2031-1 Nam 1997 141 PHẠM ĐÌNH L 2049-1 Nam 2009 142 TRẦN P 2056-1 Nam 2004 143 TRẦN TẤN H 2057-1 Nam 1937 144 ĐOÀN THỊ D 2064-1 Nữ 1954 145 HOÀNG LÊ TUẤN A 2068-1 Nam 1999 146 BÙI MẠNH K 2074-1 Nam 1999 147 BÙI NHƯ Q 2082-1 Nữ 2001 148 TRẦN ĐĂNG U 2085-1 Nam 2000 149 VŨ THỊ TRÂM A 2091-1 Nữ 2007 163 STT HỌ VÀ TÊN MÃ SỐ GIỚI TÍNH NĂM SINH 150 NGÔ THANH H 2092-1 Nam 2009 151 DƯƠNG THỊ NGỌC L 2097-1 Nữ 1975 152 KIM ĐĂNG K 2100-1 Nam 2008 153 NGUYỄN HỮU P 2114-1 Nam 1994 154 TRẦN THỊ THÙY D 2115-1 Nữ 2006 155 TRẦN THANH T 2140-1 Nữ 1995 156 NGUYỄN CÔNG T 2149-1 Nam 1984 157 NGUYỄN TẤN B 2151-1 Nam 2006 158 NGUYỄN MINH H 2155-1 Nam 2002 159 NGUYỄN THỊ KIM D 2160-1 Nữ 1969 160 NGUYỄN LÊ M 2166-1 Nam 2005 161 NGUYỄN XUÂN T 2170-1 Nữ 1969 162 TRẦN HUỲNH NHẬT T 2171-1 Nam 2005 163 TRẦN LÊ KHÁNH H 2173-1 Nam 1997 164 NGUYỄN PHẠM VÂN P 2186-1 Nữ 2005 165 PHẠM NGỌC H 2196-1 Nữ 1994 166 NGUYỄN HOÀI B 2202-1 Nam 2004 167 ĐINH NGỌC AN P 2223-1 Nam 2007 168 NGUYỄN HUỲNH TẤN H 2240-1 Nam 2005 169 DƯƠNG GIA V 2251-1 Nam 2008 170 LÊ NGUYỄN PHÚC A 2270-1 Nam 2007 171 PHAN ĐỖ NHẬT A 2284-1 Nữ 2008 172 NGUYỄN THỊ PHƯƠNG T 2291-1 Nữ 1987 173 PHẠM MINH K 2294-1 Nam 2007 174 VÕ NGỌC ANH T 258-1 Nữ 2002 175 HỒ PHƯỚC T 320-1 Nam 2001 176 PHẠM THỊ KIỀU M 346-1 Nữ 1995 177 NGUYỄN HOÀNG PHÚC N 562-1 Nam 1995 178 ĐOÀN TRÚC N 587-1 Nữ 2002 179 PHẠM NGUYỄN ĐÌNH K 888-1 Nam 2002 164 TP HCM, ngày 16 tháng 05 năm 2013 XÁC NHẬN CỦA BỆNH VIỆN TRUYỀN MÁU HUYẾT HỌC Xác nhận danh sách 341 bệnh nhân (BN), bao gồm 162 BN bệnh bạch cầu cấp dòng tủy 179 BN bệnh bạch cầu cấp dịng lympho có hồ sơ lưu trữ bệnh viện Truyền máu Huyết học TP HCM TRƯỞNG PHÒNG KẾ HOẠCH TỔNG HỢP TS BS NGUYỄN PHƯƠNG LIÊN 165 Phụ lục Kỹ thuật FISH 8.1 Phương pháp thực hiện: - mL mẫu tủy xương chống đông ACD heparin bệnh nhân thu hoạch trực tiếp không qua nuôi cấy để thu nhận tế bào bạch cầu cố định tế bào tiêu Tiêu tế bào đoạn dị biến tính máy ThermoBrite (Abbott, Hoa Kỳ) 75oC phút, sau ủ 37oC qua đêm (khoảng từ 18 đến 20 tiếng đồng hồ) Sau ủ, tiêu rửa để loại bỏ mẫu dò bắt cặp không đặc hiệu dung dịch 0,4 x SSC/ 0,3% NP-40 nhiệt độ 75oC phút, rửa dung dịch x SSC/ 0,1 % NP-40 nhiệt độ phòng phút Tiêu để khơ phủ 10 µL dung dịch DAPI II counterstain (Vysis) Đọc kết 200 tế bào để tìm bất thường kính hiển vi huỳnh quang 8.2 Tên loại probe sử dụng, nhà sản xuất: Sử dụng probe hãng VYSIS với tên loại sử dụng sau: - Trong bệnh bạch cầu cấp dịng lympho: LSI® TEL/AML1 ES Dual Color Translocation Probe – t(12;21) LSI® BCR/ABL ES Dual Color Translocation Probe– t(9;22) LSI® MLL Dual Color, Break Apart Rearrangement Probe – 11q23 LSI® TCF3/PBX1 Dual Color, Dual Fusion Translocation Probe – t(1;19) - Trong bệnh bạch cầu cấp dòng tủy: LSI® AML1/ETO Dual Color, Dual Fusion Translocation Probe – t(8;21) LSI® MLL Dual Color, Break Apart Rearrangement Probe – 11q23 LSI® CBFB Dual Color, Break Apart Rearrangement Probe – 16q22 LSI® PML/RARA Dual Color, Dual Fusion Translocation Probe– t(15;17) 8.3 Kính hiển vi: BX51 hãng Olympus 8.4 Phần mềm sử dụng để phân tích: ISIS (MetaSystems, Đức) ... VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHAN NGUYỄN THANH VÂN ỨNG DỤNG KỸ THUẬT KHUẾCH ĐẠI GIEN KHẢO SÁT CÁC TỔ HỢP GIEN THƯỜNG GẶP TRONG BỆNH LÝ BẠCH CẦU CẤP Chuyên ngành: Huyết... cứu với mục tiêu tổng quát sau: "Ứng dụng kỹ thuật khuếch đại gien khảo sát tổ hợp gien thường gặp bệnh lý bạch cầu cấp, góp phần phân loại nhóm tiên lượng bệnh theo dõi điều trị, bệnh viện Truyền... định tỷ lệ tổ hợp gien thường gặp lúc chẩn đốn nhóm bệnh bạch cầu cấp dòng tủy Xác định tỷ lệ tổ hợp gien thường gặp lúc chẩn đoán nhóm bệnh bạch cầu cấp dịng lympho Triển khai kỹ thuật PCR định