TÌM HIỂU QUÁ TRÌNH PHÂN LẬP GIỐNG VI SINH VẬT THUẦN CHỦNG

Tìm hiểu quá trình phân lập giống vi sinh vật thuần chủng bao gồm khái niểm phân lập vi sinh vật và vi sinh vật thuần chủng, vì sao phải phân lập vi sinh vật, nguyên liệu thiết bị và cách phân lập, nấm mốc Aspergillus oryzae, Aspergillus niger và Mucor, kiểm tra vết cấy, kiểm tra độ thuần chủng.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP

THỰC PHẨM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ

MINH

KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

NHÓM 14 GVHD: TRẦN THỊ MINH HÀ

TÌM HIỂU QUÁ TRÌNH PHÂN LẬP

GIỐNG VI SINH VẬT THUẦN

CHỦNG

KĨ THUẬT THỰC PHẨM 3

I Tổng quan

Vi sinh vật thuần chủng là gì???

Vi sinh vật thuần chủng là gì???

Phân lập vi sinh

vật là gì????

Phân lập vi sinh

vật là gì????

Khái niệm

Phân lập vi sinh vật là quá trình tách riêng các loài

vi sinh vật từ quần thể ban đầu và đưa về dạng

thuần khiết.

Đây là một khâu có ý nghĩa rất quan trọng trong việc nghiên cứu và ứng dụng vi sinh vật

Vi sinh vật ở dạng thuần khiết là giống vi sinh vật

được tạo ra từ 1 tế bào ban đầu.

Vì sao phải đưa vsv về dạng thuần khiết?

 Trong thiên nhiên hoặc trong các vật

phẩm nghiên cứu, vi sinh vật thường tồn

tại ở dạng hỗn hợp gồm nhiều loài khác

nhau

Muốn nghiên cứu về hình thái, sinh lý, lý

hoá hoặc sử dụng vào thực tiễn một loài

nào đó thì cần phải đưa chúng về dạng

thuần khiết. 

Để chọn được giống vsv thuần chủng, bước đầu tiên là phải phân lập chúng từ các nguồn tự nhiên:

nước, đất, không khí,…

Để chọn được giống vsv thuần chủng, bước đầu tiên là phải phân lập chúng từ các nguồn tự nhiên:

nước, đất, không khí,…

L.Pauteur và R.Koch đề ra nhiều phương pháp đặc biệt chủng thuần khiết dùng trong công nghiệp phát triển, nhất là tìm chất sản xuất chất kháng sinh mới

L.Pauteur và R.Koch đề ra nhiều phương pháp đặc biệt chủng thuần khiết dùng trong công nghiệp phát triển, nhất là tìm chất sản xuất chất kháng sinh mới

Việc phân lập các chủng thuần khiết mất nhiều thời gian và công sứcNgày nay người ta dùng “sàng lọc” vừa nhanh vừa hiệu quả

Việc phân lập các chủng thuần khiết mất nhiều thời gian và công sứcNgày nay người ta dùng “sàng lọc” vừa nhanh vừa hiệu quả

II.1 NGUYÊN LIỆU, MẪU VẬT

Nguồn tự nhiên: nước, không khí, đất, các

mô động thực vật, các vật liệu hữu cơ vô

cơ đã bị phân hủy

Môi trường thạch để nuôi cấy vi sinh vật, nước cất vô trùng để hòa tan mẫu

Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis

Cỏ khô cắt nhỏ, phân, nước sạch

Bình tam giác, nút bông, bếp đun (hay nồi viba), tủ ấm, kính hiển vi

Phân lập nấm mốc Aspergillus oryzae,

Aspergillus niger và Mucor

Cơm nguội, xôi làm mốc tương, bánh mì

để khô ít ngày, vỏ cam, chanh để lâu ngày

Que cấy đầu hình thước thợ, môi trường thạch nghiên thích hợp

Apergillus niger

Apergillus oyzae

III Nguyên tắc phân lập

 Kiểm tra giống vsv từ mẫu tự nhiên làm các huyền phù pha loãng, rồi gieo trên mặt hộp petri đựng môi trường thạch

dinh dưỡng

 Gieo cấy vi khuẩn đã pha loãng trên môi trường dinh dưỡng đặc trưng (2% thạch còn gọi là agar).

 Nuôi dưỡng trong điều kiện thích hợp

cho mọc các khuẩn lạc tách biệt nhau.

III Nguyên tắc phân lập

 Cấy tách từ khuẩn lạc mọc tách biệt

sang ống môi trường dinh dưỡng thạch nghiêng để thu nhận chủng vi khuẩn

thuần khiết (do Robert Koch đề ra).

 Để phân lập những chủng có tính chất đặc biệt (như chuyển hóa steroit), người

ta dùng hỗn hợp của nhiều chủng vi

sinh vật đem nuôi cấy trong môi trường

ta muốn thực hiện sự biến đổi Sau khi nuôi ta chiết xuất vào các sản phẩm,

phân tích theo phương pháp sắc ký.

Tạo ra các khuẩn lạc riêng rẽ từ quần thể VSV ban đầu

Phân lập VSV thuần khiết

Kiểm tra độ tinh khiết của khuẩn lạc

Nếu mẫu ban đầu ở dạng rắn thì phải chuyển

về dạng lỏng bằng cách:

Nghiền mẫu

Hòa tan mẫu vào nước cất vô trùng rồi pha loãng

Sau đó thực hiện như là mẫu dạng lỏng:

Tiếp tục pha loãng ở các nồng độ cần thiết

Cấy mẫu trên môi trường đặc trưng

1 TẠO RA CÁC KHUẨN LẠC RIÊNG RẼ

TỪ QUẦN THỂ VSV BAN ĐẦU

Phân lập vi sinh vật hiếu khí:

Hút 0,1 ml dịch mẫu đã pha loãng cho vào đĩa petri có môi trường thích hợp.Dùng que trải đều mẫu khắp mặt

thạch

Tiếp tục đối với đĩa thứ 2, thứ 3…

Ủ các đĩa trên ở nhiệt độ thích hợp trong một khoảng thời gian nhất định

ta sẽ thu được các khuẩn lạc riêng rẽ

2 PHÂN LẬP VSV THUẦN KHIẾT

Cấy trên thạch nghiêng

Sau khi vi sinh vật phát triển, chọn

các khuẩn lac riêng rẽ trong khối môi trường, dùng que cấy cắt cả khối môi trường rồi cấy vào môi trường lỏng

thích hợp

Kiểm tra vết cấy

Kiểm tra độ thuần chủng của các khuẩn lạc

3 KIỂM TRA ĐỘ TINH KHIẾT

CỦA KHUẨN LẠC

Nếu vết cấy có bề mặt và màu sắc đồng đều, thuần nhất chứng tỏ giống mới phân lập tinh khiết thì giữ lại.

Nếu vết cấy không thuần nhauts thì loại bỏ

Kiểm tra vết cấy

Kiểm tra độ thuần nhất của các khuẩn lạc

Chọn khuẩn lạc

Tách khuẩn lạc, hòa tan, pha loãng

Nhỏ một giọt dịch lên đĩa petri có môi

trườngDùng que trang trải đều khắp mặt đĩa

Ủ đĩa petriQuan sát

Tài liệu tham khảo

Bài 4: Phân lập- Nuôi cấy- Bảo quản

vi sinh vật, http://

tailieu.vn/doc/bai-so-4-phan-lap-nuoi-cay-bao-quan-vi-sinh-vat-972155.html

Thí nghiệm vi sinh vật học, ThS Lê Xuân Phương, https://

www.lhu.edu.vn